外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及技巧(共20頁)

1、外周血細(xì)胞(xbo)形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及技巧 衛(wèi)生部北京醫(yī)院血液科 鄭天林 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)(jinyn)中心 彭明婷 谷小林 陸紅 一 血液學(xué)及血細(xì)胞形態(tài)學(xué)臨床(ln chun)應(yīng)用： 是臨床血液病診斷與治療及臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)的基礎(chǔ)工作。 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)適用于臨床血液病診斷快速簡(jiǎn)捷的要求。 近年來由于血細(xì)胞學(xué)及超微結(jié)構(gòu)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、融合基因、造血干細(xì)胞及其細(xì)胞因子、骨髓造血微環(huán)境、基質(zhì)細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、淋巴系細(xì)胞發(fā)生及其疾病表現(xiàn)，細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)與細(xì)胞凋亡以及骨髓組織病理學(xué)應(yīng)用，推動(dòng)了血液的臨床與實(shí)驗(yàn)室的新知識(shí)迅猛發(fā)展。 當(dāng)前血液病不能單憑臨床與形態(tài)學(xué) 作出 診斷，必須以臨床和血細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，將

2、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)新知識(shí)、新技術(shù)應(yīng)用到血液學(xué)中，構(gòu)成現(xiàn)代臨床血液學(xué)與分子生物學(xué)診斷技術(shù)，彌補(bǔ)形態(tài)學(xué)的經(jīng)驗(yàn)性與主觀性帶來負(fù)面缺陷，才能提高血液病的診斷與治療水平。 進(jìn)入 90 年代以來，國(guó)內(nèi)外采用多學(xué)科聯(lián)合技術(shù)綜合診斷技術(shù)與方案： FAB-AL （ 1976 ）、 NCL （美國(guó)國(guó)家癌癥研究所）對(duì) FAB-AL 分型的補(bǔ)充 （ 1995 ）、 AL-MIC 分（類）型， MIC 及 MICM 分型（ 1985-1990 ）； FAB-CL 分型 （ 1989 ）、中國(guó) CL 分型 （ 1997 ）； FAB-MDS 分型（ 1982 ）、 MIC 協(xié)作組對(duì) FAB-MDS 分型提出補(bǔ)

3、充建議（ 1987 ）； WHO 對(duì)造血系統(tǒng) 及髓系惡性 疾病和淋巴系惡性腫瘤 WHO 分類 （ 2000 ）； 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷技術(shù)正在進(jìn)入顯微 圖象 軟件時(shí)期： 創(chuàng)造出許多多功能軟件，如血細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色、血液病診斷與鑒別診斷、 CL 診斷與治療及教學(xué)系統(tǒng)多媒體軟件等。 將顯微鏡與微機(jī)相連，應(yīng)用(yngyng)儲(chǔ)存、分類、檢索軟件，編輯、打印診斷報(bào)告，并可附多幅細(xì)胞 圖象 。 二 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)基本概念 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)作為臨床血液病基礎(chǔ)(jch)診斷： 觀察血細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量及其比例的變化來研究造血器官的結(jié)構(gòu)和功能(gngnng)是血液學(xué)的重要組成部分，是診斷造血系統(tǒng)疾病最基本、最簡(jiǎn)便實(shí)

4、用的檢查方法，被臨床普遍應(yīng)用。 正常人的血液及造血器官中，各種血細(xì)胞的數(shù)量有一定的正常范圍，不同血細(xì)胞及細(xì)胞發(fā)育的不同階段有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。 在造血系統(tǒng)疾病中，如果造血功能發(fā)生紊亂，就會(huì)從血細(xì)胞形態(tài)學(xué)的量變和質(zhì)變中反映出來。 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查應(yīng)包括外周血和骨髓兩部分組成，必須平行進(jìn)行檢查。因?yàn)?，外周血的血?xì)胞改變往往反映骨髓病變的信息，才有利于診斷。 三血細(xì)胞染色 （一） 細(xì)胞染色機(jī)制 ：染色是將細(xì)胞經(jīng)染色劑的物理及化學(xué)作用，使 其清楚 顯示細(xì)胞各個(gè)組成部分，有利辨識(shí)細(xì)胞形態(tài)。 染色可分二個(gè)步驟： 1 染料受相應(yīng)物質(zhì)吸附而附著于物質(zhì)表面； 2 固著作用，即染色粒子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)起化學(xué)反應(yīng)（染料透

