大豆異黃酮檢測(cè)

1、大豆異黃酮檢測(cè)的研究進(jìn)展HPLC法測(cè)定異黃酮含量1 大豆異黃酮是大豆生長過程中形成的一類次生代謝產(chǎn)物。大豆異黃酮在通常情況下為固體，熔點(diǎn)在100 以上。常溫下性質(zhì)穩(wěn)定，呈黃白色粉末狀，無毒，有輕微苦澀味，在醇類、酯類和酮類溶劑中有一定的溶解度，不溶于水，難溶于石油醚、正已烷等。2 大豆異黃酮在強(qiáng)酸、高溫或酶存在下可水解去掉葡萄糖基而轉(zhuǎn)變成葡萄糖苷配基形式(游離大豆異黃酮)。據(jù)報(bào)道游離型大豆異黃酮(苷元)約占異黃酮總量的23 ，主要以大豆黃素(Daidzein)、染料木素(Glycitein)和黃豆黃素(Genistein)形式存在。34抗癌作用抗氧化作用具有對(duì)骨組織密度的陽性反應(yīng)，有效防治骨質(zhì)

2、疏松癥；具有弱的雌激素活性，可用于改善婦女更年期癥狀；具有抗酸化能力，能增強(qiáng)心肌收縮力，增加冠狀動(dòng)脈血流量，對(duì)心臟病的危害有良好預(yù)防效果；可降低體內(nèi)膽固醇和脂肪量，并能影響脂肪代謝，防止高血壓、高血脂，預(yù)防心血管疾癥發(fā)生。 除上述功能、作用外，異黃酮還具有抗真菌性從而抑制真菌活性的功能。研究表明，大豆異黃酮具有雌激素調(diào)節(jié)作用，能夠改善婦女皮膚(美容)并對(duì)糖尿病及其他并發(fā)癥、腎肝疾病、牙周炎等有預(yù)防和治療的功效。保健作用5 人體資料表明：可刺激絕經(jīng)前婦女乳腺增生和子宮內(nèi)膜增生?？赡軙?huì)降低男性血管內(nèi)皮功能孕婦攝入可致宮內(nèi)胎兒造血細(xì)胞DNA損傷增加子代生殖系統(tǒng)疾病發(fā)生的危險(xiǎn)性 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明：致癌作用

3、生殖內(nèi)分泌毒性其他毒性：可能具有免疫毒性；可能具有神經(jīng)毒性；可能具有細(xì)胞毒性；可能具有潛在的遺傳毒性。毒性作用：6測(cè)定方法薄板層析法：操作簡(jiǎn)單，定量檢測(cè)精度低多用于定性分析，適用于生產(chǎn)過程的中間物料及無精度要求的檢測(cè)。紫外分光光度法：分為單波長法和三波長法，兩者步驟相似，操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，但特異性較差，主要用于樣品中總大豆異黃酮的測(cè)定。高效液相色譜法：目前應(yīng)用最廣泛，為測(cè)定保健品中大豆異黃酮的國家標(biāo)準(zhǔn)法，分離效率高，準(zhǔn)確度精密度高，測(cè)定樣品范圍廣，主要用于單個(gè)大豆異黃酮樣品的檢測(cè)，如質(zhì)量檢驗(yàn)及科學(xué)研究等。7測(cè)定方法色相色譜法：進(jìn)樣量少，敏感性、選擇性及特異性較高，但需制備衍生物，操作復(fù)雜，耗

4、時(shí)長，儀器昂貴。毛細(xì)管電泳法：快速經(jīng)濟(jì)，選擇性高，樣品前處理簡(jiǎn)單分離效率高。免疫檢驗(yàn)法：以酶聯(lián)免疫法為基礎(chǔ)，測(cè)定中根據(jù)標(biāo)記物和干擾物熒光壽命的差異，選擇性的測(cè)定標(biāo)記物的熒光信號(hào)。8 以下介紹檢測(cè)保健食品中大豆異黃酮的測(cè)定方法 GB 23788-2009-T 高效液相色譜法9 固體樣品、半固體樣品：固體樣品粉碎、磨細(xì)（過80目篩）、混勻，半固體樣品混勻，稱取樣品0.05g0.5g（精確至0.1mg），用80%甲醇溶液溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加入80%甲醇溶液至接近刻度。 液體樣品：吸取混勻的液體樣品0.55.0mL于50mL容量瓶中，加入甲醇溶液至接近刻度。 將上述樣品溶液用超聲波振蕩器振

5、蕩20min，用80%甲醇定容，搖勻。取樣品溶液置于離心管中，離心機(jī)離心15min（轉(zhuǎn)速大于8000r/min）。取上清液用濾膜過濾，收集濾液備用。樣品處理10大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液將大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素和染料木素六種標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液按1:1:1:1:1:1的比例配成標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，待用。 分別吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于10mL容量瓶中，加入等體積水，用50%二甲基亞砜溶液定容，配成濃度分別為0.0mg/L， 8.0mg/L ，16.0mg/L，24.0mg/L，32.0mg/L，40.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。11色譜條件色

6、譜柱：C18,4.6mm250mm，粒度5m 不銹鋼色譜柱，也可使用分離效果相當(dāng)?shù)钠渌讳P鋼柱。流動(dòng)相：A：乙腈 B：磷酸水溶液（pH=3.0） 波長：260nm。進(jìn)樣量：10L。柱溫：3012定性 分別將大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素、染料木素的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液稀釋10倍后，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)單一標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間，對(duì)樣品溶液中的組分進(jìn)行定性。測(cè)定13測(cè)定定量 將大豆異黃酮混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液在色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，繪制以峰面積為縱坐標(biāo)、混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液濃度為橫坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣品溶液注入高效液相色譜儀中，保證樣品溶液中大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素和染料木素的響應(yīng)值均在工作曲線的線性范圍內(nèi)，由標(biāo)準(zhǔn)曲線差得樣品溶液中大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素和染料木素的濃度。14樣品中大豆異黃酮各組分大豆苷（X1）、大豆黃苷（X2）、染料木苷（X3）、大豆素（X4）、大豆黃素（X5）和染料木素（X6）的含量分別按下式計(jì)算：式中：Xi樣品中大豆異黃酮單一組分的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）；Ci根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的大豆苷（或大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素和染料木素）的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V樣品稀釋液總體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；m固體、半固體楊南平質(zhì)量的數(shù)值，單位