藥物分析教學(xué)課件：第九章 二氫吡啶類(lèi)鈣通道阻滯藥物的分析

1、第九章 二氫吡啶類(lèi)鈣通道阻滯藥物的分析學(xué)習(xí)要求1、掌握：二氫吡啶類(lèi)藥物的基本結(jié)構(gòu)及主要的理化性質(zhì);結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分析方法之間的關(guān)系；鈰量法測(cè)定二氫吡啶類(lèi)藥物含量的原理、方法及注意事項(xiàng)。2、熟悉：二氫吡啶類(lèi)藥物的化學(xué)鑒別反應(yīng)及有關(guān)物質(zhì)檢查的方法。3、了解：二氫吡啶類(lèi)藥物其他的鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定方法，及體內(nèi)分析中樣品的處理方法。第一節(jié) 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、常見(jiàn)藥物的結(jié)構(gòu)二氫吡啶類(lèi)藥物的基本骨架：苯基-1，4-二氫吡啶的母核硝苯地平尼群地平尼莫地平苯磺酸氨氯地平非洛地平二、主要理化性質(zhì)1. 二氫吡啶環(huán)的還原性 氧化還原反應(yīng)鑒別或氧化還原滴定法含量測(cè)定2. 硝基的氧化性苯環(huán)上大多有硝基，具有氧化性，可被還原劑

2、還原為芳伯氨基，進(jìn)一步可用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別。3. 二氫吡啶環(huán)氨基質(zhì)子解離性 與堿作用，1，4-位氫均可發(fā)生解離，形成p- 共扼而發(fā)生顏色變化，利用該反應(yīng)可鑒別本類(lèi)藥物。 4. 穩(wěn)定性5. 旋光性6. 吸收光譜特性二氫吡啶類(lèi)遇光不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)歧化反應(yīng)，應(yīng)避光操作，同時(shí)應(yīng)檢查引入的特殊雜質(zhì)。本類(lèi)藥物二氫吡啶環(huán)的C4位多為手性碳原子，具有旋光性，臨床所用大多為消旋體。第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)鑒別法（一）與亞鐵鹽反應(yīng) 二氫吡啶類(lèi)藥物苯環(huán)上硝基具有氧化性，可將氫氧化亞鐵氧化為紅棕色氫氧化鐵沉淀。例：尼莫地平的鑒別：ChP2010尼莫地平的鑒別： 取本品約20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5

3、%硫酸亞鐵銨溶液2ml，1.5mol/L硫酸溶液1滴與0.5mol/L氫氧化鉀溶液1ml，強(qiáng)烈振搖，1分鐘內(nèi)沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色。（二）與氫氧化鈉試液反應(yīng)ChP2010硝苯地平的鑒別： 取本品約25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氫氧化鈉溶液35滴，振搖，溶液顯橙紅色。（三）沉淀反應(yīng)ChP2010尼莫地平注射液的鑒別： 取本品適量（約相當(dāng)于尼莫地平20mg），置分液漏斗中，加乙醚30ml振搖提取，靜置，分取乙醚層，置水浴上蒸干，放冷，殘?jiān)右掖?ml，攪拌使溶解，移至試管中，加1%氯化汞溶液3ml，即發(fā)生白色沉淀。（四）重氮化-偶合反應(yīng)BP2010硝苯地平的鑒別： 取本品25mg，加10ml

4、鹽酸-水-乙醇混合溶液（1.53.5 5），溫?zé)?，加入鋅粒0.5g，放置5分鐘，濾過(guò)，濾液加亞硝酸鈉溶液（10g/L）5ml，放置2分鐘，再加入氨基磺酸銨溶液（50g/L）2ml，搖勻，加入鹽酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即顯紅色（持續(xù)5分鐘以上）。二、分光光度法（一）紫外分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的鑒別： 避光操作。取本品的內(nèi)容物約1g，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，取10ml，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，在353nm與303nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，在353nm與303nm的吸光度比值應(yīng)為2.12.3。（二）紅外分光光度法ChP2010尼群

5、地平片的鑒別： 避光操作。取本品（約相當(dāng)于尼群地平100mg），研細(xì)，加丙酮10ml，振搖使溶解，濾過(guò)，濾液暗處揮干，殘?jiān)?jīng)減壓干燥，依法測(cè)定。本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（光譜集600）一致。五、色譜法（一）高效液相色譜法ChP2010尼莫地平片的鑒別： 在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。（二）薄層色譜法BP2010硝苯地平的鑒別： 取本品加甲醇制成每1ml 中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取硝苯地平對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml 約含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠F254薄層板上，以乙