5、過細(xì)胞膜的學(xué)說很多，尚無定論），與相應(yīng)的物質(zhì)形成溶解度很低的鹽固著于細(xì)胞內(nèi)而顯色。染色劑皆有選擇作用，其染色不是將細(xì)胞全部一齊著色，而只是將其中一部分染色，多余的被沖洗掉。目前多以吸附學(xué)說（電力吸附、機(jī)械吸附、化學(xué)吸附）來解釋。 一般染色方法由兩種染色劑（酸性、堿性）組成，通常細(xì)胞核及漿 堿性粒體為 堿性，細(xì)胞漿為酸性。酸性染料可和帶正電荷的（堿性）物質(zhì)結(jié)合，這種物質(zhì)稱嗜酸性物質(zhì)，對(duì)酸性染料具有親和力，因此嗜酸性粒細(xì)胞之顆粒本身為堿性物質(zhì)；堿性染料可和帶負(fù)電荷的（酸性）物質(zhì)相結(jié)合，這種物質(zhì)稱嗜堿性物質(zhì)，對(duì)堿性染色粒具有親和力，因此嗜堿性粒細(xì)胞之顆粒本身為酸性物質(zhì)。另一種蛋白質(zhì)在 pH6.4 呈

6、等電狀態(tài) ，本身所含的正 / 負(fù)電荷相等，因此，既能和酸性染料又能和堿性染料結(jié)合，這種物質(zhì)稱中性物質(zhì)，如中性粒細(xì)胞之顆粒。 一般用 pH6.4 PBS 來稀釋染液，使每次染色都在同一 pH 中進(jìn)行，讓細(xì)胞在恒定條件下著色(zhu s)，使染色效果趨于一致。 作者(zuzh)：198585912005-5-27 19:51 回復(fù)此發(fā)言 - 2 外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)(jinyn)及技巧 染液過堿時(shí)，蛋白質(zhì)帶有負(fù)電荷，對(duì) 次甲藍(lán)有色 部分的正電荷吸附力強(qiáng)，因此染成的細(xì)胞一般著色較藍(lán)，說明 pH 不適合。 染色與固定亦有極大關(guān)系，因細(xì)胞 經(jīng)固定 后，其蛋白質(zhì)的電力吸附（電附）可能有變化，有些固定液能將

7、細(xì)胞某部分的電附加強(qiáng)，使其染色更為容易。因此，這種固定劑不僅有固定作用， 也有媒染作用 （ Mordunt ），染色極為容易。因此， 電附是 染色過程中最重要的作用。機(jī)械吸附在染色過程中也參與作用，如用蘇木液和伊紅染色，細(xì)胞核不是純藍(lán)色，藍(lán)色中略有紅色，胞漿也不能盡為紅色，紅色中略有藍(lán)色或 兩者皆帶些 紫色。這是因?yàn)橐良t與胞核 雖無電附仍有 機(jī)械吸附，故也能染上少量紅色，蘇木液與胞漿 雖無電附但也有 機(jī)械吸附，因而胞漿略顯藍(lán)色?；瘜W(xué)吸附（作用）在染色中應(yīng)用，最早應(yīng)用于金屬染色劑（氯化金、硝酸銀等）的金屬與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)起化學(xué)作用，使金屬在細(xì)胞內(nèi)變成沉淀物或死亡物，顯示細(xì)胞結(jié)構(gòu)或物質(zhì)。近年來此原理用

8、于細(xì)胞酶化學(xué)染色。 血細(xì)胞的染色多采用瑞氏染色和 姬姆薩 染色兩種，但作者取其兩種染色的優(yōu)點(diǎn)，采用瑞氏和 姬姆薩 混合染色法，比單用一種染色法更佳。但近年來也出現(xiàn)一些快速和改良染色方法及染色液商品化，對(duì)血細(xì)胞形態(tài)染色不一定適用。 （二）瑞氏（ Wright s staim ；美藍(lán)伊紅）染色： 1 瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)（ Methvlem blue ）和酸性染料黃色伊紅（ Eostm Y ）合稱伊紅美藍(lán) 染料即瑞氏 （美藍(lán)伊紅）染料。 伊紅鈉鹽的有色(yu s)部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍(lán)通常為氯鹽是堿性的，美藍(lán)的中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽，其有

9、色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。 2 用 甲醇作瑞氏 染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好(lingho)溶劑，有兩種作用： （ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍(lán)（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細(xì)胞成分選擇性吸附(xf)其中的有色物質(zhì)而著色。 甲 醇 ME （瑞氏染料） M + + E - 在配制的瑞氏染液中美藍(lán)如放置過久即可氧化而含有天青，美藍(lán)天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍(lán)色，多余 美藍(lán)就可以 使胞漿染成藍(lán)色，染色主要是化學(xué)作用，是離子彼此結(jié)合的反應(yīng)。 （ 2 ）甲醇具有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細(xì)胞

10、對(duì)染料吸收作用，同時(shí)由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。 3. 瑞氏染液配制： (1) 瑞氏染液配制： 瑞氏染料 830gm 或 1g 甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml 先稱干燥（事先放入溫箱干燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi)， 用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲 即呈細(xì)粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入 一 清潔儲(chǔ)存瓶?jī)?nèi)（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復(fù)數(shù)次，直至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲(chǔ)存愈久，則染料溶解、分解

