獸醫(yī)微生物學實習new

1、獸醫(yī)微生物學實習腸桿菌科1實習報告書寫格式進入教務處網(wǎng)站“熱點工作” “常用表格下載” 左下角“實習教學資料” “14 南京農(nóng)業(yè)大學實習報告統(tǒng)一格式”2一、目的要求1 了解大腸桿菌和沙門氏菌（變形和產(chǎn)氣）形態(tài)與染色特性以及主要培養(yǎng)特性； 2 熟悉大腸桿菌和沙門氏菌（變形和產(chǎn)氣）常規(guī)微生物學診斷法； 3 掌握大腸桿菌和沙門氏菌（變形和產(chǎn)氣）生化試驗的方法和原理； 4 熟悉大腸桿菌和沙門氏菌（變形和產(chǎn)氣）在選擇性和鑒別培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn)； 3二、實驗材料1.菌種：大腸桿菌和沙門氏菌混合液 產(chǎn)氣腸桿菌和變形桿菌混合液2.培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基 SS平板 麥康凱平板 三糖鐵高層斜面 蛋白胨水 葡萄糖蛋白

2、胨水 3. 生化管：葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、 甘露醇、衛(wèi)矛醇、枸櫞酸鹽、H2S、尿素4. 生化試劑：吲哚試劑， M. R 、 V . P 試劑4三、內(nèi)容與安排一、 配培養(yǎng)基：S.S、麥康凱、半固體、三糖鐵高層斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水二、 細菌分離培養(yǎng)： 將大腸桿菌、沙門氏菌混合肉湯，產(chǎn)氣、變形混合肉湯分別接種麥康凱、SS平板，染色鏡檢三、 挑取麥康凱和SS平板上單一菌落做染色、鏡檢，挑單一菌落接種三糖鐵斜面(涂布、穿刺)四、觀察三糖鐵中細菌生長情況。并挑取三糖鐵斜面上的細菌分別接種蛋胨水、葡胨水、半固體、微量生化管，37培養(yǎng)48h。五、 觀察結(jié)果5第一天、 配培養(yǎng)基第一組(1-5號）

3、 S.S培養(yǎng)基：50g SS培養(yǎng)基+800ml蒸餾水，煮沸溶化澆平板（15ml/塊平板），無需高壓第二組（6-10號） 麥康凱培養(yǎng)基： 44g麥康凱培養(yǎng)基+800ml蒸餾水+1.6g瓊脂粉，煮沸，高壓15磅，15分鐘，澆平板第三組（11-15號） 三糖鐵瓊脂：30.5g三糖鐵瓊脂+500ml蒸餾水，煮沸溶化， 裝長試管50根（10ml/管）， 高壓15磅，15分鐘，做高層斜面第四組（16-20號） 葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氫二鉀+250ml水，加熱溶解，調(diào)pH至7.6，分裝40根短試管高壓（3指半高，約5-8ml）第五組（21-25號）蛋白胨水：1.2

4、5g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水，調(diào)pH至7.6，分裝40根短試管，捆扎，高壓，12115分鐘（2指高，約2-4ml）第六組（其余學號）半固體：（73班）：分別稱取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化鈉2.5g、磷酸氫二鉀0.5g、蒸餾水500ml，加熱溶解，調(diào)pH7.6，過濾（74班）：稱瓊脂粉2g+肉湯500ml,煮沸，待瓊脂粉完全溶化，分裝短試管（2指高，約2-4ml）6第二天、 分離培養(yǎng)在麥康凱平板和SS平板上接種待檢材料（大、沙混合菌液;產(chǎn)氣、變形混合菌液）置37恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時觀察每種平板上細菌的生長情況比較單個菌落的形態(tài)：染色鏡檢7SS瓊脂 強選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基

5、中的煌綠、膽鹽、硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉抑制非腸道 菌生長不能發(fā)酵乳糖的細菌，菌落橘黃色分解乳糖的細菌產(chǎn)酸，使膽鹽呈膽酸析出，形成中心混濁的深紅色菌落檸檬酸鐵使產(chǎn)生硫化氫的菌落中心呈黑色硫代硫酸具有緩和膽鹽對細菌的有害作用及煌綠、中性紅的毒性作用。8麥康凱培養(yǎng)基用于腸道菌的分離與鑒定能分解乳糖的細菌-菌落紅色不能分解乳糖的細菌菌落灰白色9第三天 觀察結(jié)果 接種三糖鐵觀察麥康凱、S.S平板上細菌生長情況可看到幾種菌落，是否圓形光滑凸起透明的菌落挑取單個的細小透明菌落或者紅色菌落的一半作革蘭氏染色，鏡檢，另一半菌落接種三糖鐵培養(yǎng)基（接種時，先涂布斜面，后穿刺底層）、接種蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、半固體

6、37恒溫培養(yǎng)24-48h。10三糖鐵瓊脂用于測定細菌對葡萄糖、乳糖、蔗糖的發(fā)酵作用及能否產(chǎn)生硫化氫能發(fā)酵乳糖、蔗糖 培養(yǎng)基呈黃色發(fā)酵葡萄糖不發(fā)酵乳糖、蔗糖 底層呈黃色、斜面部分為紅色(少量酸接觸空氣而氧化 細菌生長利用含氮物質(zhì),生成堿性化合物)能產(chǎn)生硫化氫 培養(yǎng)基呈黑色能產(chǎn)氣的細菌 底層瓊脂內(nèi)有氣泡11第四天 觀察結(jié)果 做生化試驗觀察細菌在三糖鐵斜面/底部的生長情況：是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養(yǎng)基是否變紅。挑取三糖鐵斜面上的細菌分別接種葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素、枸櫞酸鹽培養(yǎng)基，37培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果，記錄。12第五天 生化結(jié)果判定1靛基質(zhì)試驗（吲哚試驗）取出試管（蛋白胨水）乙醚1ml，振蕩，靜置，待分層后沿管壁加入對二甲基氨基苯甲醛3-5滴，在分界處出現(xiàn)紅色玫瑰吲哚為陽性。2葡萄糖蛋白胨水一分為二（1）甲基紅（MR）試驗：取出試管加入甲基紅3-5滴，搖勻，培養(yǎng)基變紅色為陽性，不變色為陰性（2）VP試驗：取出試管VP甲液0.6ml，搖勻再加VP乙液0.2ml，15min后看結(jié)果，變紅為陽