生物化學(xué)檢驗試驗教案

1、單位教研室姓名課程名稱時 間哪隨瞽粵悅教案:哪陽醫(yī)學(xué)院藥檢學(xué)院檢驗系臨床生物化學(xué)與:分子生物學(xué)檢驗教研室:丁妍臨床生物化學(xué)與檢驗*2009.02.10實驗名稱可見光光譜分析基本技術(shù)（雙縮月尿法測定總蛋白）教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢士均主編，人民衛(wèi)生出版社，第3版授課章節(jié)第一章實驗、第七章實驗授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗 指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求1掌握可見光光譜分析基本技術(shù)、原理、操作方法。2雙縮月尿法測血清總蛋白的原理、操作方法及臨床意義。實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑

2、、蠟筆、力口樣器、紗布、 半自動生化分析儀（GF-D600型）實驗標(biāo)本已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗主 內(nèi)容 及步驟介紹本章介紹應(yīng)用吸收光譜原理進(jìn)行分析，可見光光譜分析基本技術(shù)、 雙縮月尿法測血清總蛋白的原理、操作方法及臨床意義。簡單介紹其它方法1）凱氏定氮法：根據(jù)蛋白質(zhì)平均含氮量16#算，是 公認(rèn)的參考方法，但該方法操作復(fù)雜，不適常規(guī)測定.2）酚試劑法呈色靈敏 度達(dá)雙縮月尿法100倍左右，有利檢出較微量的蛋白質(zhì)，本法適合測定純單一 蛋白質(zhì)，易受還原性化合物的干擾如糖，酚等.3）紫外分光光度法：尿酸和膽 紅素在280nm付近有干擾,不適合血清等復(fù)雜的蛋白質(zhì)測定,適合較純酶,免 疫球蛋白等測定

3、.4）染料結(jié)合法優(yōu)點靈敏快速簡單，缺點是不同蛋白質(zhì)與染 料結(jié)合不一致，試劑對比色杯有吸附作用.5）比濁法如磺基水楊酸法：該法 優(yōu)點是操作簡單靈敏度高，缺點是影響因素多，一般用于測定尿液及腦脊液 等蛋白質(zhì)濃度較低的樣品.1）雙縮月尿法測血清總蛋白的原理：凡分子中含有兩個氨基甲酰基（-CONH-） 的化合物，在堿性溶液中與銅離子作用形成紫紅色的化合物的方法稱為 雙縮月尿法.而蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）也能在堿性溶液中與銅離子作用 形成紫紅（藍(lán)）色的復(fù)合物，顯色強(qiáng)度與樣品中蛋白濃度呈正比，故稱 為雙縮月尿法。此法簡便，靈敏度不高，但對血漿中總蛋白質(zhì)濃度測定較適 用.分析類型為終點法。2）試劑R1

4、:雙縮胭試劑（雙試劑內(nèi)含灑石酸甲鈉作用為溶解 CUSO祺中1為N aOH,2為硫酸銅）R2:校準(zhǔn)物53.6 g/L R3:蒸儲水3）操作方法:加入物B（空白管）S（校準(zhǔn)物）T（則定管）R1雙縮月尿R2校準(zhǔn)物R3蒸儲水 待測物1000N l20仙l1000 n20口1000/20小混勻后，置37度水浴10分鐘，比色杯光徑1.0cm.用540nm波長進(jìn)行比 色，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度數(shù).4）計算T （總蛋白產(chǎn)T總 A/S校 A*S校（g/L）參考范圍 成人66-88 g/L5）臨床意義:血漿中總蛋白質(zhì)濃度 增高見：血清中水分減少使總蛋白質(zhì)濃度相對增高（如嘔吐，腹瀉，高熱及慢性炎癥疾病等）o血

