科研項目策劃與實施醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入門PPT課件

1、科研項目策劃與實施醫(yī)學(xué)科學(xué)研究入門PPT課件科研項目的策劃與實施研究計劃的安排科研準備工作和實驗室安全實驗的實施機遇靈感組織策劃PI (principal Investigator) 負責制分成若干課題組2-3個研究生完成1個項目制定并遵守實驗室規(guī)則定期Lab Meeting：進展、開題報告、文獻綜述、學(xué)術(shù)討論 跟蹤課題進展；及時解決問題；提高工作效率 定期向?qū)焻R報：進展、問題、下步計劃Journal Club積極參加學(xué)術(shù)交流午餐（茶）聚會學(xué)術(shù)討論 旁人可能提出有益的建議，即使并未直接指出擺脫困境的解決方法，但由于知識背景不同，可能從不同角度觀察問題并提出新方法。（瓊脂） 一個新設(shè)想可能由兩

2、三個人集中各自的知識或設(shè)想而產(chǎn)生。 討論是披露謬誤的寶貴方法。以錯誤知識或推理為基礎(chǔ)的設(shè)想可以通過討論得到及時的糾正。 討論和學(xué)術(shù)交流是開拓思路、了解進展和信息交流的極好機會。 討論有益于擺脫重復(fù)不利的思路。與不熟悉本研究領(lǐng)域的人進行討論，可能對打破固定思路更有幫助。（請教外行） 個人科研計劃安排開題報告：題目名稱、背景、目的、研究內(nèi)容、技術(shù)路線、實驗方案、研究進度安排、預(yù)測結(jié)果、可行性分析研究時間（進度）計劃安排： - 總體時間安排：年度與學(xué)期安排 - 詳細時間安排：月、周計劃（充分利用時間） 注意：提前半年至一年撰寫并發(fā)表SCI論文中期科研報告：主要結(jié)果、存在問題和后續(xù)工作計劃至少預(yù)留1-

3、2個月的時間撰寫學(xué)位論文博士生個人計劃學(xué)期安排第一學(xué)期：上課；查閱課題相關(guān)文獻；做課題相關(guān)綜述；完成開題報告（科研設(shè)計和計劃）；具體的方法學(xué)、數(shù)據(jù)等書面準備工作。第二至四學(xué)期：試劑、器材準備工作；方法學(xué)的摸索；預(yù)試和正式實驗、中期科研報告；第五學(xué)期：繼續(xù)實驗；撰寫并發(fā)表SCI文章第六學(xué)期：補充實驗；撰寫學(xué)位論文并答辯；第二至三學(xué)期、四至五學(xué)期各完成一篇論文。科研項目的策劃與實施研究計劃的安排科研準備工作和實驗室安全實驗的實施機遇靈感科研實施原則充分的準備工作，包括實驗設(shè)計、實驗材料、實驗方法及觀察指標等； 制定操作規(guī)程，包括實驗方案、操作程序、質(zhì)量控制、儀器設(shè)備、標準化及標準操作規(guī)程等； 規(guī)范

4、原始記錄，包括數(shù)據(jù)記錄的準確性、完整性及更改數(shù)據(jù)的規(guī)范性，尤其是數(shù)據(jù)記錄的原始性，牢記書面記錄乃行為發(fā)生的憑證； 審核監(jiān)督，包括課題負責人對課題的監(jiān)督管理、定期檢查和結(jié)果分析等。充分的準備-書面準備工作 實驗方案及技術(shù)路線的設(shè)計確定可靠穩(wěn)定的實驗操作方法：確定實驗體系；設(shè)立實驗對照；選擇質(zhì)量控制標準（如系統(tǒng)誤差允許范圍、隨機誤差降到最低等）；選擇實驗器材；實驗流程的可控性；判斷標準的客觀性實驗材料的明細準備：書面匯集實驗所需材料的名稱、生產(chǎn)廠家、批號、規(guī)格及有效期等信息，同時查詢各類試劑的配方、配制方法和保存條件等。上述信息有利于實驗前準備，也有利于今后檢索。 實驗分組的確定 充分的準備-實驗

