NSCLC驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè)組織標(biāo)本替代品的評(píng)價(jià)課件

1、NSCLC驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè)組織標(biāo)本替代品的評(píng)價(jià)2015年CSCO年會(huì)廈門(mén) NSCLC驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè)標(biāo)本類(lèi)型腫瘤組織標(biāo)本 細(xì)胞學(xué)標(biāo)本血液標(biāo)本尿液、唾液標(biāo)本 評(píng)價(jià)組織標(biāo)本替代品病理診斷方面驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè)方面替代品檢測(cè)后靶向治療療效方面肺癌細(xì)胞學(xué)標(biāo)本分類(lèi)胸水、腹水細(xì)胞學(xué)心包積液支氣管肺泡灌洗液痰液FNA（體表腫物穿刺、TBNA、EBUS穿刺標(biāo)本）腦脊液病例1患者，男性，66歲職業(yè)：教師單側(cè)胸腔積液影像學(xué)左下肺門(mén)增大胸水500ml送檢HE染色免疫組化染色CK7BerP4病理診斷結(jié)果（胸水）中找到癌細(xì)胞（腺癌），考慮來(lái)源于肺。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果： CK7(+), CK5(-), WT-1(-), D2-40(-)

2、, CR(-), MC(+), MOC-31 ( +), BerP4(+), TTF-1(+), NapsinA(+), EMA(+)。后臨床支氣管鏡下粘膜充血水腫，未見(jiàn)明確腫塊，但活檢證實(shí)腺癌診斷。胸腔鏡證實(shí)肺腺癌，胸膜轉(zhuǎn)移。病例2患者， 37歲，男性職業(yè)：廚師胸腔積液臨床不能除外間皮瘤可能收集200ml送檢病理診斷結(jié)果(胸水)找到惡性腫瘤細(xì)胞，結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果，符合惡性間皮瘤。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果： CK7(+), CK5(+), WT-1(+), D2-40(+), CR(+), MC(+), MOC-31 ( -), BerP4(-), TTF-1(-), NapsinA(-), De

3、smin(-)。胸膜活檢證實(shí)細(xì)胞學(xué)診斷。高腫瘤含量胸水?dāng)y帶豐富的腫瘤信息高腫瘤含量胸水?dāng)y帶豐富的腫瘤信息胸水進(jìn)行肺腺癌組織學(xué)類(lèi)型診斷在胸水中進(jìn)行ALK融合狀態(tài)檢測(cè)根據(jù)胸水檢測(cè)ALK蛋白表達(dá)與臨床治療關(guān)系No.aAgeSexIHC-ALKFISH-ALKResponseECOG PSTherapyMonthsDiscontinuation of crizotinibP547M+PD1First-line 2YesP882M+CR1First-line10NoP966F+SD1First-line 3YesP1360F+PR1First-line13NoP1652M+PR0Second-line1

4、3NoP2045M+SD1First-line16NoP2150M+SD1Third-line 6NoP2251F+SD3First-line 4NoP2421F+PR3First-line 2NoP2648F+CR1First-line 6NoP2731F+PR1First-line 1No客觀緩解率（ORR ）：54.5% (6/11) 疾病控制率（DCR）：90.9%(10/11)細(xì)胞學(xué)標(biāo)本替代組織學(xué)標(biāo)本總結(jié)在病理診斷方面，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本制作細(xì)胞學(xué)蠟塊后，通過(guò)免疫組化染色，能夠?qū)崿F(xiàn)準(zhǔn)確的病理診斷，可以成為組織學(xué)標(biāo)本良好的替代品；在病理質(zhì)控及采用正確前期處理方法的前提下，所有基因、且一種基因蛋

5、白水平、DNA、RNA改變的分子檢測(cè)均可在細(xì)胞學(xué)標(biāo)本上進(jìn)行，突變率與組織學(xué)檢查突變率相當(dāng)；療效隨訪結(jié)果證實(shí)，與根據(jù)組織學(xué)標(biāo)本所獲的療效一致。血液標(biāo)本正常人血液中可能出現(xiàn)驅(qū)動(dòng)基因改變NC：50例未患腫瘤正常人對(duì)照Log2(2mL血漿中突變片段)NC：50例未患腫瘤正常人對(duì)照Log2(2mL血漿中突變片段)正常人血液中可能出現(xiàn)異常細(xì)胞Diagnostic value of circulating free DNA for the detection of EGFR mutation status in NSCLC: a systematic review and meta-analysisAccu

6、racy of cfDNA for EGFR mutationIndicating cfDNA had high diagnostic accuracy：Compared with NSCLC tumor tissues, the pooled sensitivity and specificity of cfDNA for the detection of EGFR mutation status were 0.674 (95%CI: 0.5170.800) and 0.935 (95%CI: 0.8880.963), respectively; The PLR and NLR of cfD

7、NA were 10.307 (95%CI: 6.16717.227) and 0.348 (95%CI: 0.2260.537), respectively; The DOR was 29.582 (95%CI: 4.58260.012) , SROC with AUC of 0.93 (95% CI: 0.900.95) ; Sub-group: sample size, countries, detection methods, and TNM stages were consistent across different sub-groups.cSMART EGFR L858R血液檢測(cè)