5、清蛋白質(zhì)合成增加（多見骨髓 瘤病人,主要是球蛋白增加）。血漿中總蛋白質(zhì)濃度 降低見于：水鹽滯留血液稀釋。攝入不足。消耗 性疾患（嚴(yán)重結(jié)核，月中瘤）。合成障礙（肝功能受損）。丟失增高（如嚴(yán)重 燒傷，失血，腎病綜合癥等）。操作方法及注意事項6）注意事項：雙縮月尿法測總蛋白只能用于血清（血漿）。該方法并非為 蛋白質(zhì)所特有。 血清膽紅素在540nm波長有最大吸收峰，故黃膽標(biāo)本應(yīng) 作血清空白對照來校正再進(jìn)行比色。 高脂血清加入雙縮月尿試劑如出現(xiàn)混 濁可用用乙醴抽提一次后再進(jìn)行比色。靜脈滴注大量右旋糖酊的病人血清（漿）使結(jié)果明顯增高。7）示范操作及小結(jié)思考題1光譜分析技術(shù)基本原理及注意事項.總蛋白測定的方

6、法學(xué)評價實驗名稱白蛋白、血和腦脊液葡萄糖的測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢士均主編，人民衛(wèi)生出 版社，第3版授課章節(jié)第七章糖及其代謝物的測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢 驗實驗指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握血糖、腦脊液糖測定的原理、操作方法、及方法學(xué)評價。 了對糖尿病診斷的臨床意義實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、力口樣器、 紗布、半自動生化分析儀（GF-D600型）實驗標(biāo)本已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗主要 內(nèi)容 及步驟概述大課中白蛋白測定及糖測定的一些基本情況及實驗室常

7、規(guī)檢 查。一澳甲酚綠測定血清白蛋白的原理、操作方法及臨床意義（只講解不操作）。二糖測定的原理：葡萄糖+O2+H2O在葡萄糖氧化酶的作IT下生成葡 萄糖酸 +4H2O , H2O2+4-Aminophenaxone+Phenol 在過氧化物酶作 IT下生成酶亞胺+4H2O。顏色的變化與葡萄糖的濃度成比例，在 505 nm外測其吸光度的增加與樣本中葡萄糖的濃度成正比。三試驗中所需試劑試劑R1 :葡錮糖混合單試劑。試劑 R2: 5.55mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液（100小 mol/L）四操作步驟實驗實際操作講解加入物卜lBSTR1試劑100010001000校準(zhǔn)物10H2O10待測物10儀器波長546nm，

8、比色杯1.0cm。反應(yīng)溫度37.0攝氏度10分鐘， 得到標(biāo)準(zhǔn)管 A/min和測定管 A/min ,計算待測物=測定管 A/min/ 標(biāo)準(zhǔn)管 A/min*5.55mmol/L五實驗中注意事項樣本中濃度超過線性，用生理鹽水稀釋樣本。本試劑盒中含有疊氮鈉，勿吞食及接觸皮膚和黏膜。標(biāo)本采集應(yīng)盡量在2小時內(nèi)測定。六實驗臨床意義與小結(jié)正常范圍在4.26.4mmol/l,血糖結(jié)果7.1可確診為糖尿病。七示范操作。實驗名稱血清（漿）脂類及脂蛋白測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢士均主編，人民衛(wèi)生出版社， 第3版授課章節(jié)第八章 血清（漿）脂類及脂蛋白測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘

9、授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗 指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握血脂測定的原理、注意事項及臨床意義。實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、力口樣器、紗布、半 自動生化分析儀（GF-D600型）實驗標(biāo)本已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗主 內(nèi)容 及步驟一 概述，回顧理論課第五章血脂代謝及實驗室常規(guī)檢查項目方法。二檢測TG酶法（GPO-PAP法）三原理血清中的甘油三酯（TG）在脂蛋白脂肪酶的作用下水解成甘油與脂肪酸，用甘油激酶（GK）及三磷酸腺甘（ATP）將甘油磷酸化，生成 3-磷酸甘油（G-3-P）,在磷酸甘油 氧化酶（GPO）的作用下 G

10、-3-P被氧化，產(chǎn)生磷酸二羥丙酮和過氧化氫（ H2O2）。在 色原性氧受體（如聯(lián)大茴香胺，4-氨基安替比林偶聯(lián)酚）的存在下，過氧化物酶（POD） 催化過氧化氫，氧化色素原，生成有色化合物。反應(yīng)式如下TG + 3H2O甘油 + 3-RCOOHGK Mg甘油 + ATPG-3-P+ADPGK MgG-3-P + O2磷酸二羥丙酮+ H2O22H2O2 + 4-氨基安替比林十酚POD 醍亞胺+ 4H2O四試劑五操作主要參數(shù)見下表加入物測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清（1 l）20標(biāo)準(zhǔn)液（“）20蒸儲水（”）20混合試劑（”）200020002000混勻，37 C,孵育5min,波長500nm，比色杯光徑1.0

