DB11_T 1930-2021 放射工作人員健康檢查染色體畸變和微核檢測質(zhì)量控制規(guī)范

1、ICS 13.100CCS C 60DB11北京市地方標準DB11/T 19302021放射工作人員健康檢查染色體畸變和微核檢測質(zhì)量控制規(guī)范Quality control specification for tests of chromosome aberration and micronucleus in radiation workers health examinations2021 - 12 - 28 發(fā)布2022 - 04 - 01 實施北京市市場監(jiān)督管理局發(fā) 布DB11/T 19302021DB11/T 19302021III目次前言II范圍1規(guī)范性引用文件1術(shù)語和定義1基本要求1

2、實驗室及儀器設備要求3染色體畸變檢測質(zhì)量控制3微核檢測質(zhì)量控制7附錄 A （資料性） 人外周血淋巴細胞微核檢測規(guī)程8附錄 B （資料性） 人外周血淋巴細胞微核檢測原始記錄10附錄 C （資料性） 人外周血淋巴細胞微核檢測報告12前言本文件按照GB/T 1.12020標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由北京市衛(wèi)生健康委員會提出。本文件由北京市衛(wèi)生健康委員會歸口。本文件由北京市衛(wèi)生健康委員會組織實施。本文件起草單位：北京市疾病預防控制中心本文件主要起草人：李煜、羅環(huán)、梁婧、楊夢迪、王如剛、趙芳紅、房云、蔡衛(wèi)紅、李隆飛、趙金萍、楊紅艷、況海濤、于建平、高建華。DB

3、11/T 19302021DB11/T 19302021 PAGE 11 PAGE 12放射工作人員健康檢查染色體畸變和微核檢測質(zhì)量控制規(guī)范1 范 圍本文件規(guī)定了放射工作人員健康檢査中，開展人外周血淋巴細胞染色體畸變檢測和微核檢測的基本要求、實驗室及儀器設備要求以及檢測的質(zhì)量控制。本文件適用于放射工作人員健康檢査中外周血淋巴細胞染色體畸變和微核檢測的質(zhì)量控制。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 28236 染色體畸變估

4、算生物劑量方法WS/T 187 淋巴細胞微核估算受照劑量方法GBZ 98 放射工作人員健康要求及監(jiān)護規(guī)范GBZ 112 職業(yè)性放射性疾病診斷總則GBZ/T 248 放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價術(shù)語和定義WS/T 187 界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1染色體畸變 chromosomal aberration人員或細胞受到一定劑量電離輻射作用后，細胞中染色體發(fā)生的數(shù)量或結(jié)構(gòu)上的改變。3.2微核細胞 micronucleus cell胞質(zhì)中含有微核的雙核淋巴細胞?；疽髴嶒炇以焊蟹揽刂贫取⑨t(yī)療廢棄物處理制度、手衛(wèi)生制度等。應每年參加職業(yè)健康檢查質(zhì)量

5、控制機構(gòu)組織開展的實驗室間比對（包括復核），獨立完成，相關材料需歸檔保存。技術(shù)人員要求遺傳實驗室應有 2 名以上專業(yè)技術(shù)人員，專業(yè)技術(shù)人員應能及時準確完成檢測工作。技術(shù)人員知識技能要求技術(shù)人員應了解、熟悉或掌握的理論知識包括但不限于以下內(nèi)容：掌握實驗室基本管理條例和生物安全知識；了解或熟悉相關法律、法規(guī)、國家及行業(yè)標準，包括中華人民共和國職業(yè)病防治法、職業(yè)健康檢查管理辦法、中華人民共和國生物安全法、GB/T 28236、職業(yè)性放射性疾病診斷總則（GBZ 112）等，掌握放射工作人員健康要求及監(jiān)護規(guī)范（GBZ 98）、放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價（GBZ/T 248

6、）、WS/T 187 等；熟悉電離輻射生物效應的基礎知識、放射工作人員健康檢查內(nèi)容；掌握外周血淋巴細胞染色體畸變及微核檢測的基本原理，明確其在輻射損傷評估中的作用；了解電離輻射誘發(fā)人淋巴細胞染色體畸變的劑量-效應曲線建立和用其估算生物劑量的方法。技術(shù)人員應掌握的專業(yè)技能包括但不限于以下內(nèi)容：樣本接收、登記、保存程序；常用試劑的配制方法；生物安全柜、超凈工作臺、顯微鏡及攝像裝置等儀器設備的正確使用與維護保養(yǎng)；配備全自動染色體掃描分析系統(tǒng)的實驗室，應熟練掌握相關軟件的使用；細胞培養(yǎng)方法；染色體和微核制片技術(shù)；染色體閱片應掌握性別識別、核型分析、染色體畸變和染色單體畸變的識別，使用規(guī)范符號記錄染色體

