材料分析實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(共19頁)

1、PAGE - PAGE 21 -材料(cilio)現(xiàn)代分析方法實(shí)驗(yàn)(shyn)指導(dǎo)書使用專業(yè)(zhuny)：材料科學(xué)與工程學(xué)時(shí)：20 開課周：36周材料科學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)(shyn)一 有機(jī)(yuj)化合物定性(dng xng)鑒定的光譜方法（綜合實(shí)驗(yàn)第一部分）紫外-可見光分光光度法（綜合5學(xué)時(shí)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1回顧吸收光譜知識，學(xué)習(xí)利用吸收光譜對化合物進(jìn)行鑒定和純度的檢查：2了解溶劑的性質(zhì)對吸收光譜的影響，能根據(jù)需要綜合考慮選擇適當(dāng)?shù)娜軇?學(xué)會UV-4501S紫外可見分光光度計(jì)的使用。二、實(shí)驗(yàn)原理： 吸收光譜以不同波長的光依次通過一定濃度的被測物質(zhì)，并分別測定每個(gè)波長的吸光度。以波為橫坐

2、標(biāo)，吸光皮A為縱坐標(biāo)。所得到的曲線為吸收光譜。分子吸收光譜綜合知識回顧紫外光譜可見吸收光譜紅外吸收光譜波段遠(yuǎn)紫外10-200nm近紫外200-400nm400一一800nm0.75um一1000um產(chǎn)生機(jī)理分子吸收紫外輻射后引起的外層電子躍遷。分子吸收可見光后引起的外層電子躍分子吸收紅外輻射后引起的分子的振動、轉(zhuǎn)動能級的躍遷研究對象電子光譜不飽和有機(jī)物，特別是共軛體系有機(jī)物電子光譜無機(jī)物振一轉(zhuǎn)光譜。分子振動過程中伴隨偶極矩變化的化合物 (利用紫外光譜可對有機(jī)物進(jìn)行鑒定及結(jié)構(gòu)分析) 紫外吸收光譜的特點(diǎn)：圖形比較簡單、特征性不強(qiáng)，當(dāng)不同的分子含有相同的發(fā)色團(tuán)。它們的吸收光譜的形狀就大體相似，所以該

3、法的應(yīng)用有一定的局限性。 但紫外光譜對共軛體系的研究，如利用分子中共軛程度采確定未知物的結(jié)構(gòu)有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。所以紫外光譜是對有機(jī)物進(jìn)行定性鑒定及結(jié)構(gòu)分析的一種重要輔助手段。 本實(shí)驗(yàn)主要完成以下幾個(gè)內(nèi)容：1定性分析(dngxngfnx)(未知芳香族化合物的鑒定)： 所采用的方法一般是標(biāo)準(zhǔn)比較法：測繪(chu)未知試樣的紫外吸收光譜并同標(biāo)準(zhǔn)試樣的光譜圖進(jìn)行比較。當(dāng)濃度和溶劑相同時(shí)，如果兩者的圖譜相同(曲線形狀、吸收(xshu)峰數(shù)目、入max和max)說明兩者是同一化合物。2純物質(zhì)中雜質(zhì)的檢查： 一些在紫外光區(qū)無吸收的物質(zhì)，如果其中有微量的對紫外光具有高吸收系數(shù)的雜質(zhì)也可定量的檢出。如乙醇中雜質(zhì)苯的

4、檢查，純乙醇在200-400 nm無吸收如果乙醇中含微量苯，則可測到：200 nm強(qiáng)吸收(=8000)255nm弱吸收(=215，群峰)。3溶劑性質(zhì)對吸收光譜的影響： 溶劑的極性對化合物吸收峰的波長、強(qiáng)度、形狀以及精細(xì)結(jié)構(gòu)都有影響。極性溶劑有助于n * 躍遷向短波移動： * 躍遷向長波移動：并使譜帶的精細(xì)結(jié)構(gòu)完全消失，所以實(shí)驗(yàn)中分別以極性不同的正己烷、乙醇、水為溶劑，了解溶劑極性對吸收光譜的影響。三、儀器與試劑： 1UV-4501S紫外一可見分光光度計(jì)：帶蓋石英比色皿：容量瓶若干： 2 試劑：苯甲酸、無水乙醇、正已烷、去離子水、水楊酸、丙酮等。四、實(shí)驗(yàn)步驟：1儀器的基本結(jié)構(gòu)和光路示意圖(圖1-

