光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)介紹(課堂PPT)課件

1、Light Initiated Chemiluminescence Assay光激化學(xué)發(fā)光（LiCA）1光激化學(xué)發(fā)光（LiCA）介紹以高分子微粒為基礎(chǔ)兩種微粒近距離離子氧能量傳遞主要特點(diǎn)：高靈敏度低本底穩(wěn)定均相免洗廣泛應(yīng)用于生物分子間的相互作用2微粒的組成感光微粒內(nèi)含感光化合物發(fā)光微粒內(nèi)含發(fā)光化合物和鑭系元素微粒直徑188nm，表面覆蓋水凝膠共價(jià)連接增大的表面積成百上千個(gè)生物分子，捕獲目標(biāo)分子3LiCA發(fā)光原理核心原理是能量的近距離轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移的介質(zhì)是高能態(tài)離子氧紅色激光680nm照射，感光微粒釋放離子氧（4微秒），傳播直徑200nm，發(fā)光微粒（520618nm），高能級(jí)的光反應(yīng)的基礎(chǔ)有賴于兩種微

2、粒的相互接近反應(yīng)體系中，微粒的濃度很低，碰撞機(jī)率很低，本底信號(hào)微弱4原理 (1)發(fā)射光520-620 nm發(fā)光微球1O2AB激發(fā)光680 nm感光微球200nm5原理 (2)激發(fā)光680 nm感光微球A發(fā)光微球CO2-6LiCA的技術(shù)特點(diǎn)（一）高靈敏度信號(hào)產(chǎn)生逐級(jí)放大的結(jié)果每個(gè)感光微粒釋放出近6萬個(gè)離子氧離子氧作用于二甲基噻吩，產(chǎn)生大量紫外光紫外光激發(fā)鑭系元素 實(shí)際檢測(cè)能力為10-15摩爾 理論檢測(cè)能力為10-18摩爾7LiCA的技術(shù)特點(diǎn)（二）低本底時(shí)間分辨模式采集光信號(hào)（延遲150 ms），天然熒光的壽命小于100 ns采用680 nm紅光激發(fā)，生物樣品中的熒光物質(zhì)不敏感發(fā)射光的波長比激發(fā)光

3、的波長短，能量更高，有別于熒光，有效避免熒光物質(zhì)干擾8穩(wěn)定均相環(huán)境使反應(yīng)更充分免洗操作杜絕隨機(jī)誤差和交叉污染感光和發(fā)光的有機(jī)分子受到微粒的保護(hù)，環(huán)境穩(wěn)定和安全溶液中的氧濃度是一個(gè)常數(shù)不易受到pH值、離子強(qiáng)度和溫度的影響LiCA的技術(shù)特點(diǎn)（三）9臨床免疫的各項(xiàng)檢測(cè)生命科學(xué)的基礎(chǔ)研究新藥的篩選標(biāo)記簡便檢測(cè)過程簡單廣泛應(yīng)用10基本包被模式GG-Streptavidin（SA） FG- Antibody（Ab）11基本反應(yīng)模式biotin-antigenprimary Absecondary Ab (or protein A, G, LA)12應(yīng)用類型配體受體激酶蛋白蛋白免疫蛋白酶蛋白DNA13配體受

4、體(1)TNFa-sTNFR1Biotinanti-TNFR1 IgGFG -TNFaProtein A-sTNFR114配體受體(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1 IgGFG -TNFaProtein A-sTNFR115配體受體(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1 IgGFG -TNFaProtein A-sTNFR116配體受體(2)環(huán)磷酸腺苷 cAMPBiotinFG- cAMPanti-cAMP-17配體受體(2)環(huán)磷酸腺苷 cAMPGG-SABiotinFG- cAMPanti-cAMP-18激酶AktBioti

5、nanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-19激酶AktBiotinanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-20激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-Akt磷酸化21激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-Akt22蛋白蛋白BiotinFG -p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST23蛋白蛋白GG-SABiotinFG -p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST24免疫(1)腫瘤壞死因子 TNFaBiotin

6、FG- anti-TNFaanti-TNFa-TNFa25免疫(1)腫瘤壞死因子 TNFaGG-SABiotinFG- anti-TNFaanti-TNFa-TNFa26免疫(2)Biotinanti-TNFaFG -anti-TNFaProtein A-TNFa腫瘤壞死因子 TNFaGG-SA27免疫(2)GG-SABiotinanti-TNFaFG -anti-TNFaProtein A-TNFa腫瘤壞死因子 TNFa28蛋白酶(1)GG-SABiotinFG - substrateanti-digoxigenin-組織蛋白酶 Cathepsin D - digoxigenin Cathe

7、psin D 水解29蛋白酶(2)ACEBiotinFG- angiotensin Ianti-angiotensin II-ACE切割30蛋白酶(2)ACEGG-SABiotinFG- angiotensin I Ianti-angiotensin II-31蛋白DNAERa-DNABiotinFG -ERaanti-digoxigenin-digoxigeninDNA32蛋白DNAERa-EREGG-SABiotinFG -ERaanti-digoxigenin-digoxigeninDNA33當(dāng)前成功應(yīng)用實(shí)例34HBsAgGG-SABiotin -Anti-HBsAnti-HBs-FGHBsAg35Anti-HBsGG-SA Biotin-HBsAgFGHBsAg-Anti-HBs36HBeAgGG-SABiotinFG -Anti-HBeAnti-HBe-HBeAg37Anti-HBeGG-SABiotinFG -Anti-HBeAnti-HBe-中和HBeAgSample Anti-HBe38Anti-HBcGG-SABiotinFG -HBcAgAnti-HBc-Anti