11、cm,以空白管調(diào)零，分別讀取 標(biāo)準(zhǔn)管及測定管吸光度。六計算測定管A血清TG （ mmol/L ）=標(biāo)準(zhǔn)管A x TG標(biāo)準(zhǔn)液濃度 七參考值正常人TG水平受生活條件影響，我國人低于歐美人， 成年以后隨年齡上升。TG水平的個體內(nèi)與個體間差異都比TC大，人群調(diào)查的數(shù)據(jù)比較分散，呈明顯偏正態(tài)分布。營養(yǎng)良好的中青年平均值以去除FG計約0.901.10mmol/L ,老年前期與老年人平均超過1.13mmol/L , 95百分位數(shù)在中青年約為1.69mmol/L ,老年約為 2.26mmol/L。美國國家膽固醇教育計劃對空腹TG水平劃分界限的修訂意見（1993）是：TG 正常:v 2.23 mmol/L（20

12、0mg/dl）增高的邊緣：2.34.5mmol/L高 TG 血癥： 4.5mmol/L 胰腺炎高危： 11.3mmol/L 八臨床意義高TG血癥也有原發(fā)與繼發(fā)兩類，前者多有遺傳因素，其中包括家族性高 TG血癥與 家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)的見于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺機(jī)能不 足、腎病綜合癥、妊娠、口服避孕藥、酗酒等，但不易分辨原發(fā)或繼發(fā)。高血壓病、 腦血管病、冠心病、糖尿病、肥胖與高脂蛋白血癥等往往有家族聚集現(xiàn)象，其間可能 有因果關(guān)系，但也可能僅僅是伴發(fā)現(xiàn)象；例如糖尿病患者胰島素與糖代謝異常可繼發(fā) TG （或同時有TG）升高，但也可能同時有糖尿病與高TG兩種遺傳因素。冠心病患者TG

13、偏高的比一般人群中多見，但這種患者LDL-C偏高的比一般人群中多見，但這種患者LDL-C偏高與HDL-C偏低也多見。一般認(rèn)為單獨有高TG不是冠心病的獨立危險因素，只有伴有高TC、高LDL-C、低HDL-C等情況時才有病理意義。操作方法及注意事 項酶法（CHOD-PAP）測定血清中的膽固醇 一）原理血清中的膽固醇酯（CE）被膽固醇酯水解酶水解成游離的膽固醇（CHOL）,后者被膽固醇氧化酶（CHOD ）氧化成A 4-膽管烯酮并產(chǎn)生過氧化氫。在色原性氧受體（如聯(lián)大茴香胺，4-氨基安替比林偶聯(lián)酚）的存在下，過氧化物酶催化過氧化氫，氧化色 素原，生成有色化合物。反應(yīng)式如下CEH膽固醇酯+ 2H2O膽固醇

14、+游離脂肪酸膽固醇+ O2 CHODA 4-膽管烯酮+ 2H2O22H2O2 + 4-氨基安替比林十酚 二）試劑POD醍亞胺+ 4H2O三）操作主要參數(shù)見下表加入物測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清(1 l)20標(biāo)準(zhǔn)液（“）20蒸儲水（”）20混合試劑（”）200020002000混勻，37C,孵育5min,用分光光度計，波長500nm比色杯光徑1.0cm,以空白管調(diào)零，分別讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管吸光度。四）計算測定管A血清總膽固醇mmol/L=標(biāo)準(zhǔn)管Ax膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液濃度五）參考值40歲以上人群TC參考范圍大致可定為：正常v 5.17 mmol/L（200mg/dl）輕度增高（或邊緣水平）5.176.47mm

