G實(shí)驗(yàn)和GM實(shí)驗(yàn)-2016-3-31劉恒

1、劉恒廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院主 要 內(nèi) 容一、血清G試驗(yàn)二、血清GM試驗(yàn)三、肺泡灌洗液GM、BG試驗(yàn) 大自然中有真菌30余萬(wàn)種，引起人類(lèi)疾病的致病真菌及條件致病真菌有280余種。近30年來(lái)，人類(lèi)生活的顯著變革創(chuàng)造了真菌感染的機(jī)會(huì)，隨著社會(huì)的老齡化、廣譜抗生素、抗腫瘤藥、免疫抑制劑、介入治療的廣泛應(yīng)用，器官移植的大量開(kāi)展，尤其是獲得性免疫缺陷綜合癥（ARDS）的流行，急性侵襲性真菌感染明顯增多。 -繆曉輝,翁心華.全國(guó)首屆深部真菌感染學(xué)術(shù)會(huì)議紀(jì)要.中華傳染病雜志，2005,23:15-216.-Martin GS et al. N Engl J Med 2003；348:1546-54.流行病學(xué)

2、與變遷胡必杰.侵襲性真菌感染的流行病學(xué)與變遷.2007真菌感染組織分布J Med Assoc Thal，2007，90（12）：2630-2637.劉又寧等.中華結(jié)核和呼吸雜志.2011.34(2):86-90肺部真菌病原體分布結(jié)論：結(jié)論： 我國(guó)肺真菌病前5位致病原依次為曲霉菌、念珠菌、隱球菌、孢子菌及毛霉菌曲霉菌、念珠菌、隱球菌、孢子菌及毛霉菌，其中念珠菌屬中以白色念珠菌及熱帶念珠菌為多。一、血清G試驗(yàn)1.血清G試驗(yàn)原理2.血清G試驗(yàn)的臨床價(jià)值3.血清G試驗(yàn)檢測(cè)方法4.血清G試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況5.血清G試驗(yàn)假陰性的情況6.血清G試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限真菌病早期發(fā)病隱匿，癥狀與細(xì)菌、病毒感染相似，給其

3、診斷帶來(lái)不便，早期診斷真菌病比較困難。傳統(tǒng)的真菌實(shí)驗(yàn)室診斷為沙保羅培養(yǎng)基培養(yǎng)24、48h，根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察確定是否為真菌感染。但此法耗時(shí)長(zhǎng)、陽(yáng)性率低，很難早期發(fā)現(xiàn)真菌感染。葡聚糖廣泛分布于多種真菌細(xì)胞壁中，為真菌的特有成分，其中（1-3）-D-葡聚糖占真菌胞壁成分50%以上，因此當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后，經(jīng)巨噬細(xì)胞吞噬、消化后，（1-3）-D-葡聚糖可從胞壁中釋放，使得血液或其他液體中（1-3）-D-葡聚糖含量增高，經(jīng)過(guò)檢測(cè)（1-3）-D-葡聚糖的含量能夠及時(shí)反應(yīng)真菌感染情況。血清G試驗(yàn)-Bellanger A-P,et al.Retrospective assessment of -d-

4、(1,3)-glucan for presumptive diagnosis of fungal infectionsJ.APMIS,2011，119(4/5):280-286-鄧林強(qiáng),余理智,熊章華,等.血漿(1-3)-D葡聚糖檢測(cè)和真菌培養(yǎng)在診斷深部真菌感染的臨床價(jià)值J.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(6):601-602.（1-3）-D-葡聚糖含量檢測(cè)與臨床診斷對(duì)比差異不明顯P0.051.1 血清G試驗(yàn)原理G試驗(yàn)：檢測(cè)（1-3）-D-葡聚糖的試驗(yàn)。研究發(fā)現(xiàn)：馬蹄鱟（hu）凝血系統(tǒng)中凝血酶原G因子能夠識(shí)別這種葡聚糖，是（1-3）-D-葡聚糖的天然檢測(cè)者。（1-3）-D-葡聚糖細(xì)胞核（1-3

5、）-D-葡聚糖-張鵬等.血漿（1-3）-D-葡聚糖檢測(cè)對(duì)真菌感染的診斷價(jià)值J.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床.2012.9.(5):564-566.1.2 血清G試驗(yàn)的臨床價(jià)值(1 ,3)-D 葡聚糖為真菌細(xì)胞壁成分,適用于除隱球菌和接合菌（毛霉菌）外的所有深部真菌感染的早期診斷，尤其是念珠菌和曲霉菌，但不能確定菌種。診斷侵襲性真菌感染（如侵襲性念珠菌病、侵襲性曲霉菌病、肺孢子菌肺炎等）的方法之一。1.3 血清G試驗(yàn)檢測(cè)方法 Fungitec G test 陽(yáng)性閾值為20ng/L 敏感性67-100% 特異性84-100% Glucatell test 陽(yáng)性閾值為60ng/L或80ng/L 敏感性70-80%