5、準備實驗材料與器材的準備；基本操作的訓(xùn)練： 試劑的配制和儲存、試劑的標記和分類 樣品的處理、標記、分裝和儲存 pH值的測定與調(diào)節(jié)、蛋白定量、核酸定量 加樣器的正確使用 實驗室常規(guī)儀器的正確使用；基本方法學(xué)的訓(xùn)練：細胞培養(yǎng)（凍存和復(fù)蘇）、分子生物學(xué)、Western blot、FACS、免疫熒光與組化、ELISA實驗室的安全水電煤氣的安全性 用電設(shè)備的安全操作 玻璃儀器的安全使用 氧氣瓶的安全使用 高壓鍋的安全使用 高溫烤箱的安全使用 化學(xué)試劑的安全使用使用易燃易爆試劑（如乙醇、乙醚等）須遠離明火。揮發(fā)性有毒試劑一般須在通風(fēng)廚中操作，且操作者須進行相應(yīng)防護（如戴口罩）。接觸性有毒試劑應(yīng)戴手套操作，

6、并避免用嘴吸或直接用手觸摸。各種化學(xué)試劑均遠離食品飲料，以防誤食引起中毒。強酸、強堿類試劑須規(guī)范使用，不可過分震搖，以防濺出腐蝕傷人。 放射性同位素的安全防護 同位素的射線類型 ：X射線和射線可危害人體全身多個器官；射線因其穿透性小，僅危害皮膚淺表和眼晶體；射線一般不引起外照射危害 使用放射性物質(zhì)的注意事項 ： 放射性同位素的實驗操作須在同位素乙級實驗室中進行； 放射性物質(zhì)的存放方式要符合射線類型特點； 放射性物質(zhì)的標記須清晰，包括名稱、含量及時間； 放射性廢物須按規(guī)定進行存放和處理； 放射性實驗的操作須進行相應(yīng)屏蔽防護并在專門實驗室中進行； 放射性核素使用過程中對周圍環(huán)境造成的污染須及時被處

7、理； 同位素實驗室應(yīng)配置放射性核素監(jiān)測儀。 生物的安全防護 P1：普通實驗一般在I級實驗室中操作；P2：枯草桿菌、大腸桿菌、腺病毒等須在P2級實驗室操作，并有防蚊要求；P3：烈性傳染病相關(guān)病原研究須在P3實驗室中操作；P4：烈性傳染病的大動物模型實驗須在P4級實驗室中操作。 P3和P4級實驗室均須經(jīng)國家級管理部門認證?？蒲许椖康牟邉澟c實施研究計劃的安排科研準備工作和實驗室安全實驗的實施機遇靈感實驗的實施預(yù)實驗：方法的熟悉；實驗條件的摸索正式試驗：實驗條件和操作標準化，設(shè)計必要的對照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計學(xué)的樣本數(shù)。實驗記錄的正確書寫和實驗數(shù)據(jù)記錄的保存實驗結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。預(yù)實驗的目

8、的在正式實驗前所進行的小規(guī)模實驗。 檢查各項準備工作是否完善； 確定實驗操作方法是否正確可行 ； 獲得某些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，確定合適的樣本數(shù)和必要的統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)，以確保后續(xù)正式實驗的順利進行； 摸索最佳實驗條件； 初步檢驗假說。 某課題在觀察基因修飾的骨髓干細胞對Fischer 344大鼠骨髓重建影響的研究中，研究者僅參照文獻報道中其他品系大鼠及小鼠骨髓抑制模型在建模時使用的鈷60照射劑量，確定了照射方案，未經(jīng)預(yù)實驗而直接開始正式實驗。結(jié)果在隨后“正式”實驗中，因所選照射劑量不適合該品系鼠，多數(shù)模型鼠在極短時間內(nèi)死亡，故無法觀察處理因素產(chǎn)生的效應(yīng)結(jié)果。 預(yù)實驗實驗方法的摸索：選擇正確的實驗技術(shù)（文獻或?qū)?/p>

9、驗方法書）詳細閱讀說明書參觀他人做實驗，并記下筆記自己寫試驗步驟配試劑和實驗材料、器具的準備做實驗。摸索條件的試驗：如藥物劑量的摸索、作用時間的摸索等。導(dǎo)向性實驗：小規(guī)模試驗驗證正式實驗的意義。篩選性試驗：如藥物篩選，用以決定哪種藥物可進一步做實驗。觀測性實驗：是為搜集正式實驗所需數(shù)據(jù)（如均數(shù)、標準差及變異系數(shù)等）而進行的小規(guī)模預(yù)試，目的是對主要實驗的部署進行指導(dǎo)。 以傳染或毒性因子為例，在觀測實驗中, 采用稀釋度間隔很大(如100倍), 用于每一稀釋度的動物很少（如兩頭）的策略。取得結(jié)果后，在可能有作用的滴定終點兩側(cè)再選擇間隔小(如5倍)的稀釋度, 同時使用較大數(shù)量的動物 (如5只)。通過此