15、ol/L高膽固醇血癥6.47mmol/L嚴(yán)重高膽固醇血癥7.76mmol/L六）臨床意義1、影響TC水平的因素有：年齡與性別，往往隨年齡上升，但到70歲或80歲后有所下降，中青年女性低于男性，50歲后女性高于男性；長期高膽固醇、高飽和脂肪和高熱量飲食使 TC升高；遺傳因素；其他，如缺少運動、腦力勞動、精神緊張 等可能使TC升高。2、TC血癥是冠心病的主要危險因素之一。病理狀態(tài)下高TC血癥有原發(fā)和繼發(fā)的兩類。原發(fā)的如家族性高 TC血癥（低密度脂蛋白受體缺陷）、家族性ApoB缺陷癥、多 源性高TC、混合性高脂蛋白血癥。 繼發(fā)的見于腎病綜合征、甲狀腺機(jī)能減退、糖尿病、妊娠等。3、低TC血癥也有原發(fā)和

16、繼發(fā)的兩類，前者如家族性的無3或低3脂蛋白血癥；后者如甲亢、營養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病等。 低TC容易發(fā)生腦出血，也可能易患癌癥（未 證實）4、肝臟是膽固醇及膽固醇卵磷脂?；D(zhuǎn)移酶（ LCAT）合成的器官，嚴(yán)重的肝病患者 血清TC不一定很低，（1由于血清LCAT活力低下，血清膽固醇酯占TC的比例可低達(dá)50%以下。實驗名稱血清（血漿）丙氨酸匆基轉(zhuǎn)移酶的測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢士均主編，人民衛(wèi)生出版社，第3版授課章節(jié)第十三章常用酶類測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗 指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握酶法測

17、定血漿ALT的原理、注意事項及臨床意義。實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、力口樣器、紗布、 半自動生化分析儀（GF-D600型）已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗標(biāo)本實驗主要內(nèi)容 一概述，回顧大課中第九章肝臟的一些基本情況及實驗室常規(guī)檢查項目方 及步驟法。二 檢測原理：在ALT連續(xù)臨測法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：L-丙氨酸+ a-酮戊二酸 LT丙酮酸+L-谷氨酸丙氨酸 +NADH + H+LDH L-孚L酸+NAD+上述偶聯(lián)反應(yīng)中，NADH勺氧化速率與標(biāo)本中酶活性呈正比，在此 340nM波長 處，NADHg現(xiàn)特征性吸收峰，而 NADM沒有。因此，可在340nM監(jiān)測吸

18、光度 的下降速率（A A/min）,計算出ALT的活力單位。試劑：LABCft化試劑按5: 1配成應(yīng)用液，試劑成分：試齊IITris緩沖液100mmol/LL-丙氨酸500mmol/LNADH0.18mmol/LpH7.3試劑IIa -酮戊二酸15mmol/L三實驗實際操作講解 儀器波長340nm,比色杯1.0cm,反應(yīng)溫度37.0 C ,按 卜表操作：加入物待測標(biāo)本（）200試劑（口）2000在37.0 C水浴，每隔1min讀一次吸光度，共讀三次，計算平均A A/min。計 算待測標(biāo)本血漿：U/L=1746* A A/min。參考值 0-45U/L四實驗中注意事項1、必須嚴(yán)格控制反應(yīng)時間2、

19、控制反應(yīng)溫度3、血清中存在的a-酮酸（如丙酮酸）能消耗NADH血清中谷氨酸脫氫酶（GLDH 增高時，在有氨存在的條件下，亦能消耗 NADH上述副反應(yīng)都能消耗NADH 使340 nm處吸光度下降值（A A/min）增加，使測定結(jié)果偏高。因此，在單 試劑法中必須要有足量的LDH才能保證a-酮酸（尤當(dāng)遇到丙酮酸含量升高 的標(biāo)本）引起的副反應(yīng)在規(guī)定的延滯期內(nèi)進(jìn)行完畢。標(biāo)本中ALT活性太高，測定應(yīng)稀釋5-10倍。五實驗臨床意義：1、肝膽疾?。簜魅拘愿窝?、肝癌、肝硬變活動期、中毒性肝炎、脂肪肝、膽 管炎和膽囊炎等水平升高（ALT水平升高）。2、心血管疾病：心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭時的肝臟瘀血、腦出血等。

