EBV感染-PPT課件(PPT 37頁(yè))

1、EB病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法 及合理運(yùn)用第1頁(yè)，共37頁(yè)。兒童EBV感染診治中存在的問題EBV實(shí)驗(yàn)室診斷方法的選擇和結(jié)果解讀 存在誤區(qū)IM的抗病毒治療較為混亂重癥EBV相關(guān)疾?。–AEBV、EBV-HLH） 等診斷和治療缺乏經(jīng)驗(yàn)第2頁(yè)，共37頁(yè)。EpsteinBarr virus(EBV) 1964年發(fā)現(xiàn)，DNA病毒，皰疹 病毒 人群感染率高，終身潛伏感染， 具有感染-潛伏-活化的特性 腫瘤相關(guān)病毒，每年EBV相關(guān) 腫瘤死亡病例達(dá)15-20萬(wàn) 與很多疾病相關(guān)，幾乎可引起 所有臟器和組織的相關(guān)疾病 細(xì)胞免疫非常重要Khan G et al. Infectious Agents and Cance

2、r, 2014, 9:38.第3頁(yè)，共37頁(yè)。EB病毒持續(xù)感染示意圖原發(fā)感染后， EBV 在人體B淋巴細(xì)胞建 立潛伏感染，只表 達(dá)潛伏抗原，受感 染者成為終生病毒 攜帶者EBV健康攜帶者咽 部不定時(shí)排毒 在機(jī)體免疫功能下 降和某些因素觸發(fā) 下，潛伏的EBV可 以被再激活，引起 病毒復(fù)制及臨床癥 狀Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319第4頁(yè)，共37頁(yè)。EBV感染的流行病學(xué)在我國(guó)，EBV的原發(fā)感染的高峰年齡在兒童，10歲時(shí)90%以上血清陽(yáng)性轉(zhuǎn)化0.200.60.4EBV血清抗體陽(yáng)性轉(zhuǎn)化率10.80-3m10y3m-1y1y-3y3y-6y 6y-10y年齡百分率CA-

3、IgG NA-IgG CA-IgM中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒雜志，2008,22（1）：30-32北京兒童醫(yī)院資料第5頁(yè)，共37頁(yè)。傳染性單核細(xì)胞增多癥（Infectious mononucleosis，IM）慢性活動(dòng)性EB病毒感染（Chronic active EBV infection，CAEBV）EB病毒相關(guān)性嗜血細(xì)胞綜合征（EBV-associated hemophagocytic syndrome, EBVAHS)伴性淋巴增殖綜合征（X-linked lymphoproliferative syndrom）鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma）Burkitts 淋巴瘤（B

4、urkitts lymphoma）何奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma）其他：腦炎，腎炎，間質(zhì)性肺炎，肝炎，多發(fā)性硬化第6頁(yè)，共37頁(yè)。臨床實(shí)踐診斷EBV感染時(shí)需要回答的問題 是否感染EBV? EBV感染的時(shí)相？ 是否EBV活動(dòng)性感染？ 組織或器官中EBV感染的細(xì)胞定位如何？第7頁(yè)，共37頁(yè)。EBV感染相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)血常規(guī)：淋巴細(xì)胞比例50%（學(xué)齡以上兒童）嗜異凝集抗體異型淋巴細(xì)胞EBV特異性抗體熒光定量PCR檢測(cè)EBV核酸EBERs原位雜交實(shí)驗(yàn)：EBV感染受累的組織學(xué)證據(jù)特異性 指標(biāo)非特異 性指標(biāo)第8頁(yè)，共37頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)一：嗜異凝集抗體血清嗜異凝集抗體檢測(cè)也稱“Monosp

5、ot”試驗(yàn)，1932年引 入臨床實(shí)踐診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥該為IgM抗體，在病程第12周出 現(xiàn)，持續(xù)約6個(gè)月在青少年原發(fā)性EBV感染中其陽(yáng)性 率可達(dá)80-90，約10的青少年缺乏對(duì)嗜異性抗體的陽(yáng)性反應(yīng)小于12歲者，EBV感染IM患者該試 驗(yàn)的陽(yáng)性率為25%-50%J Appl Clin Pediatr, 2007,22(22)N Engl J Med. 2010;362:1993-2000第9頁(yè)，共37頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)二：異型淋巴細(xì)胞外周血異型淋巴細(xì)胞比例10%1、在西方國(guó)家，其診斷IM的敏感性為75%，特異性為92%2、學(xué)齡前兒童異型淋巴細(xì)胞比例較低。外周血異型淋巴細(xì)胞 比例 10%的病例在