6、 特異性90%左右1.4 血清G試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況 使用纖維素膜進(jìn)行血透時(shí)，標(biāo)本接觸過(guò)含有葡聚糖的材料 ; 化療或放療引起的粘膜炎癥，使得食物中（1-3）-D-葡聚糖通過(guò)胃腸道粘膜進(jìn)入血液循環(huán) ; 使用真菌為原料制成的抗生素，如多粘菌素等; 某些抗腫瘤藥物中蘑菇聚糖，K多聚糖等成分含有（1-3）-D-葡聚糖類(lèi)似物 ; 操作者處理標(biāo)本時(shí)存在污染，如紗布棉球等污染。1.5 血清G試驗(yàn)假陰性的情況 隱球菌具有厚壁包膜，生長(zhǎng)緩慢，導(dǎo)致假陰性； 局灶性曲菌病，（1-3）-D-葡聚糖很少釋放入血； 抗真菌藥物的使用。1.6 血清G試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限優(yōu)勢(shì)： 鑒別侵襲性感染與定植； 不受機(jī)體免疫狀態(tài)影響，早于臨床

7、診斷平均4天；是早期真菌感染的敏感生物標(biāo)志。局限： 不能區(qū)分真菌的種類(lèi)。二、血清GM試驗(yàn)1.血清GM試驗(yàn)原理2.血清GM試驗(yàn)的臨床價(jià)值3.血清GM試驗(yàn)檢測(cè)方法4.血清GM試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況5.血清GM試驗(yàn)假陰性的情況6.血清GM試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限2.1 血清GM試驗(yàn)的原理GM試驗(yàn)檢測(cè)的是半乳甘露聚糖（glactomannan，GM），主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷；半乳甘露聚糖是廣泛存在于曲霉和青霉細(xì)胞壁的一種多糖，菌細(xì)胞壁表面菌絲生長(zhǎng)時(shí)，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原；檢測(cè)法采用雙抗體夾心法，采用小鼠單克隆抗體EBA-2，檢測(cè)人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。2.3 血清GM

8、試驗(yàn)假陽(yáng)性的情況 使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦； 新生兒和兒童（雙歧桿菌定植、食用乳制品含有半乳甘露聚糖）； 血液透析，接觸含有半乳甘露聚糖的材料； 自身免疫性肝炎等； 食用含有半乳甘露聚糖的牛奶等高蛋白食物。2.4GM試驗(yàn)假陰性的情況 釋放入血循環(huán)中的半乳甘露聚糖并不持續(xù)存在而是會(huì)很快清除； 以前使用了抗真菌藥物； 病情不嚴(yán)重； 非粒細(xì)胞缺乏的患者。 2.5 血清GM試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)和局限 優(yōu)勢(shì)： 鑒別曲霉菌侵襲性感染與定植； 早于臨床癥狀和影像學(xué)異常1周； GM試驗(yàn)診斷侵襲性曲霉感染的敏感度高于G試驗(yàn)； 半乳甘露聚糖釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度； 血清中存在時(shí)間較短，可作為療

9、效監(jiān)測(cè)。 局限： 不能區(qū)分曲霉菌的種類(lèi)。G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的聯(lián)合使用G試驗(yàn)以及GM試驗(yàn)不足之處較多，會(huì)產(chǎn)生較多的假陽(yáng)性，從而造成檢出率較低的情況。兩種方法的聯(lián)合診斷，能夠有效降低假陽(yáng)性的產(chǎn)生，提高診斷檢出率，降低誤診率、漏診率，從而提高其的敏感性以及特異性。-臧琳琳.G試驗(yàn)聯(lián)合GM試驗(yàn)在惡性血液病侵襲性真菌感染診斷中的價(jià)值分析J.世界臨床醫(yī)學(xué).2015.9(12).G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的聯(lián)合使用種屬種屬G G試驗(yàn)試驗(yàn)GMGM試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)钪榫鷮倌钪榫鷮夔牭毒鷮夔牭毒鷮匐[球菌屬隱球菌屬曲霉菌屬曲霉菌屬青霉青霉/ /擬青霉擬青霉接合菌綱（毛霉菌）接合菌綱（毛霉菌）同時(shí)測(cè)定G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)有助于早期診斷侵襲性

10、真菌感染！主 要 內(nèi) 容一、血清G試驗(yàn)二、血清GM試驗(yàn)三、肺泡灌洗液GM、BG試驗(yàn)三、肺泡灌洗液（BAL）的GM試驗(yàn)以半乳甘露聚糖(GM)值為1.0作為陽(yáng)性界值時(shí)，BALF和血清GM的特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均可達(dá)100,但BALF GM試驗(yàn)的敏感度和陰性預(yù)測(cè)值(66.7和 90.1)明顯高于血清GM試驗(yàn)(28.6和81.O),可見(jiàn)BALF GM檢測(cè)有利于侵襲性肺曲霉?。↖PA）的早期診斷。-杜娟等.支氣管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖檢測(cè)對(duì)侵襲性肺曲霉病的早期診斷價(jià)值J.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志.2013.29(10):1677-1679.三、肺泡灌洗液（BAL）的GM試驗(yàn)界值降低時(shí)敏感性增高，有利于早期診斷及治療,但特異性相對(duì)較差,有可能出現(xiàn)假陽(yáng)性,導(dǎo)致過(guò)度治療;界值升高時(shí)檢測(cè)的特異性增高,但敏感性稍差,從而導(dǎo)致治療不及時(shí)、延誤病情。肺泡灌洗液（BAL）GM試驗(yàn)結(jié)論： 侵襲性肺部真菌感染重要的檢測(cè)方法