5、1)： (1) 光源：氘燈、溴鎢燈。光譜范圍在190一1100 nm； (2) 單色器：作用是將連續(xù)光源分光，分離山所需的足夠窄波段的光束：(3) 吸收池：(4) 檢測器：光電管。 圖1-1雙光束分光(fn un)光度計(jì)光路圖2儀器(yq)操作方法：(1) 打開(d ki)外設(shè)電腦，點(diǎn)擊UV-4501S圖標(biāo)，開儀器主機(jī)。(等待燈預(yù)熱及儀器自檢約10分鐘)。計(jì)算機(jī)顯示“就緒”： (2) 進(jìn)入“波長掃描”“0K”： (3) 設(shè)置參數(shù)： (4)“啟動” 計(jì)算機(jī)自動描繪出吸收曲線并給出入max ，A；3試樣制備及測定：(1)定性分析；領(lǐng)取未知試樣的溶液，以去離子水為參比，用1cm石英比色皿，在2203

6、60nm范圍內(nèi)測吸收光譜。 (2)乙醇中雜質(zhì)苯的檢出：以純乙醇為參比液，以含雜質(zhì)乙醇為試液，在220280nm范圍測繪紫外吸收光譜。 (3)溶劑性質(zhì)對吸收光譜的影響： 異亞丙基丙酮的正己烷、氯仿、乙醇、水溶液等的配制 取四只100mL容量瓶各注入10LlL的異亞丙基丙酮，然后分別用正己烷、氯仿、乙醇、水稀稈到刻度，搖勻。以相應(yīng)的溶劑作參比液，測繪各溶液的吸收光譜。異亞丙基丙酮 的結(jié)構(gòu)為： 五、結(jié)果(ji gu)與討論：1記錄未知化合物的吸收光譜的條件(波段、A)，確定峰值(fn zh)波長，并計(jì)算max，較與標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)圖譜進(jìn)行比較，確定化合物名稱。 水楊酸的參數(shù)：C = 15mg/L

7、 A= Cmol/L Lcm 入max = 231.5 nm , A=0.7504 , 1 = 8420 mo1-1cm-1L 入max = 296.5 nm , A=0.4090 , 2 = 4520 mol-1cm-1L2記錄乙醇試樣吸收光譜及實(shí)驗(yàn)條件，根據(jù)吸收光譜確定是否有苯吸收峰，峰值波長多少?（純乙醇CH3-CH2OH是飽和醇，在200 400 nm無吸收）苯在紫外區(qū)有三個(gè)吸收帶 * 180-184 nm =47000 60000 (遠(yuǎn)紫外意義不大) * 200-204 nm =8000 (在遠(yuǎn)紫外末端也不常用) * 230-270 nm =204 (弱吸收的帶 *是苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)或苯

8、帶，常用于識別芳香族化合物)。3分別記錄不同溶劑中丁酮和異亞丙基丙酮的吸收光譜及實(shí)驗(yàn)條件，比較吸收峰的變化，了解溶劑的極性對吸收曲線的波長、強(qiáng)度的影響。六、實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及注意事項(xiàng)： 1，本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為光譜純或經(jīng)提純處理： 2。石英比色皿每換一種溶液或溶劑必須清洗干凈，并用被測液蕩洗三次。 3注意儀器開關(guān)順序：先開外設(shè)計(jì)算機(jī)，再開儀器主機(jī)。關(guān)時(shí)相反。七、思考題： 1試樣溶液濃度過大或過小，對測量有何影響?應(yīng)如何調(diào)整? 2為什么溶劑極性增大，nn躍遷產(chǎn)生的吸收帶發(fā)生紫移，而nn躍遷產(chǎn)生的吸收帶則發(fā)生紅移?附錄(fl)： 水楊酸化學(xué)名稱鄰羥基苯甲酸，俗稱柳酸。 本品為白色針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。無臭或

