4DNA重組技術(shù)的基本工具

1、1據(jù)WTO調(diào)查：全球每年共有7萬人死于狂犬病，同時全球每年因狂犬病而耗資40億美元。 中國衛(wèi)生部通報： 中國狂犬病死亡人數(shù)位居全球第二能產(chǎn)生狂犬病抗體蛋白的轉(zhuǎn)基因煙草2基因工程3 基因工程，又叫DNA重組技術(shù)或基因拼接技術(shù)，就是指按照人們的愿望，把一種生物的某種基因提取出來，加以修飾改造，然后放到另一種生物的細胞里，定向地改造生物的遺傳性狀。4問題探討：蘇云金芽孢桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。讓細菌的毒蛋白基因在棉花細胞中表達，可培育出抵抗棉鈴蟲害的抗蟲棉。想一想需要做哪些關(guān)鍵工作？普通棉花抗蟲棉5普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因棉花細胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)

2、上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？重組DNA導(dǎo)入形成基因工程培育抗蟲棉的簡要過程6基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細胞內(nèi)提取出來關(guān)鍵步驟二：目的基因與運載體結(jié)合，形成重組DNA關(guān)鍵步驟三：重組DNA導(dǎo)入受體(棉花)細胞基因的“剪刀” 限制性核酸內(nèi)切酶基因的“針線” DNA連接酶基因的“運載體” 基因進入受體細胞的載體7基因的“剪刀” 限制性核酸內(nèi)切酶8 現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出多種限制性內(nèi)切酶(限制酶)。EcoRSma粘質(zhì)沙雷氏桿菌（Serratia marcesens）大腸桿菌（Escherichia coli R）練習(xí)：流感嗜血桿菌的d菌株( Hae

3、mophilus influenzae d )中先后分離到3種限制酶，則分別命名為:Hind、Hind和Hind9 A G10限制性內(nèi)切酶作用過程 點擊播放1112EcoR黏性末端黏性末端13Sma平末端平末端14基因的針線-DNA連接酶點擊播放15生物A基因片段生物B基因片段EcoREcoRDNA連接酶16 可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，DNA連接酶即恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵17DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低18DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位相同點雙鏈單鏈在兩DNA片段之間形成磷酸二酯鍵

4、將單個核苷酸之間形成磷酸二酯鍵都能形成磷酸二酯鍵二者都是蛋白質(zhì)類化合物19基因的“運載體” 基因進入受體細胞的載體1.作用：2.常用的種類：質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒。將外源基因送入受體細胞。 20質(zhì) 粒213.質(zhì)粒的特點： 一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細菌擬核DNA分子外并能自我復(fù)制的小型雙鏈環(huán)狀DNA分子。224.作為運載體的必要條件:a、能在宿主細胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定地保存b、有一個或多個酶切割位點c、具有某些標(biāo)記基因d、對受體細胞無害(便于進行鑒定和篩選)(以便外源基因插入)23基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有特異性切開DNA分子的磷酸二酯鍵DNA連接酶連接磷酸二酯鍵運載體具備的條

5、件質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒種類能自我復(fù)制有一個或多個酶切割位點有標(biāo)記基因?qū)κ荏w細胞無害24基因工程操作的基本步驟1、提取目的基因 從供體細胞的DNA中直接分離基因 人工合成基因會出現(xiàn)三種情況：目的基因與目的基因結(jié)合目的基因與質(zhì)粒結(jié)合質(zhì)粒與質(zhì)粒結(jié)合2、目的基因與運載體結(jié)合253、將目的基因?qū)胧荏w細胞 導(dǎo)入的方法：借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑4、目的基因的檢測和鑒定a、檢測： 通過檢測標(biāo)記基因的有無，來判斷目的基因是否導(dǎo)入b、鑒定：通過特定性狀的產(chǎn)生與否來確定目的基因是否表達 26271.在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ）同種限制酶 B. 兩種限制酶同種連接酶 D. 兩種連接酶A練習(xí)2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是 A、能復(fù)制 （ ） B、有多個限制酶切點 C、具有標(biāo)記基因 D、它是環(huán)狀DNAD283. 基因工程是在DNA分子水平上進行設(shè)計施工的。在