20、ALT 水平升高。3、骨骼疾病、多發(fā)性肌炎、肌營養(yǎng)不良等。ALT水平升高。4、某些藥物和毒物可引起 ALT活性升高.如：氯丙嗪、異菸肥、奎寧、水楊酸 制劑及酒精、鉛、汞。ALT水平升高。實驗名稱血清（血漿）總膽紅素的測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢士均主編，人民衛(wèi)生出版社，第3版授課章節(jié)第十三章非蛋白含氮化合物及總膽汁酸測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗 實驗指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握酶法測定血漿ALT的原理、注意事項及臨床意義。實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、力口樣器

21、、紗布、 半自動生化分析儀（GF-D600型）實驗標(biāo)本已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗主要內(nèi)容 及步驟一總膽紅素（TBI ）重氮法測定一）原理：總膽紅素（TBI）在二甲亞碉等加速劑作用下，在酸性溶液中與重氮苯磺酸 作用生成紫色的偶氮膽紅素，與經(jīng)過同樣外理的校準(zhǔn)液比校，即可計算出樣品中總紅素 的含量。二）試劑：（R1:R2按50: 1）R1 : HCL、對氨基苯磺酸、二甲亞碉R2:亞硝酸鈉（72mmol/L ）三）操作（終點法）加入物（“）測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清（漿）50標(biāo)準(zhǔn)液50蒸儲水50混合試劑800800800混勻，37 C,孵育5min,用分光光度計，波長 560nm、比色杯光徑1.0c

22、m,以工作液 調(diào)零，測定各管吸光度值。測定管A四）計算：血清膽紅素 mmol/L=標(biāo)準(zhǔn)管Ax膽紅素校準(zhǔn)液濃度五）參考范圍：5.119 pmol/L二直接膽紅素（DBi ）重氮法測定原理：直接膽紅素在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素，與經(jīng)過同樣外理的校準(zhǔn)液比校，即可計算出樣品中直接紅素的含量。試齊J: R1:同上TBI , R2:亞硝酸鈉（25mmol/L ）操作加入物（“）測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清（漿）50標(biāo)準(zhǔn)液50蒸儲水50混合試劑800800800混勻，37 C,孵育2min,用分光光度計，波長560nm、比色杯光徑1.0cm,以工作液調(diào)零， 測定各管吸光度值。測定管A四）計算

23、：血清直接膽紅素mmol/L=標(biāo)準(zhǔn)目Ax直接膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液濃度五）參考范圍：1.76.8 mol/L六）臨床意義：1是后尢黃疸及黃疸程度的鑒別，2是肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后的判斷如膽汁淤積型，肝細(xì)胞受累輕，血清膽紅素卻可升高。3直接膽紅素與總膽紅素的比值可用于鑒別黃疸的類別。比值 60 %為阻塞性黃疸，后兩類之間有重疊。4再障及其它繼發(fā)貧血，血清總膽紅素減少。七）注意事項：本度劑盒不適于肝素抗凝血漿。嚴(yán)重溶血時可使測定結(jié)果低，脂血有干擾。直接膽紅素至今無候選參考方法。直接分光光度法主要用于3個月齡前的新生兒血清總膽紅素測定，微量而快速。膽紅素對光敏感，標(biāo)本液及標(biāo)本均應(yīng)盡避光保存。 疊氮鈉能破壞重氮試

24、劑，終止偶氮反應(yīng)?？偰懪c直膽測定利用它們反應(yīng)時間的不同。八）示范操作講解：實驗名稱血清（血漿）鈣離子的測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢士均主編，人民衛(wèi)生出版社，第3版授課章節(jié)第九章血清無機(jī)離子及微量兀素測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗 指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握鈣離子的測定的原理、 操作方法、注意事項及臨床意義實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、力口樣器、紗布、 半自動生化分析儀（GF-D600型）已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗標(biāo)本實驗主 要內(nèi)容 一）概述，回顧理論