11、就越好，一般儲(chǔ)存 3 個(gè)月以上為佳。 (2) 緩沖液： 1) 緩沖液作用：染色對(duì)氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察 pH 值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新(chngxn)離解。 緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩(wěn)定， PBS 的 pH 一般在 6.46.8 ，偏堿性染料可與緩沖液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使 pH 恒定。 2) 緩沖液配制(pizh)（ pH6.46.8 ，弱酸性）： 配方(pi fng) 1 ： 配方 2 ： 1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml 1% Na 2 HPO 4 20ml M/

12、15 Na 2 HPO 4 26.5ml 作者：198585912005-5-27 19:51 回復(fù)此發(fā)言 - 3 外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及技巧 H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml 置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染則應(yīng)報(bào)廢。 （四）姬 姆薩 （ Giemsa s stain ；天青 - 伊紅）染色 1 姬 姆薩染料是天青（藍(lán)） 2 號(hào)伊紅 AzurII Eqsin) 和天青（藍(lán)） 2 號(hào)合成的。 2 姬 姆薩紅染料（ Giemsa, 天青 - 伊紅）染液配制： 姬 姆薩紅染料（粉末） 0.5g 或 7.5g 甲醇（ AR ） 33ml 或 500ml 甘油（ AR ） 33

13、ml 或 500ml 先將姬姆薩染料放入乳缽中，逐漸倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56 水溫箱內(nèi)， 90 120 分鐘，然后加入甲醇，搖勻后放置數(shù)天，過濾后或不過濾即可使用。此染液放置室溫陰暗處，時(shí)間越長(zhǎng)越好。 使用染液 9 臨時(shí)配置）： 姬 姆薩染液 1ml ，加 DDH 2 O10ml 混勻。即可使用。 3 染色步驟： （ 1 ）先用甲醇(ji chn)固定 2 3 分鐘。 （ 2 ）將血或骨髓涂片(t pin)放置 姬 姆薩使用液 15 30 分鐘。 （ 3 ）涂片用自來水沖洗，在室溫(sh wn)中干燥待查。 （五）瑞 氏及姬姆薩 染色液的鑒定：剛配好或放置一個(gè)月以上的染液可進(jìn)行下列鑒定

14、： 1 取 1 滴染液于乳白 玻 板上，自行迅速擴(kuò)散開，其顏色變紫紅色，且有偽足形成。 2 取 1 滴染液加 1 滴緩沖液，染液由深藍(lán) 色立即 變?yōu)樽霞t色。 3 取血片或骨髓片 進(jìn)行試染檢查 ，觀察染色后各類細(xì)胞的胞核、胞漿及顆粒著色情況， pH 是否合適及染色合適時(shí)間。如有上述變化，表明染液合格，可供使用。 （六）瑞氏染色 (Wright s)- 姬 姆薩（ Giemsa s ）混合染色： 瑞氏染色的染料配方濃度對(duì)細(xì)胞核著色程度適中 , 細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和色澤清晰艷麗 , 對(duì)核結(jié)構(gòu)的識(shí)別較佳 , 但對(duì)胞漿著色偏酸 , 色澤偏紅 , 對(duì)細(xì)胞漿內(nèi)顆粒特別是嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差 , 而姬姆薩染

15、色對(duì)胞漿著色能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度 , 特別對(duì)嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒著色較清晰 , 色澤純正 , 而對(duì)胞核著色偏深 , 核結(jié)構(gòu)顯示較差 , 故采用以瑞氏染液為主 姬 姆薩染液為輔的混合染色。 染色步驟 : 1. 先用瑞氏染液將涂膜面充分覆蓋； 2. 稍等片刻再加姬 姆薩 染液 2-3 滴加減 ( 根據(jù)涂片上細(xì)胞多少及增升程度酌情而定 ) ； 3. 稍等 1-2 分鐘后 , 再加磷酸鹽緩沖液 , 加時(shí)應(yīng)緩慢地 一 滴一滴加在涂片膜上 , 直至膜面上染色 液形成 表面張力而終止染色液加入； 4. 染色 30-40 分鐘； 5. 分色：用自來水緩緩沖洗至少 3 分鐘以上 , 待干，勿用濾紙

16、吸干 , 以免濾紙纖維污染涂片。 四血液學(xué)及血細(xì)胞形態(tài)學(xué)內(nèi)容及自身特點(diǎn)： （一）血常規(guī)檢查（ Hb 、 RBC 、 WBC 、 Plt 、血細(xì)胞比積、 RBC-MCV 、 MCH 、 MCHC 及血小板容積曲線），用自動(dòng)化儀器提高工作效率，為使結(jié)果準(zhǔn)確可靠，必須建立監(jiān)測(cè)方法，搞好質(zhì)控，此屬數(shù)值質(zhì)控。我國(guó)已較普遍開展全國(guó)、省、市（地區(qū)）質(zhì)控。但普遍存在應(yīng)付質(zhì) 控質(zhì)量 的問題，并未能切實(shí)解決自身質(zhì)控問題。 （二）白細(xì)胞分類：白細(xì)胞分類的自動(dòng)化已普遍應(yīng)用，只能為患者普查與篩選之用。遇有問題應(yīng)用顯微鏡觀察，彌補(bǔ)自動(dòng)化儀器(yq)缺陷。一般醫(yī)院顯微鏡檔次偏低，分辨率低，正確使用和維修欠缺，因而要更好地發(fā)