6、學(xué)齡前兒童EBV-IM中只有41.8%；對(duì)于較 大年齡兒童異型淋巴細(xì)胞的診斷意義更大N Engl J Med. 2010;362:1993-2000World J Pediatr, 2011, 7(1): 45-49第10頁(yè)，共37頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)三: EBV特異性抗體EBV-CA-IgM 檢測(cè)1、近期EBV感染的指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床2、EBV感染的血清學(xué)反應(yīng)復(fù)雜多樣，有的病例抗EBV-CA-IgM產(chǎn)生 延遲，有的持續(xù)缺失或長(zhǎng)時(shí)間存在3、12%-17%大于16歲的青少年原發(fā)EBV感染后不能檢測(cè)到CA-IgM 抗體，且4歲以下幼兒CA-IgM抗體水平低，持續(xù)時(shí)間短，易見假陰性 結(jié)果Gao Li w

7、ei, et al. Chin J Evid Based Pediatr, 2011,6(6):467-470. Robertson P, J Med Virol, 2003,70(4): 617-623第11頁(yè)，共37頁(yè)。單份血清VCA-IgM在診斷 小年齡兒童原發(fā)性EBV感染IM的局限性Pediatrics International (2010) 52, 536540第12頁(yè)，共37頁(yè)。原發(fā)EBV感染的體液免疫原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn) 生針對(duì)衣殼抗原（capsid antigen，CA）IgG和IgM（抗 CA-IgG/IgM） 在急性感染的晚期，抗早期抗原（early angtig

8、en，EA）抗體出現(xiàn)在恢復(fù)期晚期，抗核抗原（nuclear antigen，NA）抗體 產(chǎn)生抗CA-IgG和抗NA-IgG可持續(xù)終身JMD, 2008, 10(4):279-292不同時(shí)間段的抗體譜不同第13頁(yè)，共37頁(yè)。5% 的EBV新近感染 抗CA抗（IgM）陰性在罕見的病例中抗CA 抗體(IgM)會(huì)持續(xù)陽(yáng)性20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗體（IgG）陰性抗EBNA抗體(IgG)陰性體液免疫的特殊情況第14頁(yè)，共37頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)四：EBV病毒核酸檢測(cè)Real-time PCR是目前最主要的監(jiān)測(cè)EBV載量的方法，可以指導(dǎo)治 療和判斷療效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等樣

9、本：血樣本（包括全血、單個(gè)核細(xì)胞、或血清/血漿），非鼻 咽拭子或鼻咽吸取液，不同疾病所需的適宜樣本不同注意：Real-time PCR陽(yáng)性，只能提示機(jī)體存在活動(dòng)性EBV感 染或病毒活動(dòng)性復(fù)制，不能鑒別是原發(fā)EBV感染還是既往EBV感染 再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，因此，單 純Real-time PCR陽(yáng)性在IM診斷中價(jià)值有限第15頁(yè)，共37頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)五：EBERS原位雜交試驗(yàn) EBV潛伏感染的細(xì)胞含有大量的EBER1/EBER2（EBERS） 轉(zhuǎn)錄子 每個(gè)EBV潛伏感染的細(xì)胞含有大約106拷貝EBERS，被認(rèn) 為EBV潛伏感染的最好標(biāo)志物 原位雜交試驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中E

10、BERS是診斷腫瘤是否EBV 相關(guān)的金標(biāo)準(zhǔn)第16頁(yè)，共37頁(yè)。陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照EBV-EBERS陽(yáng)性樣本陰性樣本第17頁(yè)，共37頁(yè)。不同EB病毒相關(guān)腫瘤中EBERS的檢出情況Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319.第18頁(yè)，共37頁(yè)。 是否感染EBV? EBV感染的時(shí)相？臨床實(shí)踐需要回答的問題（一）EBV血清抗體 譜檢測(cè)第19頁(yè)，共37頁(yè)。HH Balfour, et al. Clinical & Translational Immunology, 2015, 4(2) , e33.EBV抗體譜檢測(cè)，可以初步判斷是否感染EBV，以及感 染的大致時(shí)間如EBNA-IgG