10、方法，可用最少量動物而獲得準確的結(jié)果。實驗的實施預(yù)實驗：方法的熟悉；實驗條件的摸索正式試驗：實驗條件和操作標準化，設(shè)計必要的對照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計學(xué)的樣本數(shù)。實驗記錄的正確書寫和實驗數(shù)據(jù)記錄的保存實驗結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。正式實驗決定性試驗：判斷假說的成立與否根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，選定實驗條件，整個實驗過程嚴格控制試驗條件，一般不能隨便改變，已避免試驗結(jié)果的不可比。實驗方法的標準化（步驟、試劑配制、濃度稀釋等）設(shè)計各種必要的對照做好標簽工作（老鼠、組織、切片、試管）必須滿足統(tǒng)計學(xué)分析的足夠樣本數(shù)Nat Immunol. 2004 Nov;5(11):1124-33.正式實驗決定性試驗：判斷

11、假說的成立與否根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，選定實驗條件，整個實驗過程嚴格控制試驗條件，一般不能隨便改變，已避免試驗結(jié)果的不可比。實驗方法的標準化（步驟、試劑配制、濃度稀釋、儀器型號和參數(shù)等）設(shè)計各種必要的對照做好標簽工作（老鼠、組織、切片、試管）必須滿足統(tǒng)計學(xué)分析的足夠樣本數(shù)實 驗 誤 差系統(tǒng)誤差：指一系列測定結(jié)果與真值之間存在同一傾向的誤差，有明顯規(guī)律性，可在一定條件下被重復(fù)，可通過質(zhì)控預(yù)防和校正。（千分卡尺測量腫瘤）隨機誤差：屬一種偶然、無法預(yù)料的誤差，難以校正。過失誤差：純粹屬人為的責任誤差，一般通過實驗室管理和技術(shù)培訓(xùn)可以避免。 控制實驗方法質(zhì)量的關(guān)鍵是規(guī)范意識 ！實驗操作規(guī)程的規(guī)范化 實驗方法標

12、準化的策略應(yīng)首先明確(尤其對某些新的觀察指標)規(guī)定標準化方法的流程，然后制定標準實驗操作規(guī)程，對各個環(huán)節(jié)進行細化處理，保證實驗人員可以不用詢問即可遵照執(zhí)行。 實驗名稱，對于具體課題的實驗操作，名稱應(yīng)是特異性和具體的，勿僅標示通用性實驗名稱； 實驗?zāi)康模?實驗方法； 實驗流程，指在實驗?zāi)康闹笇?dǎo)下的特定流程，每個具體步驟均應(yīng)詳細注明實驗中實際應(yīng)用的試劑名稱或劑量等，避免通用性的實驗流程； 實驗材料及儀器設(shè)備等。 標準物的選擇：為建立標準實驗體系，選擇標準品，并在預(yù)實驗中利用標準品確定各種實驗條件（包括最佳劑量、最佳時間和判斷標準等）。然后，以此數(shù)據(jù)作為測試樣品的標準定量或定性參數(shù)。（蛋白定量、信號

13、分子磷酸化）操作程序的控制：建立標準操作流程，實驗操作人員僅進行機械性操作，無需任何想象、設(shè)計和預(yù)測，故要求在操作之間制定嚴密的操作流程和設(shè)計方案。（隨機性是造成實驗誤差的最常見原因，如電話及其它無關(guān)事情的干擾；協(xié)調(diào)標準化和靈活性）試劑儀器的選擇：實驗過程中應(yīng)采用同一廠商相同批號或相同規(guī)格的試劑，以基本保證不同批次實驗的差異并非由試劑所致。儀器規(guī)格、型號也可能影響實驗。實驗操作規(guī)程的規(guī)范化正式實驗決定性試驗：判斷假說的成立與否根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，選定實驗條件，整個實驗過程嚴格控制試驗條件，一般不能隨便改變，已避免試驗結(jié)果的不可比。實驗方法的標準化（步驟、試劑配制、濃度稀釋等）設(shè)計各種必要的對照做好