7、畸變類型；微核閱片應掌握識別雙核淋巴細胞和微核；顯微攝影技術(shù)；準確記錄染色體畸變細胞及微核細胞坐標；準確完成報告和評價。技術(shù)人員的培訓與考核檢查機構(gòu)需對接受培訓人員進行理論知識及專業(yè)技能考核，染色體、微核制片合格率需達到80%以上，染色體畸變和微核識別準確率需達到 90%以上，全部考核合格后方可上崗。每年組織一次實驗室內(nèi)對相關技術(shù)能力的考核，進行能力確認。技術(shù)人員至少每兩年參加一次職業(yè)健康檢查質(zhì)量控制機構(gòu)組織的實驗室間比對。儀器設備的管理實驗室主要儀器應建立檔案，并有標準操作程序。實驗室主要儀器有使用及維護保養(yǎng)記錄。實驗室儀器或設備按要求每年檢定或校準，使其運行正常。標本片、電子圖片、原始記錄

8、、報告和檔案的管理有染色體和微核標本片、原始記錄、報告和檔案的存放地點，有專門的電子存儲設備用于存儲圖片。標本片存放期限為 2 年，原始記錄和報告存放期限為 6 年，圖片等電子文件存放 15 年。職業(yè)健康檢查檔案保存時間應當自放射工作人員最后一次職業(yè)健康檢查結(jié)束之日起不少于 15年。實驗室及儀器設備要求實驗室制片室面積宜大于20 m2，應配備排風裝置、水平離心機、負壓移液裝置或真空吸液泵、水浴鍋等設備，宜選配細胞自動收獲儀、自動制片機、自動染片機、自動接種儀等。細胞培養(yǎng)間應配置生物安全柜或超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱等。顯微閱片室應配置光學顯微鏡及攝像系統(tǒng)，宜選配全自動染色體掃描分析系統(tǒng)。儀器

9、設備及技術(shù)指標要求儀器設備及技術(shù)指標符合表1要求。表1 儀器設備及技術(shù)指標要求儀器設備技術(shù)指標要求必備/選配生物安全柜或超凈工作臺超凈工作臺首選雙人雙面、垂直送風必備恒溫培養(yǎng)箱應選擇隔水式恒溫培養(yǎng)箱，二氧化碳培養(yǎng)箱更佳必備離心機應選擇可放置 15 mL 離心管的水平式離心機必備光學顯微鏡自帶電源和坐標尺，油鏡清晰（63 倍或 100 倍），配備高分辨率數(shù)碼攝像裝置必備冰箱4普通冰箱和-20低溫冰箱必備電子天平可讀性 1 mg必備負壓移液裝置或真空吸液泵/必備排風裝置通風櫥、排風罩等，使工作場所有毒物質(zhì)濃度符合工作場所有害因素職業(yè)接觸限值 第1部分：化學有害因素（GBZ 2.1）要求必備便攜式培

10、養(yǎng)箱溫度可控制在 18-24選配滅菌設備電熱箱（有空氣強制對流裝置）、熱壓蒸汽滅菌器或環(huán)氧乙烷滅菌器等選配渦旋混合器/選配水浴鍋（箱）/選配全自動染色體掃描分析系統(tǒng)、細胞自動收獲儀、自動制片機、自動染片機、自動接種儀/選配染色體畸變檢測質(zhì)量控制染色體畸變檢測染色體畸變檢測操作宜參照 放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價（GBZ/T 248）的規(guī)定。應采用培養(yǎng)開始加秋水仙素的方法。樣本的采集、運輸和保存血液采集應在所有放射性檢查之前。血液運輸和保存的最佳溫度為1824。樣本采集后應盡早接種，當日無法接種的樣本保存時間不宜超過72 h?？山臃N到含植物凝集素培養(yǎng)基后于420保存

11、。每份樣本應有唯一編號，編碼規(guī)則由各實驗室制定。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制更換廠家或批次的培養(yǎng)基均應對至少兩個血液樣本進行比對實驗，并有實驗記錄。培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制血液標本應在37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h52 h，培養(yǎng)箱內(nèi)應放置溫度計進行溫度監(jiān)測。中老年人血液樣本宜接種多份平行樣或適當延長培養(yǎng)時間。染色體制片質(zhì)量控制合格中期細胞的選擇染色體數(shù)目為461；染色體分散良好，長短粗細適中，背景干凈，各條染色體可清楚辨認。見示例圖1、圖2和圖3（1000）。圖 1 正常染色體圖 2 雙著絲粒體和無著絲粒斷片圖 3 著絲粒環(huán)和無著絲粒斷片出現(xiàn)以下情況的中期細胞不宜作計數(shù)分析：染色體數(shù)目少于 45 或多于 47 條；在