11、陽(yáng)性，提示機(jī)體至少已感染EBV近2-3個(gè)月第20頁(yè)，共37頁(yè)。免疫功能正常患者EBV血清學(xué)特點(diǎn)抗EBV抗體VCA-IgMVCA-IgGEBNA-IgG解釋陰性陰性陰性無(wú)免疫反應(yīng)陽(yáng)性陰性陰性急性感染或非特異反應(yīng)1陽(yáng)性陽(yáng)性陰性急性感染陰性陽(yáng)性陽(yáng)性既往感染陰性陽(yáng)性陰性急性感染或既往感染1陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性原發(fā)感染晚期或再激活1陰性陰性陽(yáng)性既往感染或非特異反應(yīng)注：1 有待進(jìn)一步確定World J Virol,2012,1(1):31-43.第21頁(yè)，共37頁(yè)。CAEBV患者EBV抗體檢測(cè)Chin Med J 2009; 122(3):262-266.CAEBV患者EBV抗體譜呈現(xiàn)多種類型，多數(shù)患者 EA-I

12、gG陽(yáng)性，提示活動(dòng)性感染第22頁(yè)，共37頁(yè)。EBV-HLH患者的EBV抗體檢測(cè)Chin Med J. 2010;123(11) :1426-1430.第23頁(yè)，共37頁(yè)。臨床實(shí)踐需要回答的問題（二） 機(jī)體是否存在EBV活動(dòng)性感染？EBV核酸檢測(cè) 何種標(biāo)本送檢？血清/血漿？全血？PBMC?不同疾病需要的送檢標(biāo)本不同第24頁(yè)，共37頁(yè)。J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92.EBV既往感染的健康人群，血清/低血漿中檢測(cè)不到EBV- DNA ；但全血/PBMC標(biāo)本中常有拷貝的EBV-DNA第25頁(yè)，共37頁(yè)。Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319不同

13、EBV相關(guān)疾病中，EBV核酸在外周血中存在區(qū)間不同第26頁(yè)，共37頁(yè)。Expert Rev. Clin. Immunol. 2013, 9(2), 139151.第27頁(yè)，共37頁(yè)。 IM患者外周血中EBV載量在2周內(nèi)達(dá)到峰值，至病程14天，多數(shù)IM 患者血清中已檢測(cè)不到病毒核酸，病程22天后，所有IM血清中均 檢測(cè)不到EBV核酸J Med Virol, 2003, 70(4): 617-623但外周血單個(gè)核細(xì)胞中EBV核酸陽(yáng)性可持續(xù)6個(gè)月以上，需要1年 或更長(zhǎng)時(shí)間達(dá)到EBV健康攜帶者的全血EBV-DNA水平（1-50拷貝 EBV-DNA/106 個(gè)WBC）J Infect Dis, 2013

14、, 207: 80-88J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92標(biāo)本：血清或血漿，不建議使用全血或PBMC標(biāo)本重癥病例監(jiān)測(cè)EBV載量有助于鑒別EBV-HLH第28頁(yè)，共37頁(yè)。絕大多數(shù)CAEBV患者PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷貝/g DNA， CAEBV患者血漿/血清中EBV-DNA水平與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)CAEBV患者血漿和PBMC中EBV核酸載量存線性關(guān)系CAEBV患者EBV-DNA檢測(cè)Blood ,2001 , 98 : 280-286第29頁(yè)，共37頁(yè)。EBV-HLH患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）和血漿/血清均含有很高的 EBV-DNA載量，監(jiān)測(cè)EBV-HLH患者血清中EBV-DNA載量有助于評(píng)估療效EBV-HLH患者EBV-DNA檢測(cè)Leukemia & Lymphoma, 2002, 43: 173-179第30頁(yè)，共37頁(yè)。臨床實(shí)踐需要回答的問題（三） 組織或器官中EBV感染的細(xì)胞定位如何？EBERs檢測(cè)第31頁(yè)，共37頁(yè)。J Hepatol. 2006, 44(5):879-85.EBERRISH 顯示，EBERs陽(yáng)性的細(xì)胞為浸潤(rùn) 的淋巴細(xì)胞（如箭頭所 示），而肝細(xì)胞、膽管 上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中 未見EBV相關(guān)肝損害中，EBV感染的細(xì)胞為淋巴細(xì)胞第32頁(yè)，共37頁(yè)。臨床實(shí)踐診斷EBV感染時(shí)需要回答的問題 是否感染EBV?