25、課第八章體液平衡及實驗室常規(guī)檢查項目及步驟二）血清總鈣測定（鄰-甲酚酬:絡(luò)酮比色法）原理：在堿性條件下，樣品中鈣離子與鄰-甲酚Mt絡(luò)合酮生成（紫）紅色絡(luò)合物，顏色的深淺與鈣離子的濃度成正比。鄰-甲酚血:絡(luò)合酮是金屬絡(luò)合指示劑， 同時也是酸堿指示劑， 在堿性溶液中與鈣及 鎂螯合，生成紫紅色螯合物。作車測定時，在試劑中加入8-羥基唾咻以消除標(biāo)本中鎂離子的干擾。三）試劑：R1 :乙醇胺緩沖液 R2:鄰甲酚酬:絡(luò)合酮顯色劑、8-羥基唾咻，鈣標(biāo)準(zhǔn)液 工作液R1+R2 四）操作：加入物（“）測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管混合試劑100010001000標(biāo)準(zhǔn)液20蒸儲水20血清（漿）20混勻，保溫5min后，分光光度計

26、波長 600nm , 1.0cm光徑比色杯用空白管調(diào)零，讀取 各管吸光度。（試劑空白0.3五）計算測定管A血清鈣mmol/L=標(biāo)準(zhǔn)管A x 2.5六）參考值 成人：2.03 2.54mmol/L （8.11 10.15mg/dl） 兒童：2.25 2.67mmol/L （8.98 10.78mg/dl）七）注意事項：樣品中鈣超過3.75mmol/L要稀釋。測定前儀器管道及比色杯等必 須用清洗液清洗以免鈣的污染。如標(biāo)本混濁、黃疸或溶血，需做校正試驗，于空白管中各加入（蒸儲水 1ml+50（ “），再測吸光度，兩次讀取的吸光度差，即為校正吸光 度。用血清或肝素抗凝血漿標(biāo)本，不能用鈣螯合劑（ EDT

27、A-Na2 ）及草酸鹽作抗凝劑 的標(biāo)本。鄰-甲酚絡(luò)合酮試劑靈敏度很高，所用的試劑和器皿如有微量的鈣污染亦會引起測定誤差，故此測定最好用一次性使用的塑料管，所有試劑應(yīng)在聚乙烯瓶內(nèi)保存。如果條件 不允許而用玻璃試管和器皿時，一定要經(jīng)稀鹽酸泡洗，再用去離子水沖凈后方可使用。原子吸收光譜法（AAS ）為鈣血漿測定的參考方法。用來作血清總鈣測定的堿性緩沖液較多，可根據(jù)條件選用。常用的有乙二胺-氧化鉀、乙二胺-醋酸鉀-鹽酸、乙二胺-乙二醇、乙醇胺硼酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等。用乙二月安-乙二醇緩沖液測定較穩(wěn)定。乙醇胺硼酸緩沖液緩沖容量較大，并能使空白試劑的吸光度保持較低讀數(shù)。2-氨基-2-甲基-1

28、-丙醇無毒，無刺激性，也能使空白管有較低的讀 數(shù)。若試劑吸光度較高時，則標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過零點，產(chǎn)生負(fù)截距。遇此情況，可在試劑中加入適量的 EDTA-Na2 （注意：試劑 應(yīng)呈淡紫色，不可無色）或用 1.25、2.5mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)液作二點定標(biāo).。臨床意義：鈣升高見于：甲亢、代謝性酸中毒、腫瘤、維生素 D過多癥等。鈣離子降低見于：甲減、慢性腎衰、云腎移植或進(jìn)行血液透析患者、維生素D缺乏癥、呼吸性或代謝性堿中毒、燒傷或手術(shù)、膿毒血癥、新生兒低鈣血癥等。實驗名稱血清（血漿）尿素的測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo) 錢土土勻主編，人民衛(wèi)生出版社，第3 版授課章節(jié)第十二章非蛋白含氮化合物及

29、總膽汁酸測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗 實驗指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握尿素的測7E的原理、操作方法、注息事項及臨床息義實驗器材與 試齊微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、加樣器、紗布、半自動生化分析儀（GF-D600型）實驗標(biāo)本已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗主要內(nèi) 容及步驟酶法測定血清尿素氮測定：尿素是蛋白質(zhì)分解代謝的含氮終產(chǎn)物，區(qū)別腎前和腎后氮血癥可同時檢測尿素和肌酊。一尿素濃度測定（尿素bi法）原理：尿素在月尿酶的催化作m下生成兩個分子的 氨離子，在a-酮戊二酸和NADH （還原型輔酶1）經(jīng)過合氨