17、揮光鏡的觀察效應(yīng)。 （三）骨髓、外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)及分類，是血液病及臨床各科患者基本檢查及診斷依據(jù)。反映繼發(fā)性疾病的血液學(xué)表現(xiàn)(bioxin)，了解機(jī)體狀況、感染（細(xì)菌、病毒、寄生蟲等）等改變。 （四）血細(xì)胞涂片(t pin)自身的特點(diǎn)： 1 涂片不易均勻：由于血液是混懸液，其中白細(xì)胞、有核細(xì)胞、 RBC 、血小板的形態(tài)大小、比重及生物活性和血漿成分等的不同和制片技術(shù)差異、質(zhì)量分布不均勻性差異頗大。 2 細(xì)胞分布和檢查的非隨機(jī)性： 作者：198585912005-5-27 19:51 回復(fù)此發(fā)言 - 4 外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及技巧 (1) 細(xì)胞分類標(biāo)準(zhǔn)與觀念不一； (2) 采樣和計(jì)數(shù) 10020

18、0 個(gè)白細(xì)胞的局限性； (3) 細(xì)胞分布的生理變動(dòng)； 3. 與疾病的相關(guān)性； 4. 室內(nèi)、室間分類不一致性，開展室間質(zhì)控也是促進(jìn)形態(tài)學(xué)提高重要手段。 （五）血細(xì)胞形態(tài)學(xué)（外周血及骨髓）質(zhì)控：自 1983 年以來，澳大利亞皇家病理學(xué)質(zhì)控中心和英國(guó)皇家進(jìn)修學(xué)院 WHO 質(zhì)控中心及最近美國(guó)洛杉磯質(zhì)控中心，國(guó)內(nèi)：全國(guó)及省地市也普遍開展，由質(zhì)控標(biāo)本涂片發(fā)展圖片指定細(xì)胞識(shí)別。 五血細(xì)胞形態(tài)學(xué)采樣(ci yn)、制片染色與檢查要求： ( 一 ) 采樣、制片及染色，三道工序(gngx)至關(guān)重要，是細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的成敗關(guān)鍵。要得到合格的涂片標(biāo)本，做好上述工序，應(yīng)注意以下要求： 1. 采樣(ci yn)、制片：

19、(1) 玻 片要求：國(guó)內(nèi) 1.0mm 26mm 76mm 0.5 ，美國(guó) NCCLS 規(guī)定 1.0mm 25mm 75mm 0.5 ，要嚴(yán)格清潔，接近中性 . (2) 推片：選擇優(yōu)質(zhì)推片， 推片兩端 邊緣整齊、平滑。也可選用有機(jī)玻璃，其大小、厚度 與坡片相同 ，兩端之邊緣 應(yīng)加工 光滑， 以利推片用 。 (3) 采外周 血（樣），擦去第一滴血，迅速采血，量適中，如綠豆粒大小，具有 一定推片技術(shù) ， 推片傾斜 45 ，推成血膜長(zhǎng)度 25mm 35mm ，寬度 18 20mm ，血膜四周留有空隙區(qū)，血膜 終尾離玻 片終端至少 10mm ，血膜均勻，薄如蟬翼，尾端形如弧狀，迅速扇（搖）干，血膜具有頭

20、、體、 尾不同 厚薄區(qū)域。此外，涂片時(shí)，還要考慮患者的血液狀態(tài)，如貧血程度、血液粘稠度、 WBC 或有核細(xì)胞多少等因素， 調(diào)整推片技巧 。 (4) 如若采用靜脈血推片，用 K 3 -EDTA 或肝素抗凝， 推制血 片應(yīng)盡早進(jìn)行（最遲在 1 2 小時(shí)內(nèi)）。 （二）染色：是識(shí)別細(xì)胞形態(tài)的重要標(biāo)記工序： 常規(guī)瑞氏 - 姬姆薩染色要點(diǎn)： 1 要得到滿意、漂亮的血細(xì)胞染色標(biāo)本，新鮮涂片迅速染色是很重要的。 2 染色液配制要合格； 3 涂片切勿用甲醛固定，否則不著色； 4 染色的好壞與染色液、緩沖液的質(zhì)量及比例、加液間隔時(shí)間、保持 玻 片染色液面的張力等染色技巧均有重大關(guān)系。染液要覆蓋涂膜面，再加緩沖液（