8、cSMART組織樣本ARMS檢測(cè)合計(jì)陽(yáng)性（+）陰性（-）陽(yáng)性（+）24024陰性（-）17879合計(jì)257810396.0% 靈敏度/陽(yáng)性符合率100% 特異性/陰性符合率99.0% 總符合率97.3% Kappa值4mL血漿檢測(cè)樣本編號(hào)第一次2mL血漿檢測(cè)第二次2mL血漿檢測(cè)基因突變突變片段/總片段比例基因突變突變片段/總片段比例C150134EGFRL858R0/28710%EGFRL858R2/39570.051%C150219EGFRL858R0/27060%EGFRL858R1/25020.040%C150300EGFRL858R0/10950%EGFRL858R0/13370%增加

9、血漿量能夠提高對(duì)低比例突變檢測(cè)的靈敏度。cSMART EGFR 19del血液檢測(cè)cSMART組織樣本ARMS檢測(cè)合計(jì)陽(yáng)性（+）陰性（-）陽(yáng)性（+）20020陰性（-）57883合計(jì)257810380.0% 靈敏度/陽(yáng)性符合率100% 特異性/陰性符合率95.2% 總符合率85.8% Kappa值2mL血漿檢測(cè)NC：50例未患腫瘤正常人對(duì)照Log2(2mL血漿中突變片段)cSMART KRAS血液檢測(cè)cSMART組織樣本ARMS檢測(cè)合計(jì)陽(yáng)性（+）陰性（-）陽(yáng)性（+）10010陰性（-）78693合計(jì)178610358.8% 靈敏度/陽(yáng)性符合率100% 特異性/陰性符合率93.2% 總符合率70

10、.5% Kappa值2mL血漿檢測(cè)NC：50例未患腫瘤正常人對(duì)照Log2(2mL血漿中突變片段)片段化 低比例樣本編號(hào)cSMART檢測(cè)結(jié)果ARMS-qPCR檢測(cè)結(jié)果突變位點(diǎn)突變片段/總片段比例C150087Q61H22/27440.80%陰性C150128A146T3/3050 0.10%陰性C150359A146P2/19180.10%陰性超出ARMS檢測(cè)范圍的KRAS突變cSMART ALK血液檢測(cè)cSMART組織樣本ARMS檢測(cè)合計(jì)陽(yáng)性（+）陰性（-）陽(yáng)性（+）303陰性（-）397100合計(jì)69710350.0% 靈敏度/陽(yáng)性符合率100% 特異性/陰性符合率97.1% 總符合率48.

11、5% Kappa值2mL血漿檢測(cè)NC：50例未患腫瘤正常人對(duì)照Log2(2mL血漿中突變片段)突變比例與靶向藥物療效相關(guān)性分析PRSD or PD突變比例6例樣本ctDNA突變比例高于10%的患者，靶向治療療效評(píng)價(jià)均為PR9例樣本ctDNA突變比例低于5%的患者，靶向治療療效評(píng)價(jià)僅1例為PR，其余均為SD或PD血液標(biāo)本作為組織學(xué)標(biāo)本替代品評(píng)價(jià)目前不能應(yīng)用血液標(biāo)本作為病理診斷方面的替代品。驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè)方面，檢測(cè)準(zhǔn)確性患者臨床分期依賴(lài)、檢測(cè)方法依賴(lài)、基因依賴(lài)，只能為無(wú)法獲取組織或細(xì)胞學(xué)樣本時(shí)的替代標(biāo)本。應(yīng)用NGS方法檢測(cè)血漿驅(qū)動(dòng)基因改變，靈敏度及特異性高，且一次檢測(cè)數(shù)種基因改變，采用NGS方法血液

12、標(biāo)本有望在腫瘤治療過(guò)程中，驅(qū)動(dòng)基因檢測(cè)替代組織標(biāo)本。其他體液（尿液） DETECTION OF EGFR T790M MUTATION IN URINARY Ct DNA FROM METASTATIC NSCLC PATIENTS Urine samples were obtained from metastatic NSCLC patients who progressed on treatment with erlotinib; All patients were confirmed to have EGFR T790M mutation by a tumor biopsy CLIA t

13、est. EGFR status was analyzed using a PCR method that amplifies short target DNA fragments using kinetically-favorable binding conditions for a wild type blocking oligonucleotide, followed by massively parallel deep sequencing using MiSeq;Annals of Oncology 26 (Supplement 1): i10i14, 2015DETECTION O

14、F EGFR T790M MUTATION IN URINARY Ct DNA FROM METASTATIC NSCLCPATIENTS The average amount of total amplifiable ctDNA in urine of mNSCLC patients was 0.4 g (range, 0.04 to 2.4 g); Detected T790M mutation in urine samples of 6 out of 6 confirmed EGFR T790M-positive patients; that this methodology successfully detects EGFR T790M mutation load in urinary