14、標簽工作（老鼠、組織、切片、試管）必須滿足統(tǒng)計學(xué)分析的足夠樣本數(shù)實驗的實施預(yù)實驗：方法的熟悉；實驗條件的摸索正式試驗：實驗條件和操作標準化，設(shè)計必要的對照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計學(xué)的樣本數(shù)。實驗記錄的正確書寫和實驗數(shù)據(jù)記錄的保存實驗結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。實驗記錄的意義利于總結(jié)工作并尋找實驗中的差錯。實驗記錄均須歸檔保存。若一旦出現(xiàn)問題需要審核，完整的實驗記錄將會提供最可靠的資料。完全依靠個人記憶絕非明智之舉。將結(jié)果立即記錄于實驗記錄本，而非日后耗費時間再重新回憶記錄，以免遺忘某些重要的細節(jié)。了解早期所開展而當時并未受到重視的實驗，可從以前的實驗記錄中獲取信息和經(jīng)驗。實驗記錄是成功操作實驗的

15、關(guān)鍵。它應(yīng)該是所做實驗的完整記錄。一本好的實驗記錄使人在很久以后還能重構(gòu)當初實驗的內(nèi)容、過程、結(jié)果和教訓(xùn)。應(yīng)養(yǎng)成詳細進行實驗記錄的習(xí)慣。實驗記錄務(wù)求詳盡、忠實，不僅本人一目了然，同行也能看得懂。實驗記錄的用途為：便于本人探究實驗成敗原因；供他人查找相關(guān)實驗的重要信息；為撰寫論文提供原始實驗數(shù)據(jù)。實驗記錄的內(nèi)容日期：包括年、月、日和時間，環(huán)境條件（如溫度、濕度等）；實驗名稱實驗?zāi)康膶嶒灢牧希?試劑（名稱、批號、廠家、濃度、溶劑、保存條件）； 儀器（名稱、型號、供貨廠商）； 細胞細菌（名稱、復(fù)蘇、凍存、保存處）； 動物（品系、來源、年齡、性別、數(shù)量）； 臨床標本（姓名、性別、年齡、診斷及其他臨床資

16、料）；試劑的配制實驗方法：詳細描述實驗步驟 實驗結(jié)果：包括所收集的原始數(shù)據(jù)、可視圖及實驗結(jié)果的整理。 出現(xiàn)的問題：應(yīng)分析其可能的原因及解決方法，并詳細記錄于實驗記錄本上。實驗小結(jié)：簡短的實驗結(jié)果總結(jié)和解釋，將有助于指導(dǎo)后續(xù)的研究。其內(nèi)容包括主要結(jié)論、存在問題、改進方法和實驗體會等 實驗記錄的書寫要求-基本要求 實驗原始記錄須記載于正式實驗記錄本上，實驗記錄本應(yīng)按頁碼裝訂；須有連續(xù)頁碼編號，不得缺頁或挖補。實驗記錄本首頁一般作為目錄頁，可在實驗開始后陸續(xù)填寫，或在實驗結(jié)束時統(tǒng)一填寫。每次實驗須按年、月、日順序在實驗記錄本相關(guān)頁碼右上角或左上角記錄實驗日期和時間，也可記錄實驗條件如天氣、溫度、濕度

17、等。 字跡工整，采用規(guī)范的專業(yè)術(shù)語、計量單位及外文符號，英文縮寫第一次出現(xiàn)時須注明全稱及中文釋名。使用藍色或黑色鋼筆、碳素筆記錄，不得使用鉛筆或易褪色的筆（如油筆等）記錄。 實驗記錄需修改時，采用劃線方式去掉原書寫內(nèi)容，但須保證仍可辨認，然后在修改處簽字，避免隨意涂抹或完全涂黑。空白處可標記“廢”字或打叉。 實驗記錄中應(yīng)如實記錄實際所作的實驗；實驗結(jié)果、表格、圖表和照片均應(yīng)直接記錄或訂在實驗記錄本中，成為永久記錄。 實驗記錄本應(yīng)作為發(fā)表論文和實驗室科技檔案管理的必備文件。研究生畢業(yè)應(yīng)在離校前將全部實驗記錄和其他科研資料上繳實驗室保管和存檔，不得隨意處置或丟棄。 實驗記錄的書寫要求-基本要求 實

18、驗原始記錄須記載于正式實驗記錄本上，實驗記錄本應(yīng)按頁碼裝訂；須有連續(xù)頁碼編號，不得缺頁或挖補。實驗記錄本首頁一般作為目錄頁，可在實驗開始后陸續(xù)填寫，或在實驗結(jié)束時統(tǒng)一填寫。每次實驗須按年、月、日順序在實驗記錄本相關(guān)頁碼右上角或左上角記錄實驗日期和時間，也可記錄實驗條件如天氣、溫度、濕度等。 字跡工整，采用規(guī)范的專業(yè)術(shù)語、計量單位及外文符號，英文縮寫第一次出現(xiàn)時須注明全稱及中文釋名。使用藍色或黑色鋼筆、碳素筆記錄，不得使用鉛筆或易褪色的筆（如油筆等）記錄。 實驗記錄需修改時，采用劃線方式去掉原書寫內(nèi)容，但須保證仍可辨認，然后在修改處簽字，避免隨意涂抹或完全涂黑?？瞻滋幙蓸擞洝皬U”字或打叉。 實驗