12、同一細胞內(nèi)染色體過于分散，不能在一個油鏡視野內(nèi)觀察到；染色體形態(tài)過度細長或過度短粗；染色體呈扭曲狀或緊縮成團；染色體分散不良，重疊太多；染色太深不能鑒別染色單體交叉重疊；同一條染色體的兩條染色單體間距離過大。染色體制片每樣本能檢出不少于200個合格中期分裂細胞。閱片的質(zhì)量控制染色體畸變的表示符號應符合以下要求：畸變類型及表示符號應符合表 2 要求；若細胞中出現(xiàn)不同數(shù)目的雙著絲粒體、著絲粒環(huán)、三著絲粒體以及無著絲粒體，表示符號應符合表 3 要求。表 2 染色體畸變類型及表示符號符號染色體畸變符號染色單體畸變含義含義dic雙著絲粒體ctb單體斷裂tri三著絲粒體ctg單體裂隙r著絲粒環(huán)ctd單體缺

13、失ace無著絲粒體cte單體互換ar無著絲粒環(huán)tr三射體f無著絲粒斷片qr四射體min微小體t相互易位inv倒位del缺失csb染色體斷裂csg染色體裂隙rogue cell惡棍細胞rob羅伯遜易位表3 細胞染色體畸變及表示方法細胞染色體畸變表示方法1 個 dic/r 和 1 個acedic(1)/r(1)1 個 dic/r ，無acedic(0)/r(0)2 個 dic/r 和 1 個acedic(1)+dic(0)/r(1)+r(0)2 個 dic/r 和 3 個ace2dic(1)+ace/2r(1)+ace1 個 dic，1 個r，1 個 acedic(1)+r(0)/dic(0)+r

14、(1)1 個 tri，2 個acetri(2)拍攝及原始記錄應符合以下要求：人工閱片的實驗室需對畸變細胞拍照，并在原始記錄和圖片文件名中標明顯微鏡編號、樣本編號、畸變細胞坐標、畸變類型和數(shù)目；有全自動染色體掃描分析系統(tǒng)的實驗室需要在原始記錄上記錄顯微鏡編號、樣本編號、畸變細胞號、畸變類型和數(shù)目，對畸變細胞標注后保存，并需保存所有樣本高倍中期細胞圖片；一個細胞的所有染色體應在一張圖片內(nèi)，完整展現(xiàn)一個細胞的染色體全貌。閱片的數(shù)量應符合以下要求：對于人工閱片的實驗室，每人每天分析 14 個樣本為宜；具備全自動染色體掃描分析系統(tǒng)的實驗室每天閱片數(shù)量不設限制；在儀器使用記錄上應記錄每天閱片數(shù)量并簽字。如

15、全自動染色體掃描分析系統(tǒng)拍攝到雙著絲粒體或者著絲粒環(huán)等畸變，應該將此分裂相再次放到顯微鏡下并調(diào)整微調(diào)旋鈕進行人工鏡檢，仔細辨認予以鑒定，并通過核型分析軟件確認。如果使用雙著絲粒自動掃描分析系統(tǒng)識別雙著絲粒體，仍需經(jīng)人工分析判定，不應僅通過軟件識別。如果在分析100個中期分裂細胞中發(fā)現(xiàn)有雙著絲粒體、著絲粒環(huán)、穩(wěn)定性染色體畸變或3個及以上無著絲粒體，宜另外追加分析100個細胞，并計算此200個細胞的染色體畸變率進行結(jié)果評價，或通知受檢者復查。染色體畸變應由兩名以上技術(shù)人員復核確認。原始記錄的格式宜參照放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價（GBZ/T 248）。對本年度拍攝的體

16、檢染色體圖片抽檢，識別準確率應達到90%以上。報告的質(zhì)量控制報告的格式宜參照放射工作人員職業(yè)健康檢查外周血淋巴細胞染色體畸變檢測與評價（GBZ/T 248）。檢測結(jié)果異常者應附標注的畸變圖像。報告采取分析人、復核人雙人簽字。應在體檢結(jié)束之日起25個工作日內(nèi)出具報告。微核檢測質(zhì)量控制微核檢測應采用胞質(zhì)分裂阻滯法（CB 微核法）進行微核檢測，操作規(guī)程宜參照 WS/T 187 和附錄 A 。樣本的采集、運輸和保存、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制樣本的采集、運輸和保存應符合6.2.1和6.2.2的要求。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制應符合6.3的要求。試劑松胞素-B 的質(zhì)量控制松胞素-B 配制、保存和加入培養(yǎng)體系時均需避光。如更