9、幾乎無臭，味微甜，后轉(zhuǎn)不適(bsh)。水溶液呈酸性反應(yīng)。在空氣中穩(wěn)定。比重1.483。熔點(diǎn)(rngdin)158161。難溶于冷水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、苯、松節(jié)油和沸水。76升華，有解熱鎮(zhèn)痛作用。本晶可用作食品防腐劑、染料中間體、消毒劑、醫(yī)藥軟膏、阿司匹林生產(chǎn)，也可作為香料生產(chǎn)原料。（綜合(zngh)實(shí)驗(yàn)第二部分）實(shí)驗(yàn)二 有機(jī)(yuj)化合物的熒光(ynggung)光譜法（綜合5學(xué)時(shí)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諢晒夥y定特定有機(jī)物含量的基本原理。.了解普通分子熒光分光光度計(jì)的基本構(gòu)造和原理，并能簡單的操作。二、實(shí)驗(yàn)原理 維生素B2是含多共軛環(huán)的有機(jī)物，具有較強(qiáng)的熒光物質(zhì)，并且在低濃度時(shí)，熒光強(qiáng)度與維生

10、素B2濃度呈正比：I i =kc基此，測定一系列已知濃度的維生素B2的熒光強(qiáng)度，然后以熒光強(qiáng)度對維生素B2濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再測定未知濃度維生素B2的熒光強(qiáng)度，把它代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出其濃度。二、儀器(yq)與試劑1儀器(yq) WGY-10型分子熒光(ynggung)分光光度計(jì)；1000 mL（或其它容量）容量瓶2只，100 mL的容量瓶若干支，1 mL的吸量管1支。2試劑 （1）市售維生素B2藥片若干：（2）蒸餾水；三、實(shí)驗(yàn)步驟（1）用電子天平測量少量維生素B2，用蒸餾水配置成確定含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，注意濃度范圍控制在10-4 gL-1左右，不要太濃。（2）在300600 nm范圍內(nèi)掃描維生素B

11、2標(biāo)準(zhǔn)溶液激發(fā)光譜；在400700 nm范圍內(nèi)掃描其熒光發(fā)射光譜。（3）嘗試調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)液的PH值，重新測量熒光光譜，記錄數(shù)據(jù)；（4）嘗試使用不同溶劑配置維生素B2，重新測量，考察溶劑的影響；（4）更換固體粉末夾具，將少量維生素B2的粉末安放在固體樣品支架上。（5）測量維生素B2在固體狀態(tài)下的熒光光譜（6）在計(jì)算機(jī)導(dǎo)出以上各譜圖數(shù)據(jù)，比較液體和固體熒光光譜的特點(diǎn)。四、注意事項(xiàng)1. 維生素B2的濃度不要太高。2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，檢查儀器是否正常，關(guān)閉電源順序是否正確。六、思考題：1. 為什么維生素B2具有較強(qiáng)熒光？2. 熒光分光光度計(jì)有哪些部件(bjin)組成？3. 激發(fā)光譜和發(fā)射(fsh)光譜(gu

12、ngp)有什么內(nèi)在聯(lián)系，為什么通常不重疊？4熒光光譜的激發(fā)峰與紫外吸收峰有什么聯(lián)系？5. 哪些因素可能會對有機(jī)物的熒光產(chǎn)生影響？七、附錄維生素B2為橙黃色結(jié)晶性粉末；微臭，味微苦；溶液易變質(zhì)，在 HYPERLINK /wiki/%E7%A2%B1 o 堿 t _blank 堿性溶液中或遇光變質(zhì)更速。本品在水、乙醇、氯仿或乙醚中幾乎不溶；在稀 HYPERLINK /wiki/%E6%B0%A2%E6%B0%A7%E5%8C%96%E9%92%A0 o 氫氧化鈉 t _blank 氫氧化鈉溶液中溶解。比旋度 避光操作。取本品，精密稱定，加無碳酸鹽的氫氧化鉀溶液（取 HYPERLINK /wiki/

13、%E6%B0%A2%E6%B0%A7%E5%8C%96%E9%92%BE o 氫氧化鉀 t _blank 氫氧化鉀20g，加無醛乙醇制成20%的溶液，放置過夜后，吸取上清液，加無醛乙醇稀釋成0.1mol/L，經(jīng)標(biāo)定后，再精密量取18ml，加新沸過的冷水至100ml，搖勻）溶解并定量稀釋制成每1ml中含5mg的溶液，依法測定，并嚴(yán)格控制溫度，比旋度為-120度至-140度。維生素B2水溶性較低，但在堿性溶液中容易溶解，在強(qiáng)酸溶液中穩(wěn)定，光照及紫外照射引起不可逆的分解。核黃素在機(jī)體中有遞氫的作用，并是機(jī)體中一些重要的氧化還原酶的輔酶。 發(fā)現(xiàn)歷史 1879年英國著名化學(xué)家布魯斯發(fā)現(xiàn) HYPERLIN