19、記錄中應(yīng)如實記錄實際所作的實驗；實驗結(jié)果、表格、圖表和照片均應(yīng)直接記錄或訂在實驗記錄本中，成為永久記錄。 實驗記錄本應(yīng)作為發(fā)表論文和實驗室科技檔案管理的必備文件。研究生畢業(yè)應(yīng)在離校前將全部實驗記錄和其他科研資料上繳實驗室保管和存檔，不得隨意處置或丟棄。 實驗記錄的書寫要求- 實驗數(shù)據(jù)的記錄 實驗數(shù)據(jù)的記錄須及時、準確、真實、完整，盡可能將原始數(shù)據(jù)記錄到實驗記錄本上，嚴禁偽造或編造數(shù)據(jù)，并避免漏記和隨意涂改。 圖表：由自動記錄儀打印的圖表和數(shù)據(jù)資料應(yīng)按順序粘貼于記錄本相應(yīng)位置，若圖表較多，可先將圖表按順序裝訂在一起，然后粘貼于記錄本上 。壓邊簽字 。熱敏紙打印的數(shù)據(jù)，打印后立即復(fù)印，并將原件和復(fù)

20、印件一并粘貼在實驗記錄的相應(yīng)位置并壓邊簽字。 照片：各種照片直接粘貼于實驗記錄本相應(yīng)位置，壓邊簽字。細胞或病理組織照片須標記顯微鏡倍數(shù)、染色方式等信息。腫瘤照片須含標尺刻度。此外，照片背后應(yīng)寫明實驗日期和處理因素等。相應(yīng)組織切片存放位置、編號和名稱等須記錄于實驗記錄本相應(yīng)位置，以便后續(xù)查找并重新分析。自成體系的表格記錄：可單獨裝訂成冊，但須在實驗記錄本相應(yīng)位置記錄相關(guān)信息和存放位置及編號。 電子板原始數(shù)據(jù)的記錄：要有幾處拷貝；可整理分析后打印粘貼，但實驗記錄本上須明確記錄原始數(shù)據(jù)和圖表的存放位置、標號含義等基本信息。掃描圖片：各種掃描圖片應(yīng)粘貼于實驗設(shè)計下方，其測定數(shù)據(jù)置于掃描圖片下方，從而有

21、助于參考圖片分析數(shù)據(jù)。 各種操作流程的記錄：各種操作流程均需記載于記錄本上，簡單的流程可直接記載，復(fù)雜的流程可打印后粘貼到記錄本。 摸索實驗方法的記錄 ：第一次引用某方法時應(yīng)注明其出處。若首次使用某種成分或方法，應(yīng)進行詳細描述。凡摸索實驗方法的記錄均應(yīng)盡可能完全，宜詳細記錄每一實驗條件的確定過程，以便最后確定標準實驗操作流程。須特別注意試劑的具體用量和濃度。 一旦建立標準的實驗流程，即可形成完整的protocol，日后進行同一實驗流程時，除首次記錄完整的protocol外，其余僅記載實驗中改動的步驟，并表明所參照protocol的具體名稱和出處即可。 實驗記錄的書寫要求- 實驗流程的記錄實驗記

22、錄注意的問題實驗記錄不允許隔天寫（未記錄改變條件之例）以及寫在紙片上。保持實驗記錄的真實性和完整性；記錄時間（年、月、日）。原始數(shù)據(jù)（包括照片）必須貼在當天的試驗結(jié)果欄里；不要保留在公共計算機里。即便是陰性結(jié)果，也必須保留。不能僅記錄符合主觀想象的內(nèi)容和自認為成功的實驗。定期整理、分析數(shù)據(jù)，并向?qū)焻R報。養(yǎng)成實驗后及時整理和分析實驗數(shù)據(jù)的習(xí)慣，常會有意想不到的收獲。實驗資料的保存 電子版資料：打印一份粘貼在實驗記錄本上或單獨裝訂成冊，同時保存電子版，并注意備份。例如，文字材料、各種結(jié)果的掃描圖片、各種圖表數(shù)據(jù)等。注意：掃描圖片的像素須足夠大，一般保證分辨率dpi300萬；照片須標記放大倍數(shù)，如