30、酸脫氫酶的作用卜 生成L 谷氨酸和氧化型輔酶I （NAD+）,引起吸光度的下降，在固定的時間內(nèi) 吸光度卜降的比例與標(biāo)本中尿素的濃度成正比。二試劑：1試劑1 （R1）成份：緩沖液PH7.8、a-酮戊二酸、ADP、月尿酶、 谷氨酸脫氫酶（GLDH ）試齊1J 2 （R2）成份：NADH0.25mmol/L標(biāo)準(zhǔn)品：尿素8.33mmol/L三操作方法：儀器波長510nm,比色杯1.0cm.反應(yīng)溫度37.0攝氏度將試劑R1 與試劑R2按4比1混合。操作同肌樣，樣本與試劑 1: 101,如上表。方 法為兩點法。四實驗臨床意義：區(qū)別腎前性和腎后性氮血癥及腎實質(zhì)性疾病，常與肌酊同時 測定。五注息事項a）試劑中

31、含疊氮鈉為防腐劑，不可入口！避免接觸皮膚及粘膜，尿標(biāo)本應(yīng)用蒸儲水作1+100稀釋結(jié)果b）俊離子會影響檢測結(jié)果，勿用肝素胺抗凝。c）尿素測定的敏感性高于肌酊的測定、但受干攏因素多，肌酊的特異 性高于尿素、受影響小。六 思考題：血清尿素氮測定的臨床意義及尿素氮代謝的途經(jīng)。實驗名稱血清（血漿）肌酊的測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢士均主編，人民衛(wèi)生出版 社，第3版授課章節(jié)第十二章非蛋白含氮化合物及總膽汁酸測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢 驗實驗指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握肌酊的測定的原理、操作方法、注意事項及臨床

32、意義實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、力口樣器、紗布、半自動生化分析儀（GF-D600型）實驗標(biāo)本已采集的肝素鈉抗凝的全血標(biāo)本實驗主要內(nèi)容 及步驟概述：回顧大課中第十章腎臟的一些基本情況及實驗室常規(guī)檢查項目方法 一堿性苦味酸速率法測定：肌酊是通過腎臟由腎小球濾過作用排泄的廢 物。健康人血漿中肌酊的濃度相當(dāng)穩(wěn)定，與每天水的攝取量、活動和生成 尿量無關(guān)。因此血漿肌酊水平升高常才旨示排泄量的降低，即腎功能受損。 二實驗實際操作講解（速率兩點法），儀器波長490-510nm比色杯1.0cm. 反應(yīng)溫度37.0攝氏度，按卜表操作，得到校準(zhǔn)物 A=標(biāo)準(zhǔn)4A2-標(biāo)準(zhǔn) A1

33、,待測標(biāo)本4 A=標(biāo)準(zhǔn) A2-標(biāo)準(zhǔn)4A1 ,計算待測標(biāo)本血漿肌酊=測定管 A/min/標(biāo)準(zhǔn)管/ A/min*100加入物S （校準(zhǔn)物）T （待測標(biāo)本）R1試劑苦味酸：1000(1200)小1000(1200) l 1孵育5分鐘R2試劑氫氧化鈉250(300)/250(300)/S （校準(zhǔn)物）100 (BUN10)仙 l100 (BUN10)仙 lT （待測標(biāo)本）1100 口100仙 l延遲30秒記錄吸光度A1A1A160秒時記錄吸光度AA2A2計算男值 5 3 106 仙 mol/L女性參考值 44-97 m mol/L三 實驗臨床意義：反映GFR的后期指標(biāo)（腎功不全）是診斷尿毒癥期非 常重要