14、K /wiki/%E7%89%9B%E5%A5%B6 o 牛奶 t _blank 牛奶的上層乳清中存在一種黃綠色的熒光色素，他們用各種方法提取，試圖發(fā)現(xiàn)其化學(xué)本質(zhì)，都沒有成功。幾十年中，盡管世界許多科學(xué)家從不同來源的動植物都發(fā)現(xiàn)這種黃色物質(zhì)，但都無法識別。1933年，美國科學(xué)家 HYPERLINK javascript:linkredwin(哥爾倍格); o 哥爾倍格 哥爾倍格等從1000多公斤牛奶中得到18毫克這種物質(zhì)，后來人們因?yàn)槠浞肿邮缴嫌幸粋€(gè) HYPERLINK /wiki/%E6%A0%B8%E7%B3%96%E9%86%87 o 核糖醇 t _blank 核糖醇，命名為核黃素。成人

15、的建議每日攝取量是1.7mg。常處于緊張狀態(tài)的人請?jiān)黾訑z取量。7、與 HYPERLINK /wiki/%E7%BB%B4%E7%94%9F%E7%B4%A0B6 o 維生素B6 t _blank 維生素B6、 HYPERLINK /wiki/%E7%BB%B4%E7%94%9F%E7%B4%A0C o 維生素C t _blank 維生素C及 HYPERLINK /wiki/%E7%83%9F%E9%85%B8 o 煙酸 t _blank 煙酸一起作用，效果最佳。 成年人每日吃1兩動物肝可滿足需要；成年人每日吃約2斤 HYPERLINK /wiki/%E9%BB%84%E8%B1%86 o 黃豆

16、 t _blank 黃豆，或3棵 HYPERLINK /wiki/%E7%94%9F%E8%8F%9C o 生菜 t _blank 生菜，或34只鮮 HYPERLINK /wiki/%E9%A6%99%E8%8F%87 o 香菇 t _blank 香菇即可滿足需要。 食物來源：奶類制品、動物肝臟與 HYPERLINK /wiki/%E8%82%BE%E8%84%8F o 腎臟 t _blank 腎臟、 HYPERLINK /wiki/%E8%9B%8B%E9%BB%84 o 蛋黃 t _blank 蛋黃、 HYPERLINK /wiki/%E9%B3%9D%E9%B1%BC o 鱔魚 t _b

17、lank 鱔魚、 HYPERLINK /wiki/%E8%83%A1%E8%90%9D%E5%8D%9C o 胡蘿卜 t _blank 胡蘿卜、 HYPERLINK javascript:linkredwin(釀造酵母); o 釀造酵母 釀造酵母、香菇、 HYPERLINK /wiki/%E7%B4%AB%E8%8F%9C o 紫菜 t _blank 紫菜、 HYPERLINK /wiki/%E9%B1%BC o 魚 t _blank 魚、 HYPERLINK /wiki/%E8%8A%B9%E8%8F%9C o 芹菜 t _blank 芹菜、 HYPERLINK /wiki/%E6%A9%9

18、8%E5%AD%90 o 橘子 t _blank 橘子、 HYPERLINK /wiki/%E6%9F%91 o 柑 t _blank 柑、 HYPERLINK /wiki/%E6%A9%99 o 橙 t _blank 橙等實(shí)驗(yàn)三 有機(jī)物紅外吸收光譜定性分析（5學(xué)時(shí)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求： 1，了解苯甲酸、山梨酸、蔗糖的紅外光譜特征，掌握有機(jī)化合物紅外光譜鑒定方法： 2熟悉溴化鉀壓片法制樣： 3熟悉紅外光譜儀使用(shyng)方法； 4了解未知有機(jī)物結(jié)構(gòu)測定(cdng)的綜合過程。二、實(shí)驗(yàn)(shyn)原理 紅外吸收光譜法是通過研究物質(zhì)結(jié)構(gòu)與紅外吸收光譜間的關(guān)系，來對物質(zhì)進(jìn)行分析的，紅外光譜可以用