17、換試劑廠家應對至少兩個血液樣本進行比對實驗，并有實驗記錄。微核制片質(zhì)量控制雙核淋巴細胞的判斷應符合以下要求：雙核淋巴細胞胞漿完整；胞漿和胞核能明確區(qū)分；一個雙核淋巴細胞胞漿與鄰近細胞的胞漿界限清楚；位于一個細胞質(zhì)內(nèi)、互相不連接的兩個獨立的核，如果有一個或多個核質(zhì)橋連接，橋不寬于主核的 1/4；兩個核的大小接近，色度深淺相同；兩個核不重疊，如果重疊必須能識別各自的邊緣。微核制片每樣本能檢出不少于1000個合格雙核淋巴細胞。閱片的質(zhì)量控制微核的判斷標準：見示例圖4、圖5和圖6（400）。微核直徑為主核直徑的 1/16 到 1/3；微核呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)與主核相同；微核與主核不連接，如有重疊或相切

18、，必須能看到各自的邊緣；微核染色與主核一致或略淺；微核不折光，與染料顆粒等人工產(chǎn)物相區(qū)別。 圖 4 正常雙核淋巴細胞圖 5 1 個細胞含 1 個微核圖 6 1 個細胞含 3 個微核拍攝及原始記錄應符合以下要求：人工閱片的實驗室需對微核細胞拍照，并在原始記錄上記錄顯微鏡編號、樣本編號、微核細胞坐標；使用微核自動掃描分析系統(tǒng)的實驗室需要在原始記錄上記錄顯微鏡編號、樣本編號、微核細胞號，并需保存所有樣本雙核淋巴細胞圖片。閱片的數(shù)量應符合以下要求：對于人工閱片的實驗室，每人每天分析不宜超過20個樣本；具備微核自動掃描分析系統(tǒng)的實驗室每天閱片數(shù)量不設限制；在儀器使用記錄上應記錄每天閱片數(shù)量并簽字。使用微

19、核自動掃描分析系統(tǒng)的實驗室需對雙核淋巴細胞和微核圖像人工分析判定，不應僅通過軟件識別。原始記錄的格式宜參照附錄B。對本年度拍攝的體檢微核細胞圖片抽檢，識別準確率應達到90%以上。報告的質(zhì)量控制報告的格式宜參照附錄C。報告采取分析人、審核人雙人簽字。應在體檢結(jié)束之日起25個工作日內(nèi)出具報告。附 錄 A（資料性）人外周血淋巴細胞微核檢測規(guī)程微核檢測試劑準備松胞素-B的配制將 5 mg松胞素-B溶于2.5 mL二甲基亞砜（DMSO）中，配成終濃度 2 g/L的儲存液，-20避光凍存。用時將儲存液融化，吸取0.3 mL，加入1.7 mL生理鹽水中，即為終濃度300 mg/L的工作液。配制過程需避光。低

20、滲液氯化鉀（KCl）的配制稱取氯化鉀5.59 g，加入去離子水使其充分溶解，定容到1000 mL，配成0.075 mol/L 氯化鉀溶液，常溫保存?zhèn)溆谩９潭ㄒ旱呐渲迫〖状?、冰乙酸，配成體積比3:1的固定液。固定液需在用前新鮮配制。全血培養(yǎng)外周靜脈血采集體檢時靜脈血的采集應在所有放射性檢查前進行。用肝素抗凝采血管采集受檢者靜脈血約2 mL。全血培養(yǎng)步驟在培養(yǎng)瓶或離心管上編號并注明培養(yǎng)開始時間和日期。將采集的靜脈血0.3 mL0.5 mL加入到含5 mL RPMI-1640培養(yǎng)液中，輕輕搖勻，370.5恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)40 h44 h后，加入松胞素-B 至終濃度6 mg/L，繼續(xù)培養(yǎng)到66

21、h72 h。微核標本制備低滲將培養(yǎng)后細胞于離心管以1000 r/min1500 r/min (約200 g250 g)離心8 min10 min后，取出離心管，用吸管輕輕吸去上清液，每管加入8 mL經(jīng)37預溫的0.075 mol/L KCl，將細胞團塊輕輕吹打混勻。預固定低滲完畢，立即每管加入1 mL新配制的固定液，用吸管吹打混勻，以1000 r/min1500 r/min(約200 g250 g)離心8 min10 min。第一次固定取出離心管，用吸管吸去上清液，每管中加入 8 mL 固定液，用吸管快速吹打細胞團塊并充分吹打混勻，常溫下固定 20 min30 min，以 1000 r/min1500 r/min(約 200250 g)離心 8 min10 min。第二次固定取出離心管，重復第一次固定的操作。制片取出離心管，吸去上清液，根據(jù)細胞團塊的大小每離