34、的指標(biāo)。Scr:13317 mol/L （代償期）Scr:178442卜mol/L （失代償期）Scr:443707卜mol/L （腎衰竭期）Scr: 707 m mol/L （尿毒癥期四實驗中注思兼項.必須嚴(yán)格控制反應(yīng)時間，以避免快速或慢速反應(yīng)假肌酊物質(zhì)的干擾.溶血產(chǎn)生的紅細(xì)胞內(nèi)非特異性物質(zhì)將干擾反應(yīng).膽紅素可引起負(fù)偏差等等.試劑2中苦味酸，吸入、接觸皮膚、吞咽將會中毒。.本試驗的呈色反應(yīng)物異性不圖。丙酮干擾此反應(yīng)，應(yīng)避免丙酮污染。.尿中肌酊測定應(yīng)稀釋2050倍。.此法特異性差（不能根本消除），但此法即能去蛋白手工操作，也能上 儀器進(jìn)行自動操作（速率法）臨床應(yīng)用廣，肌酊酶法雖好但酶不易取得臨

35、 床應(yīng)用少。五示范操作。六思考題：1血清尿素氮、肌酊和尿酸測定的臨床意義。2尿素氮與肌酊代謝的途經(jīng)。實驗名稱LDH （乳酸脫氫酶）的測定教材 選用臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo)錢土土勻主編，人民衛(wèi)生出版社，第3版授課章節(jié)第十三章常用酶類的測定授課對象2005級檢驗學(xué)時3時間120分鐘授課地點藥檢學(xué)院第三實驗室教材臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗 實驗指導(dǎo)第三版實驗?zāi)康?與要求掌握LDH （乳酸脫氫酶）的測定的原理、 操作方法、注意事項及臨 床意義實驗器材與試 劑微量吸管、吸頭、試管、移液管、生理鹽水、試劑、蠟筆、力口樣器、紗布、半自動生化分析儀（GF-D600型）實驗標(biāo)本已采集的肝素鈉抗凝的全血

36、標(biāo)本實驗主 要內(nèi)容 一）概述，回顧大課中第十一章心臟疾病的生物學(xué)標(biāo)志物及實驗室常及步驟規(guī)檢查項目方法。二）檢測原理：連續(xù)監(jiān)測法（LDH-L法）L-孚 I酸+NAD+ -LDH 丙酮酸 +NADH+H+在反應(yīng)過程中，孚L酸氧化成丙酮酸，同時 NAD+還原成NADH ,引起340nm吸光 度的增高，吸光度的增高速率與樣本中LDH活性呈正比關(guān)系。三）試劑： R1 : NAD（酵母,MW663.4）6.5 mmol/L R2： Tris-HCl 緩沖液 100mmol/L , L-乳酸鋰（MW96.01） 52mmol/L , KCL100 mmol/L 。四）操作：取一定量 R2 （參看R1瓶簽）加

37、入1瓶R1中，輕輕搖動，并倒置幾次，完 全溶解后，即為工作液，工作液預(yù)先保溫至測試溫度。空 白管樣 品管工1.1.作液00ml00ml-M- 外 八、0.儲水02ml-樣0.品-02ml混合均勻，在反應(yīng)溫度保溫 30秒鐘，讀取初始吸光度，同時開始記時，在精確 1, 2, 3分鐘時，分別讀取吸光度，確定每分鐘平均吸光度變化（A/分）。五）計 算：LDH-L（U/L） = （ AA樣品/分一 A空白/分）XFVtF = X 1000 = 8095 （Vt=反應(yīng)總體積 Vs =樣品體積）Vs X消光系數(shù)【參考值】109-245U/L （37C）六）臨床意義：LDH廣泛存在于各種組織中，而以肝、心肌、腎臟、骨骼 肌、胰腺和肺最多。血增高見于心肌梗死、心肌炎、肝病、惡性月中瘤、腎病、 肺梗死、貧血、白血病、妊娠等。目前臨床測定 LD活性常用于心肌梗死、 肝病和惡性月中瘤的輔助診斷。LDH活性降低目前沒有發(fā)現(xiàn)重要的臨床意義。七）注意事項：. LDH是臨床上應(yīng)用較多的一種脫氫酶是糖酵解和糖異生的一個重要的酶， 屬于氧化還原酶類，催化乳酸氧化成丙酮酸，NAD為氫的受體.正向反應(yīng)（乳酸 一丙酮酸）最適pH8.8s9.8;逆向反應(yīng)（丙酮酸一乳酸）最適pH7.47.8.最適pH 隨著酶的來源、反應(yīng)溫度以及底物和緩