19、吸收峰譜帶的位置和峰的強(qiáng)度加以表征。 測定未知物結(jié)構(gòu)是紅外光譜定性分析的一個(gè)重要用途。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所測繪的紅外光譜圖的吸收峰位置、強(qiáng)度和形：狀。利JIj基團(tuán)振動頻率與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系，來確定吸收帶的歸屬，確認(rèn)分子中所含的基團(tuán)或鍵，并推斷分子的結(jié)構(gòu)，鑒定的步驟如下： (1) 對樣品做初步了解，如樣品純度、外觀、來源及元素分析結(jié)果，及物理性質(zhì)(分子量、沸點(diǎn)、熔點(diǎn))。 (2) 確定未知物不飽和度，以推測化合物可能的結(jié)構(gòu)： (3) 圖譜解析 首先在官能團(tuán)區(qū)(40001300cm-1)搜尋官能團(tuán)的特征伸縮振動； 再根據(jù)“指紋區(qū)”(1300600cm-1)的吸收情況，進(jìn)一步確認(rèn)該基團(tuán)的存在以及與其它基團(tuán)的結(jié)合方

20、式。山梨酸、苯甲酸的標(biāo)準(zhǔn)紅外線光譜如圖21、2-2所示。三、儀器(yq)與試劑 1，紅外分光光度計(jì)(FT_IR200美國(mi u)傅立葉變換紅外光譜儀)； 2壓片機(jī)；瑪瑙研缽(yn b)；紅外燈；干燥器：不銹鋼刮刀。 3試劑 KBr(AR)：山梨酸(AR)、苯甲酸(AR)、蔗糖(AR)。四、實(shí)驗(yàn)步驟(一)傅立葉變換紅外光譜儀的結(jié)構(gòu)示意圖如圖23所示圖23 傅立葉變換紅外分光光度計(jì)構(gòu)成示意圖(二)上機(jī)操作步驟1、開機(jī)A、打開儀器光學(xué)臺的電源開關(guān)；B、打開計(jì)算機(jī)電源，檢查儀器(yq)工作狀態(tài)。 2、收集樣品(yngpn)的紅外光譜圖A、設(shè)定光譜(gungp)收集參數(shù)B、收集樣品的紅外光譜 放入樣

21、品在樣品架上固定好，確認(rèn)后按”O(jiān)K。計(jì)算機(jī)自動收集樣品的譜圖信息。3、在計(jì)算機(jī)內(nèi)對紅外光譜譜圖的處理A、單擊”Absorbance：”按鈕，將收集到的樣品的光譜從%TRANSMITANCE形式轉(zhuǎn)換成吸光度的形式：B、單擊Au Bsln”(automatic baseline)按鈕進(jìn)行基線校正；窗口出現(xiàn)兩條譜線，其中紅色的為經(jīng)基線校正之后的譜線： C、在譜圖上標(biāo)注吸收峰的位置4、打印出該未知樣品的譜圖5、標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索(三)樣品的制備： 溴化鉀壓片法是將1-2 oS試樣與200mg則純溴化鉀研細(xì)混勻置于模具中，用(5-10)*l07MPa壓力壓成透明薄片，即可用于測定試樣和KBr都應(yīng)干燥處理，研磨

22、到粒度小于2ll m，以免散射光。KBr在4000-400cm-1光區(qū)不產(chǎn)生吸收，因此可測繪全波段光譜圖 將24mg苯甲酸放在瑪瑙研缽中，加200 400mg干燥的KBr粉末，混合均勻，使其粒度在2.0 m (通過250目篩孔)以下，用不銹鋼刮刀移取200 mg混合粉末于模具中，用 (5-10)*l07MPa壓力壓成透明薄片，然后放在光路中進(jìn)行測試的方法。用同樣方法制得山梨酸的錠片。五、數(shù)據(jù)處理 1解析(ji x)譜圖 比較(bjio)苯甲酸、山梨酸，蔗糖三張紅外光譜圖，解析圖譜，指出主要吸收峰的歸宿，確定未知物的結(jié)構(gòu)。六、實(shí)驗(yàn)(shyn)要點(diǎn)及注意事項(xiàng) 1制備試樣是否規(guī)范直接關(guān)系到紅外圖譜的