23、400；圖片須進行必要標記，如Western blot掃描底片應(yīng)標記日期、泳道、樣品名稱等。各種實驗樣品：用記號筆直接在管壁上標記僅適用于短期保存，長期保存須將寫于管壁的字用透明膠覆蓋，否則易在反復(fù)溫度變化過程中脫色。最好的標記方法是將標記文字打印到雙面膠布上，然后粘貼在管壁上。樣品標記內(nèi)容應(yīng)至少包括日期、樣品名稱、濃度。實驗記錄本：應(yīng)妥善保存，避免水浸、缺頁，保持整潔無破損，避免丟失。實驗結(jié)束后，原始實驗記錄本應(yīng)由實驗室負責人檢查、簽字后歸檔；實驗人員可復(fù)制實驗記錄供本人使用，實驗人員不得將實驗記錄原件帶走。實驗的實施預(yù)實驗：方法的熟悉；實驗條件的摸索正式試驗：實驗條件和操作標準化，設(shè)計必要

24、的對照，保證重復(fù)性，滿足統(tǒng)計學(xué)的樣本數(shù)。實驗記錄的正確書寫和實驗數(shù)據(jù)記錄的保存實驗結(jié)果的正確觀察、分析和判斷。觀察中常見的問題“留意意外之事”是研究工作者的座右銘。在觀察的鄰域中，機遇只偏愛那種有準備的頭腦。觀察中常見的問題： - 受主觀因素的影響 ：人工測量 - 忽視細節(jié)：曼切斯特醫(yī)生教學(xué) - 視而不見；“我們見到的只是我們知道的?！备璧?司空見慣、不了解或無興趣的現(xiàn)象；某些既非意料之中、又非特地尋找的現(xiàn)象 - 虛假的觀察：產(chǎn)生錯覺；頭腦本身滋生的（Goetingen心理學(xué)會）：頭腦容易無意識地根據(jù)過去的經(jīng)歷、知識和自覺的意愿去填補空白。要學(xué)會觀察不知道的和意料外的現(xiàn)象；有效的觀察是指注意到

25、某個事物，并通過將它和某個注意到的或已知的事物聯(lián)系起來，賦予其意義；因此，觀察既包含知覺因素又包含思維因素在內(nèi)。實驗觀察類型自發(fā)觀察或被動觀察（即意想不到的觀察）：為進行有效的自發(fā)觀察，首先須注意某個事物或現(xiàn)象，將其與過去經(jīng)驗中的有關(guān)知識相聯(lián)系，或在思考此現(xiàn)象中提出某種假說。 （蘋果掉地）誘發(fā)觀察或主動觀察（即有意識安排的觀察）：通常是根據(jù)假說安排的觀察。研究過程中，研究者常注重主動觀察的現(xiàn)象，而忽視被動觀察的現(xiàn)象。最好的辦法是在觀察實驗過程中忘記自己的假說和預(yù)期結(jié)果。 實驗觀察的原則客觀性與真實性 ：客觀地觀察實驗結(jié)果，避免對實驗觀察的傾向性和忽視意料之外的實驗現(xiàn)象。（假說傾向性）實時性：實

26、驗結(jié)果的觀察和收集與時間的選擇有關(guān)，某些實驗現(xiàn)象瞬間出現(xiàn)或持續(xù)時間很短，若錯過最佳時間即難以被觀察到 。（信號分子磷酸化等）完整性：實驗結(jié)果是否完整，可直接影響實驗結(jié)論。（雙峰曲線）科學(xué)觀察“在研究工作中養(yǎng)成良好的觀察習(xí)慣比擁有大量學(xué)術(shù)知識更為重要” “研究人員須運用其絕大部分知識和相當部分的才華，方能正確篩選出值得觀察的對象。這是一個極為重要的選擇，往往決定幾個月工作的成敗。” -格雷格 有效的觀察指注意到某個事物，并通過將其與某個已知的事物相聯(lián)系，賦予其意義。因此，觀察既包括知覺因素，也包含思維因素。 培養(yǎng)科學(xué)觀察習(xí)慣，提高科學(xué)觀察能力 根據(jù)實驗?zāi)康暮驮O(shè)計進行實驗操作，除觀察某些主要變化及