6、酸乙酯-環(huán)己烷（4060）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)一致。第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)的檢查 二氫吡啶類(lèi)藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)歧化作用，引入雜質(zhì)，因此各國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)中均規(guī)定在避光條件下進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，大多采用HPLC法。 硝苯地平在光照和氧化劑存在條件下分別生成兩種降解氧化產(chǎn)物：雜質(zhì)I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯雜質(zhì)II：2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯ChP2010硝苯地平有關(guān)物質(zhì)的檢查： 避光操作。取本品，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1m

7、l中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(雜質(zhì))對(duì)照品與2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(雜質(zhì))對(duì)照品，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中各約含10g的混合溶液，作為對(duì)照品貯備液；分別精密量取供試品溶液與對(duì)照品貯備液各適量，用流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中分別含硝苯地平2g、雜質(zhì)1g與雜質(zhì)1g的混合溶液，作為對(duì)照溶液。 照高效液相色譜法試驗(yàn)。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(60:40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm。取硝苯地平對(duì)照品、雜質(zhì)對(duì)照品與雜質(zhì)對(duì)照品各適量，加甲醇溶解并稀釋

8、制成每1ml中各約含1mg、10g與10g的混合溶液，取20l，注入液相色譜儀，雜質(zhì)峰、雜質(zhì)峰與硝苯地平峰之間的分離度均應(yīng)符合要求。取對(duì)照溶液20l，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使硝苯地平色譜峰的峰高約為滿量程的50%；再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有與雜質(zhì)峰、雜質(zhì)峰保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，均不得過(guò)0.1%；其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液中硝苯地平峰面積（0.2%）；雜質(zhì)總量不得過(guò)0.5%。第四節(jié) 含量測(cè)定一、鈰量法硝苯地平與硫酸鈰反應(yīng)的摩爾比為12。ChP2010硝苯地平的含量

9、測(cè)定： 取本品約0.4g，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇50ml，微熱使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、鄰二氮菲指示液3滴，立即用硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，在水浴中加熱至50左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.32mg的C17H18N2O6。二、紫外-可見(jiàn)分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的含量測(cè)定： 避光操作，取本品10粒置小燒杯中，用剪刀剪破嚢殼，加無(wú)水乙醇少量，振搖使溶解后，將內(nèi)容物與嚢殼全部轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，用無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗剪刀及小燒杯，洗液并入

10、錐形瓶中，將錐形瓶密塞，置40水浴中加熱15分鐘，并時(shí)時(shí)振搖，將內(nèi)容物移入100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗嚢殼和錐形瓶，洗液并入量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在353nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另取尼群地平對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成1ml中約含20g的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算，即得。三、高效液相色譜法ChP2010尼莫地平分散片的含量測(cè)定： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水（353827）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm。理論板數(shù)按尼莫地平峰計(jì)算不低于8000，尼莫

11、地平峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。測(cè)定法 避光操作。取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于尼莫地平10mg)，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理15分鐘使尼莫地平溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，離心10分鐘(每分鐘3000轉(zhuǎn))，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取尼莫地平對(duì)照品，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含20g的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。第五節(jié) 體內(nèi)二氫吡啶類(lèi)藥物的分析 氨氯地平分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)手性碳原子，故具有一對(duì)光學(xué)異構(gòu)體R-(+)-氨氯地平

12、與S-(-)-氨氯地平，僅S-(-)-氨氯地平具有血管擴(kuò)張作用，其中左旋氨氯地平藥效是消旋氨氯地平的2倍，因此需進(jìn)行血漿中氨氯地平對(duì)映體的手性分離與立體選擇性藥動(dòng)學(xué)研究。 人血漿中氨氯地平對(duì)映體的固相萃取LC-MS/MS法測(cè)定：樣品處理：血漿樣品1.0ml，與1.0ml用流動(dòng)相制備的內(nèi)標(biāo)溶液(10 ng/ml)混合后，取1.8ml上載至C18固相萃取柱(萃取柱預(yù)先用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗滌2次，再用5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml沖洗平衡)，分別用5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml和水-甲醇(65:35)1.0ml洗滌，再用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗脫，洗脫液在60下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)至干，殘?jiān)锛?50l流動(dòng)相溶解，吸取100l注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行分析。色譜與質(zhì)譜條件 色譜柱為Chiral-AGP柱(150mm4.0mm，5m)，流動(dòng)相為10 mmol/L醋酸銨緩沖液(pH4.5)-正丙醇(99:1)，流速0.9 ml/min，柱溫30。APCI離子源