23、準(zhǔn)確性，對固體樣品經(jīng)研磨后也應(yīng)隨時(shí)注意防止吸水，否則壓出的片子易沾在模具上。 2儀器注意防震、防潮、防腐蝕。七、思考題 1。分別說明紅外光譜法的特點(diǎn)和產(chǎn)生紅外吸收的條件。 2影響基團(tuán)振動頻率的因素有哪些?這對于由紅外光譜推斷分子的結(jié)構(gòu)有什么作用? 3考慮實(shí)際面對未知有機(jī)物時(shí)可以先做那些測定，以便綜合紅外譜測定結(jié)果達(dá)到目的？實(shí)驗(yàn)(shyn)四 混合(hnh)有機(jī)物溶液(rngy)的高效液相色譜（演示，5學(xué)時(shí)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過高效液相色譜法測定混合液中待定組分的含量，掌握液相色譜法進(jìn)行定性及定量分折的基本方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理 定量測定咖啡因傳統(tǒng)分忻方法是采用萃取分光光度法。用反相高效液相色譜法將

24、混合液中各組分分離，若流速和泵的壓力在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中是恒定的，測定它們在色譜圖上的保留時(shí)間tR (或保留距離)和峰而積A后，可直接用tR定性，用峰面積作為定量測定的參數(shù)，采用工作曲線法(即外標(biāo)法)測定特定組分的在混合液中的含量。 測定特定譜峰信號的檢測器（在本實(shí)驗(yàn)中）實(shí)際上就是紫外-可見光分光光度計(jì)，其原理見UV光譜實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和興趣，同學(xué)可選用如下幾中方案：（1）先測定純咖啡因的UV譜，再根據(jù)特征吸收峰選好色譜檢測信號，將已配制的濃度不同的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同條件下測定色譜圖，選擇峰面積或峰高等參數(shù)為變量，繪制工作曲線；然后將飲料中的咖啡因與其它組分(如：單寧酸、咖啡酸、蔗糖，維生素等

25、)分離后，在工作曲線中標(biāo)定出飲料中待測咖啡因的含量。 同時(shí)可以嘗試歸一化法；（2）選用苯，苯甲酸，水楊酸等常見化合物作為混合液，結(jié)合UV譜，先測出各自特征吸收峰，再用高效液相色譜測定它們混合液中特定組分的含量，方法同上，可選用工作(gngzu)曲線法或歸一化法。三、儀器(yq)和試劑1高效(o xio)液相色譜儀，UV(254nm)檢測器2色譜柱：ODS(n-C18)柱3超聲波發(fā)生器或水泵4注射器：50 L 5容量瓶：100 mL，25 mL若干。6移液管：2mL、4mL，8mL。7咖啡因標(biāo)準(zhǔn)試劑：待測飲料試液/或其它常見芳香族衍生物8 流動相：30甲醇 + 80水，1L；制備前，光調(diào)節(jié)水的P

26、H3.5，進(jìn)入色譜系統(tǒng)前，用超聲波發(fā)生器或水泵脫氣5min。四、實(shí)驗(yàn)步驟1標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：準(zhǔn)確稱取25.0 mg咖啡因標(biāo)準(zhǔn)試劑，用配制的流動相溶解，轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，稀釋至刻度。2用標(biāo)準(zhǔn)儲備液配質(zhì)量濃皮分別為25 g/ml，50 g/mL，750 g/mL，100g/mL，1250 g/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液 3啟動泵，打開檢測器，設(shè)置泵的流速為23mL/min，檢測器的靈敏度設(shè)在008AUFS，打開記錄儀，將紙速設(shè)在l cm/min當(dāng)流動相通過色譜柱約510min，記錄儀上基線穩(wěn)定后，開始進(jìn)樣。4將進(jìn)樣閥放在裝載(zhungzi)（LOAD)位時(shí)，用注射器取25 L濃度最低的標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)樣(比進(jìn)樣閥上定量管多5L以上(yshng)，注入進(jìn)樣閥中。5將進(jìn)樣閥從裝載(LOAD)位轉(zhuǎn)向進(jìn)樣0NJECT)位同時(shí)按標(biāo)記鈕(MARKER)，使在記錄紙上打上進(jìn)樣信號。6當(dāng)咖啡因色譜峰出完后，按照45步驟連續(xù)操作2次，使最低濃度標(biāo)準(zhǔn)試液獲得3張