21、 1:2 ），其量要充足、混均，染色時(shí)間要 30 分鐘以上。 5 細(xì)胞著色的觀察： (1) 當(dāng)染液與緩沖液混合后，甲醛(ji qun)吸水液溫升高，發(fā)生劇烈反應(yīng)，直至液膜表面的“染色(rns)粒”呈均勻分布，隨染色(rns)時(shí)間的推延，“染色粒”由“染色小?！本奂伞叭旧罅！?，逐漸由外緣向內(nèi)緣推進(jìn)至 染色面 中心（此過程需要 20-30 分鐘以上），則表明細(xì)胞著色已完成， (2) 再用自來水緩流沖洗，使染色液沉渣及染色粒浮去，使其充分起分色作用，去除細(xì)胞染色中浮色，顯示出胞核結(jié)構(gòu)及細(xì)胞清晰形態(tài)，待干，鏡檢。 六外周血細(xì)胞形態(tài)檢查技巧： 外周血中三種血細(xì)胞數(shù)與形態(tài)學(xué)表現(xiàn)是： 反映骨髓造血狀態(tài)及

22、血液病和其他疾病的 廚窗 ； 是檢查與觀察疾病的重要指標(biāo)； （一） WBC 形態(tài)學(xué)診斷技巧： 1 WBC 數(shù)值準(zhǔn)確性估計(jì)： （ 1 ）目前自動(dòng)化計(jì)數(shù)儀時(shí)有出現(xiàn)結(jié)果的偏差，低倍鏡觀察血涂片可以粗略估計(jì) WBC 數(shù)值及分布。低倍視野 WBC 數(shù)：正常約 35 個(gè)，增多 6 個(gè)以上，減低 3 個(gè)以下。 （ 2 ） WBC 如推至片尾，分布不均，估計(jì)將有一定難度。較大的細(xì)胞如單核、異淋及中性粒細(xì)胞及不成熟細(xì)胞多在片尾，體部則多為較小的淋巴細(xì)胞，使分類造成偏差，所以分類部位在適當(dāng)調(diào)整。 2 白細(xì)胞計(jì)數(shù)值限度分級(jí)： （ 1 ） WBC 正常范圍： 4.010.0 10 9 /L; （ 2 ） WBC 正常

23、限度以下 : 輕度減少 (4.0 3.0 10 9 /L), 中度減少 (3.0 2.0 10 9 /L), 極度減少 (10.0 20.0 10 9 /L), 中度增多 (20.0 40.0 10 9 /L), 明顯增多 (40.0 80.0 10 9 /L) 極度增多 (80.0 10 9 /L) 。 以此與所測(cè)知 WBC 計(jì)數(shù)值作粗略對(duì)比，推斷 WBC 計(jì)數(shù)值的準(zhǔn)確性。 （ 4 ）如在血片分類計(jì)數(shù)過程中發(fā)現(xiàn)較多有核紅細(xì)胞時(shí)， 計(jì)出血片中有核紅所占 % 率，即以校正原 WBC 計(jì)數(shù)值減去有核紅所占比例，求出外周血中 WBC 總數(shù)值， 另作 WBC 分類計(jì) 100 個(gè)過程中遇到多少有核紅細(xì)胞

24、，即有核紅細(xì)胞 個(gè) /100 個(gè) WBC ， 或作血片有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（包括有核紅細(xì)胞），計(jì)出有核紅細(xì)胞所占 % 率。 3 WBC 分類正常范圍及其病理性改變： （ 1 ） WBC 分類正常范圍： 新生兒出生后最初 24 小時(shí)白細(xì)胞數(shù)高，主要為中性粒細(xì)胞 , 至第 3 4 周，中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比例倒轉(zhuǎn)，直至 4 歲淋巴細(xì)胞比例仍多。表 1 白細(xì)胞分類正常范圍由于民族、地區(qū)、年齡、性別及其生理性變化的影響，以及檢查本身的技術(shù)差異，即使一人同次取材不同涂片、一張涂片多次分類計(jì)數(shù)結(jié)果也不可能完全一致，但不可差異太大。 分類中占大比例的中性粒細(xì)胞或淋巴細(xì)胞呈正態(tài)分布，占小比例的嗜酸 / 嗜堿性粒細(xì)

25、胞及單核細(xì)胞則為 Poisson 分布。 （ 2 ） 病理性形態(tài)學(xué)改變(gibin)： 中性(zhngxng)粒細(xì)胞： 中性粒細(xì)胞分葉分化程度，被認(rèn)為(rnwi)從干細(xì)胞至粒細(xì)胞生成是否正常及與粒細(xì)胞年齡相關(guān)；如核分葉不良， Pelger-huet 現(xiàn)象； 核僅一葉 或二葉，其百分率增加時(shí)謂之“左移”，反之，多數(shù)細(xì)胞四葉以上謂之右移，一般認(rèn)為正常中性粒細(xì)胞胞核分葉情況： 4 葉者為 15 25% 3 葉者為 40 50% 2 葉者為 20 40% 1 葉者為 3:1 者即為大細(xì)胞高色素性貧血 ,5% 。其網(wǎng)織 RBC 內(nèi)嗜堿性網(wǎng)織增多，代償性功能減低者，低于正常水平。多見于 AA ，但有不典型