27、預(yù)期目標外，也有必要觀察操作中的某些細微變化（Western)以及儀器設(shè)備的狀況等。認真、細致、有始有終的觀察習(xí)慣：在實驗觀察中，既須目的明確地觀察實驗結(jié)果，又須對可能發(fā)生的情況有充分估計和準備。有效的科學(xué)觀察還須有良好的知識基礎(chǔ)，只有熟悉正常情況，才能注意到不尋常或未加釋明的現(xiàn)象。 觀察與思維緊密結(jié)合：觀察是一種理性知識參與下的認知過程。 實驗結(jié)果的分析和判斷結(jié)果的判斷： 實事求是，必須排除任何操作因素引起的誤差； 判斷實驗結(jié)果的正確性和可信性，具有統(tǒng)計學(xué)意義； 對所得到的結(jié)果進行分析，要搞清該結(jié)果可能說明的一切問題，捕獲實驗結(jié)果中的全部信息； 分析結(jié)果與結(jié)果之間的相互關(guān)系和內(nèi)在的聯(lián)系；Qu

28、antitation analysis of TNF- induced apoptosis and necrosis by FCM實驗結(jié)果的分析和判斷結(jié)果的判斷： 實事求是，必須排除任何操作因素引起的誤差； 判斷實驗結(jié)果的正確性和可信性，具有統(tǒng)計學(xué)意義； 對所得到的結(jié)果進行分析，要搞清該結(jié)果可能說明的一切問題，捕獲實驗結(jié)果中的全部信息； 分析結(jié)果與結(jié)果之間的相互關(guān)系和內(nèi)在的聯(lián)系；兩型TNF體外殺瘤率兩型TNF體內(nèi)抑瘤率結(jié)果判斷中常見的邏輯錯誤 不能讀懂結(jié)果的全部信息；不能邏輯分析不同結(jié)果之間的關(guān)系；看表面現(xiàn)象，缺乏本質(zhì)認識:TNFR1表達以先后而判斷因果：慢支治療與氣候以臆想代推理：利血平與新

29、藥視“同時”為“相關(guān)”：腦豬囊蟲病與乙型腦炎“先入為主”、“喧賓奪主”：銀環(huán)蛇咬傷中毒致呼吸麻痹和休克；以偏概全、輕率概括：服用烏洛托品疣贅消失，引申出“烏洛托品可治療人類癌腫”的結(jié)論。 預(yù)先激活TM-TNF-反向信號對 NK92細胞殺傷的影響讀出結(jié)果的全部信息TNFR封閉肽對佐劑性關(guān)節(jié)炎腹腔巨噬細胞IL-1b mRNA的影響封閉肽 正常 關(guān)節(jié)炎野生型和C-28F突變型TM-TNF-a反向信號對I-kB降解的影響 I-kB1 2 3 4 5 61：對照；2：sTNFR1；3：轉(zhuǎn)染空載sTNFR1；4：轉(zhuǎn)染C-28F突變型TM-TNF-a+sTNFR1；5：轉(zhuǎn)染野生型TM-TNF-a+sTNFR

30、1；6：轉(zhuǎn)染缺失胞漿段TM-TNF-a+sTNFR1。該結(jié)果提示什么？1 對照；2 COS-7；3 轉(zhuǎn)染空載；4 轉(zhuǎn)染C-28F 突變TM-TNF- ；5 轉(zhuǎn)染野生型TM-TNF- Realtime PCRC-28F TM-TNF-突變體喪失誘導(dǎo)U937細胞轉(zhuǎn)錄iNOSmRNA的效應(yīng)該實驗結(jié)果肯定的條件是什么？Fig 4 Death mode switched from apoptosis to necrosis by memTNF-a mutant Y87F Cleaved caspase-3- cleaved PARP (89kDa)- -actin - 19kDa- 17kDaWild-

31、memTNF-control(MCF-7)Y87F memTNF-s-TNF- full length PARP (116kDa)C樣品排列不一致！NF-kB activation of Raji cell decreased after lipid rafts disruption After treatment of MCD, Raji cell were lysed and its lysis supernatant were used to NF-kB detection. NF-kB were detected by ELISA.如何下結(jié)論？mTNF expression vecto

32、r were transfected to Hela cell, and then use this cell as effect cell to kill human EVC-304 cell. Hela+TNFwt was transfected with wild type mTNF, Hela+TNF(-47) was transfected with mTNF mutated on -47 which deleted the palmitoylated site.Deletion of palmitoylated site has no effect on mTNF cytotoxi