26、 AA （ 1/4 ）患者可有網(wǎng)織 RBC 增高。網(wǎng)織 RBC 計(jì)數(shù) 1000 個(gè) RBC 中有多少網(wǎng)織 RBC ，以其 % 數(shù)表示，是一個(gè)比值數(shù)，不是絕對(duì)值。精確應(yīng)計(jì)算絕對(duì)值或用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)更為確切。 (3)MCV 、 MCH 、 MCHC 反映 RBC 病理變化，可將貧血分為大細(xì)胞性貧血、正常細(xì)胞性貧血、小細(xì)胞低色素性貧血及單純小細(xì)胞性貧血（即小細(xì)胞性正常色素性貧血），其診斷標(biāo)準(zhǔn)及其病因見表 3 ： 2 RBC 形態(tài)學(xué)在檢驗(yàn)中易被忽視， 觀察 RBC 形態(tài) , 一般 以外周 血涂片較為可靠。 RBC 形態(tài)與排列(pili)（如重疊、 緡 錢狀）與涂片技術(shù)、涂片部位及厚薄有很大關(guān)系。這點(diǎn)在

27、鏡檢時(shí)應(yīng)予注意。即是合格涂片， RBC 形態(tài)依然與涂片部位及厚薄等多種因素有關(guān)： 如取涂片(t pin)中心區(qū)域， RBC 中心淡染，多 1/3 細(xì)胞面積大小 ; 取自涂片(t pin)薄處或尾部， RBC 形態(tài)誤給人以“球形”，失去雙 凹 盤形，中心淡染消失，所謂類球形改變； 取厚片 或制片干燥過慢， RBC 未攤開，收縮變形，甚至出現(xiàn)人工中心染色過淡等； 取厚片 RBC 則重疊堆積，呈假“緡錢狀”，不便查清形態(tài)； 玻 片不清潔，油脂過多或骨髓脂肪過多，制片干燥不快， RBC 則會(huì)形成人工的中心淡染區(qū)或空白區(qū)。 3 RBC 形態(tài)及其臨床意義： 正常紅細(xì)胞為直徑 7.2 7.6mm ，厚度 2

28、mm 圓盤狀，兩面凹陷，中央較薄，著色較淺，在涂片中形態(tài)基本一致。 正常 RBC 在體內(nèi)能經(jīng)受通過微血管的嚴(yán)重變形而不受損害。在高度粘稠血液中的 RBC 變成橢圓形，紅細(xì)胞膜圍繞著所含 Hb 旋轉(zhuǎn)，像坦克的踏板（ Tread ）。脾臟可篩選缺乏彈性紅細(xì)胞、紅細(xì)胞異常變形或喪失彈性紅細(xì)胞，加強(qiáng)對(duì)這些紅細(xì)胞的清除。 在貧血或有關(guān)疾病時(shí)紅細(xì)胞可出現(xiàn)異常，往往一張較滿意的血片，觀察紅細(xì)胞形態(tài)，對(duì)貧血的性質(zhì)確定和某些疾病的診斷有一定的幫助。 貧血在紅細(xì)胞形態(tài) 中主要表現(xiàn)個(gè)體及群體大小、形狀、血紅蛋白濃度的差異。 （ 1 ）大小不等 （ Anisocytosis ）及形態(tài)異常（ Poikilocytos|

29、is ），由于骨髓紅系代償性增生旺盛，而產(chǎn)生大小不等的紅細(xì)胞及形態(tài)多樣化異常，常見有： 紅細(xì)胞顯著大小不等及形態(tài)異常如梨形、鈴形、少數(shù) 卵 圓形，常見于嚴(yán)重性貧血（包括繼發(fā)性貧血）及溶血性貧血。 紅細(xì)胞個(gè)體小，大小不等，一般形態(tài)異常及中心染色過淺，見于缺鐵貧、 VitB6 缺乏及慢性失血性貧血等。 紅細(xì)胞個(gè)體小，大小不等，異形，中心染色過淺，出現(xiàn)靶形及小紅細(xì)胞，多為地中海貧血(pnxu)及某些 Hb 病。 紅細(xì)胞個(gè)體普遍增大，并 呈大小 不等，色素(s s)濃染，無 中心淺染區(qū) ，多為巨幼細(xì)胞性貧血。 （ 2 ）多嗜性紅細(xì)胞 （或網(wǎng)織紅細(xì)胞）（ Polychro matcphiliomacro