33、ty 該結(jié)果能否說明TNF不在脂筏里？為什么？前后結(jié)果內(nèi)在聯(lián)系提示什么？mTNF expression increased after MCD treatment. Raji Raji+MCD必須排除何種因素？如何排除？TNFR1TNFR2免疫共沉淀TNFR1TNFR2TNFR1TNFR2為何兩種受體共沉淀的信號分子一樣？TNFR2抗體檢測TNFR1抗體檢測TNFR抗體交叉實驗科研項目的策劃與實施研究計劃的安排科研準備工作和實驗室安全實驗的實施機遇靈感機遇在新發(fā)現(xiàn)中的作用巴斯德發(fā)現(xiàn)減毒病原體可以作為疫苗；細菌染色的最重要的方法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生革蘭發(fā)明的：他試圖對腎切片雙染，將細胞核染成紫色，微管

34、染成棕色，故用了龍膽紫，接著又用了碘溶液。他發(fā)現(xiàn)這樣處理過的組織，能用酒精使其迅速褪色，但某種細菌仍保持藍紫色，故將之用以辨別不同的細菌。離體青蛙心臟在生理鹽水中可保持跳動半小時。一次，英國倫敦大學(xué)醫(yī)院的生理學(xué)家、內(nèi)科醫(yī)生林格發(fā)現(xiàn)他的離體青蛙心臟連續(xù) 跳動了好幾小時。他非常驚訝，后來發(fā)現(xiàn)是他的實驗助手在制作鹽水溶液時用的不是蒸餾水而是自來水。根據(jù)這個線索就不難斷定自來水中的哪些鹽分引起了生理活動的增加。從而發(fā)現(xiàn)了格林氏溶液。Louis Pasteur1879使大家吃驚的是：幾乎所有這些家禽都經(jīng)受住了這次接種，而先前未接種的家禽，經(jīng)過了通常的潛伏期后則全部死掉了。這一點甚至連巴斯德自己或許也大吃

35、一驚，他沒有預(yù)料到這樣的成功。機遇只垂青那些懂得怎樣追求她的人。查理 . 尼科爾機遇在新發(fā)現(xiàn)中的作用巴斯德發(fā)現(xiàn)減毒病原體可以作為疫苗；細菌染色的最重要的方法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生革蘭發(fā)明的：他試圖對腎切片雙染，將細胞核染成紫色，微管染成棕色，故用了龍膽紫，接著又用了碘溶液。他發(fā)現(xiàn)這樣處理過的組織，能用酒精使其迅速褪色，但某種細菌仍保持藍紫色，故將之用以辨別不同的細菌。離體青蛙心臟在生理鹽水中可保持跳動半小時。一次，英國倫敦大學(xué)醫(yī)院的生理學(xué)家、內(nèi)科醫(yī)生林格發(fā)現(xiàn)他的離體青蛙心臟連續(xù) 跳動了好幾小時。他非常驚訝，后來發(fā)現(xiàn)是他的實驗助手在制作鹽水溶液時用的不是蒸餾水而是自來水。根據(jù)這個線索就不難斷定自來水中的

36、哪些鹽分引起了生理活動的增加。從而發(fā)明了格林氏溶液。 德拉姆 (H. E. Durham) 博士記述了通過抗血清發(fā)現(xiàn)細菌凝集的經(jīng)過如下： 那是1894年11月的一個值得紀念的早晨，我們都準備好了要用法伊弗 (Pfeiffer) 提供給我們的培養(yǎng)液和血清去檢驗他做的活體內(nèi)診斷反應(yīng)。格魯伯 (Gruber) 教授對我喊道：”德拉姆，這兒來，你瞧！”在用血清和弧菌的合劑進行第一次注射前，他取了樣品放在顯微鏡下，看到了凝集。幾天以后，我們要用消毒過的小玻璃罐制作合劑時，正巧小玻璃罐都沒有消毒，所以我只好用消毒試管。放有培養(yǎng)液和血清混合物的試管插在那里片刻以后，我喊道：“教授先生，這兒來，瞧！”出現(xiàn)在他眼前的是沉積現(xiàn)象；就這樣，我們得到了兩種可用的方法：微觀的和宏觀的。 這一發(fā)現(xiàn)出人意外，事先沒有提出過假說，這是在另一研究工作的過程中偶然發(fā)生的。由于偶然找不到消毒玻璃罐，發(fā)現(xiàn)了宏觀的凝集現(xiàn)象。(承蒙迪安 H. R. Dean 教授示我以德拉姆的手稿) 科研項目的策劃與實施研究