30、cyte ， Reticalocyte ）為胞體較大的成熟紅細(xì)胞，由于(yuy)胞漿含有核糖核酸（ Cytoplamia-RNA ），淡灰 蘭色 ，若經(jīng) 煌 焦油蘭染色即為網(wǎng)織紅細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞嗜酸性物質(zhì)多少，按 Hielmyer 分類法： 0 型： 胎幼紅細(xì)胞 漿內(nèi)嗜堿性網(wǎng)狀物質(zhì)； 型：系卷絲狀網(wǎng)狀物質(zhì)； 型：網(wǎng)眼狀物質(zhì)； 型：不完全網(wǎng)眼狀物質(zhì)； 型：整個(gè)網(wǎng)絲斑點(diǎn)殘?bào)w。 （ 3 ）點(diǎn)彩紅細(xì)胞 （ Basophilic Stipplins ）：晚幼紅細(xì)胞胞漿及成熟紅細(xì)胞中出現(xiàn)大小不等、分布不均的嗜堿性點(diǎn)彩物質(zhì)。在溶血性貧血、鉛中毒（ 因鉛使 核苷酸酶受抑制和嘧啶與核苷酸酶缺乏患者增多）。 作者：

31、198585912005-5-27 19:51 回復(fù)此發(fā)言 - 8 外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及技巧 （ 4 ）豪周氏小體 （ Howell-Jolly Bodies ）：在晚幼紅細(xì)胞漿內(nèi)和成熟紅細(xì)胞內(nèi)含單個(gè)或多個(gè)紫紅的包含物為核碎片或染色體殘留物。此物具有 DNA 物質(zhì)，是嚴(yán)重溶血、 MDS 、脾切除后等出現(xiàn)。 （ 5 ）卡 玻 氏環(huán) （ Cabos Ring ）：在紅細(xì)胞內(nèi)具有淡紫紅色的環(huán)形或 8 字形環(huán)狀物 . 曾被認(rèn)為是核的殘余和一種 豪 周氏小體變種。但日前認(rèn)為是人工造成的，是退變細(xì)胞中凝集和變性的蛋白質(zhì)，也有認(rèn)為含有組蛋白（ Hisfone ）和鐵（ Feulgen ），相差鏡下則看不見

32、 . 見于鉛中毒、溶貧、白血病、惡性瘧疾等。 4 特異性紅細(xì)胞形態(tài)改變： （ 1 ）刺（ 棘 ）狀細(xì)胞或鋸形細(xì)胞（ Aca Ntbocyte ， Burr Cells ）：在血細(xì)胞表面呈不規(guī)則的、較多的刺狀突出，呈鋸齒狀或刺狀。加 EDTA-Na 2 更顯著(xinzh)。此細(xì)胞由膜 質(zhì)改變 所致；見于吸收不良反應(yīng)、肝病、脾切除后、 PK 缺乏性貧血、先天性缺乏 - 脂蛋白血癥。 （ 2 ）刺毛細(xì)胞（ Echinocyte ）：整個(gè)細(xì)胞表面有棘突(j t)狀突起，從皺 縐 圓盤形發(fā)展或皺縮球形，直至棘突消失，見于尿毒癥、 PK 缺乏癥、輸注低鉀庫血、胃癌、胃潰瘍出血等 . （ 3 ）裂細(xì)胞（

33、Schlzocyte ）：為大小不等、形態(tài)不規(guī)則、呈盔形、帶刺、三角碎片 . 多由于微血管堵塞、管腔狹小，紅細(xì)胞可塑性降低， RBC 通過時(shí)被擠壓或纖維切割所致 . 可見于微血管病性溶血、 DIC 、血栓性血小板減少性紫癜、溶血性尿毒性(d xn)綜合癥、嚴(yán)重?zé)齻?、心瓣膜溶血、行軍?Hb 尿。 （ 4 ）靶形紅細(xì)胞（ Codocyte ）（扁平紅細(xì)胞墨西哥帽形細(xì)胞）：此細(xì)胞比正常紅細(xì)胞薄，細(xì)胞表面積比其容積量相對(duì)較大。靶點(diǎn)（ Hb 的中心點(diǎn)）和周圍 Hb 環(huán)缺乏 連接橋 . 這種細(xì)胞對(duì)滲透脆性試驗(yàn)有較大抵抗性，能耐受比正常紅細(xì)胞更多的水分滲入，使其成為球形乃至最后溶血之前則容積增大 50%

34、，見于地中海性貧血、 Hb-S-C 病、脾切除后及阻塞性肝病。因卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶（ LCAT ）減少或缺乏，使血清中膽固醇與卵磷脂積聚 , 影響了細(xì)胞膜的改變 而致靶形 細(xì)胞。 （ 5 ）淚滴紅細(xì)胞（ Pacryocyte ）：此細(xì)胞形如淚滴狀、網(wǎng)球拍形、長(zhǎng)形或豆點(diǎn)狀 . 見于骨髓纖維化。 （ 6 ）球形紅細(xì)胞（ Spherocyte ）：此細(xì)胞胞體比正常的較小，濃染的圓球形，平均厚度增大（ 厚徑 3.2mm ） , 直徑縮小 ( 6.3mm ) ， MCV 正常，中心淡染區(qū)消失，由于變形性差，故易發(fā)生溶血，正常人有 20% ）、獲得性球形紅細(xì)胞增多癥（如 ABO 血型不合引起新生兒溶血

35、性貧血）。 （ 7 ）橢圓形紅細(xì)胞（ Elliplocyte ）：為卵圓形，如駱駝的紅細(xì)胞，此為紅細(xì)胞膜的缺陷。正常人 70% ，此病為顯性遺傳，男女均可，同等遺傳，可能與 Rh 因子有關(guān) . 未成熟的紅細(xì)胞仍為圓形，而無此種改變。在出生后第 3 個(gè)月始出現(xiàn)明顯異常。約 2% 受孕者有輕度溶血現(xiàn)象， Hb 多為正常（代償性）或減低（失代償性）。此種紅細(xì)胞在 37 孵育 48 小時(shí)可發(fā)生自溶，加葡萄糖和 ATP 即可糾正。 （ 8 ）口形(kuxng)紅細(xì)胞（ Stomatocyte ）：此種紅細(xì)胞中央為中空裂隙，形如口形或橢圓形淡染區(qū)，又因該細(xì)胞內(nèi)水分減少，故又稱為干細(xì)胞（ Xerocyte

36、）。在 37 自溶加重，但加葡萄糖癥狀(zhngzhung)減輕，細(xì)胞內(nèi) G6PD 和 PK 活性升高，但還原型谷胱甘肽濃度很低，過度失 K 和 Na 時(shí)異常增加。小量口形紅細(xì)胞增多見于：肝硬化、遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、輕型地中海貧血、鉛中毒、傳染性單核細(xì)胞增多癥、谷胱甘肽過氧化物酶缺乏，惡性腫瘤及酒精中毒等。明顯增多見于有溶血性貧血的口形紅細(xì)胞增多癥。 作者(zuzh)：198585912005-5-27 19:51 回復(fù)此發(fā)言 - 9 外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及技巧 （ 9 ） 鐮 形紅細(xì)胞（ Drepanocyte ）：由于 Hb-S 的聚合作用，在缺氧情況 下方致 紅細(xì)胞變成鐮刀狀、細(xì)長(zhǎng)新

37、月形、燕麥形等形狀。此種細(xì)胞被脾臟阻止破壞產(chǎn)生血管外溶血。多見于黑人 Hb-S 病， 鐮 變?cè)囼?yàn)是用還原劑偏重亞硫酸鈉（ 具有奪氧作用 ）處理后，造成紅細(xì)胞的 鐮 變更明顯。此為診斷 Hb-S 方法之一。 （ 10 ） 緡 錢狀排列：紅細(xì)胞在有異常高分子蛋白環(huán)境中呈 緡 錢狀排列，多見于多發(fā)性骨髓瘤、華氏巨球蛋白血癥以及免疫球蛋白增多癥。 5 外周血中出現(xiàn)有核（巨）紅（幼粒）細(xì)胞意義： 外周血中有核（巨）紅細(xì)胞的出現(xiàn)提示紅細(xì)胞成熟紊亂，是嚴(yán)重疾病的反應(yīng)，見于： （ 1 ）血片中有幼紅、幼粒細(xì)胞及點(diǎn)彩紅細(xì)胞， Howell-Jolly 小體出現(xiàn)，常見于：溶血性貧血、 PNH 、自家免疫性貧血、新

38、生兒溶血性貧血（ Rh 、 ABO 不和等）。嬰兒假白血病性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、紅細(xì)胞酶缺乏性貧血（ PK 、 G6PD ）、 Hb 病、不穩(wěn)定血紅蛋白以及極度貧血等。 （ 2 ）急慢性白血病、紅血病及紅白血病、 MDS 、骨髓纖維化以及其他一些骨髓增殖性疾病和真紅、血小板增多癥。 （ 3 ）晚期腫瘤反應(yīng)及臨床危象反應(yīng)。 以上異常紅細(xì)胞的臨床意義，必須結(jié)合臨床及其他檢查綜合分析(fnx)。這些異常紅細(xì)胞只能作為陽性發(fā)現(xiàn)的一部分或者起向?qū)ё饔茫瑳Q不能單憑紅細(xì)胞異常的出現(xiàn)就武斷做診斷，因許多情況如技術(shù)原因（即人為的）造成假相是常有的。 （三）外周血血小板及巨核細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷(zhndun)技巧： 1 血小板數(shù) : 形態(tài)及聚集性 , 血涂片也是估計(jì) Plt 計(jì)數(shù)主要依據(jù)。根據(jù) RBC 正常值 500 萬 /ul:Plt 正常值 10 20 萬 /ul=RBC:Plt=50:1(2) 個(gè) ， 一個(gè)(y )油鏡視野 RBC 數(shù)約 RBC200 個(gè)： PLT4 8 個(gè)，計(jì)