天然藥物化學(xué)試驗(yàn)與指導(dǎo)第三版

1、天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)與指導(dǎo)編者：楊長水于紅艷揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系目錄實(shí)驗(yàn)室安全守則1TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark8 實(shí)驗(yàn)一掌葉大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定3 HYPERLINK l bookmark40 實(shí)驗(yàn)二槐花米中蘆丁的提取、分離和鑒定8 HYPERLINK l bookmark52 實(shí)驗(yàn)三人參皂苷的提取、分離與結(jié)構(gòu)鑒定11 HYPERLINK l bookmark56 實(shí)驗(yàn)四粉防己生物堿的提取、分離與結(jié)構(gòu)鑒定14附錄18常用有機(jī)溶劑及有關(guān)數(shù)據(jù)表18常用層析材料及有關(guān)數(shù)據(jù)表21 實(shí)驗(yàn)室安全守則天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)是天然藥物化學(xué)課程的重要組成部分，是更好

2、掌握天然藥物有效成分提取、分離和檢驗(yàn)的基本操作技能，是提高學(xué)生分析和解決問題能力，使同學(xué)進(jìn)一步理論聯(lián)系實(shí)際，養(yǎng)成嚴(yán)密科學(xué)態(tài)度和良好工作作風(fēng)必不可少的教學(xué)環(huán)節(jié)，為此，提出如下實(shí)驗(yàn)須知：遵守實(shí)驗(yàn)制度、維護(hù)實(shí)驗(yàn)室安全。不違章操作，嚴(yán)防爆炸、著火、中毒、觸電、漏電等事故的發(fā)生。若發(fā)生事故應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師。實(shí)驗(yàn)前做好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，了解實(shí)驗(yàn)的基本原理和方法，安排好當(dāng)天的計(jì)劃，爭取準(zhǔn)時(shí)結(jié)束，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)養(yǎng)成及時(shí)記錄的習(xí)慣，凡是觀察到的現(xiàn)象以及有關(guān)的重量、體積、溫度或其他數(shù)據(jù)，應(yīng)立即如實(shí)記錄。實(shí)驗(yàn)完畢后認(rèn)真總結(jié)，寫好報(bào)告，提取純化所得單體產(chǎn)物包好，貼上標(biāo)簽（寫下日期、樣品名稱、純度、m.p.、b.p.、T

3、LC、重量）交給老師。實(shí)驗(yàn)室中保持安靜，不許大聲喧嘩，不許抽煙，不遲到，不隨便離開。實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)保持清潔，使用過的儀器及時(shí)清洗干凈后，存放在指定位置。廢棄的固體和濾紙等丟入廢物缸內(nèi)，絕不能丟入水槽和窗外，以免堵塞和影響環(huán)境衛(wèi)生。公用儀器及藥品用完后立即歸還原處，破損儀器應(yīng)填寫破損報(bào)告單、注明原因。將實(shí)驗(yàn)臺(tái)、地面打掃干凈，倒清廢物缸，檢查水、電（是否關(guān)閉水龍頭，拔下電插頭）。關(guān)閉門窗。實(shí)驗(yàn)一掌葉大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定【簡介】OR1大黃酸大黃素蘆薈大黃素R大黃素甲醚2大黃酚藥典收載的正品大黃為蓼科植物掌葉大黃(RheumpalmatumL.)、唐古特大黃(R.tanguticumMaxi

4、m.exBalf.)及藥用大黃(R.officinaleBaill.)的根及根莖。大黃始載于本經(jīng)，列為下品。歷代本草均有記載。大黃性寒、味苦，具瀉熱毒、破積滯、行淤血等功效。多用于便秘、譫語發(fā)狂、痢疾初起、血熱吐衄、淤血經(jīng)閉等?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，大黃具瀉下、抗菌、降血壓、收縮血管、止血、降低血管脆性的作用，而且對小鼠的黑色素瘤、乳腺瘤及腹水型艾氏癌有抑制作用。大黃中的主要成分為蒽醌化合物，含量約為3%5%，大部分與葡萄糖結(jié)合苷，游離苷元有大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等。其中，大黃酸具有羧基，酸性最強(qiáng)；大黃素具郁-酚羥基，酸性第二；蘆薈大黃素連有羥甲基，酸性第三；大黃素甲醚和大

5、黃酚的酸性最弱。根據(jù)以上化合物的酸度差異，可用堿性強(qiáng)弱不同的溶液進(jìn)行梯度萃取分離。R1=HR1=CH3R1=HR1=CH3R1=CH3R2=COOH目的】R2=OHR2=CH2OHR2=OCH3R2=H熟悉蒽醌類成分的提取分離方法。掌握pH梯度提取法的原理和操作技術(shù)。學(xué)習(xí)用硅膠柱色譜法分離精制大黃素。學(xué)習(xí)羥基蒽醌類化合物的鑒定方法。基本原理】(大黃中主要羥基蒽醌類化合物的理化性質(zhì))大黃酚(Chrysophanol):金黃色片狀結(jié)晶，mpl96197C(乙醇或苯)，能升華?？扇苡诒?、乙酸、氯仿、甲醇、乙醇、熱苯和氫氧化鈉水溶液，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水、碳酸氫鈉和碳酸鈉水溶液。UV(MeO

6、H)九225,258,279,288,432nmmaxIR(KBr)v1679,1622,1605,1560,1470cm-imax大黃素甲醚(Physcion):磚紅色針狀結(jié)晶，mp206C(苯)，能升華，溶解性能與大黃酚相似。UV九226,255,267,288,440nmmaxIR(KBr)v1625,1688,1570,3400cm-1max大黃素(Emodin):橙黃色針狀結(jié)晶，mp256257C(乙醇或冰醋酸)，能升華。其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.071%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%、易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸鈉水溶液，幾乎不溶于水。UV

7、九300,269,289,441nmmaxIR（KBr）v3464,1627cm-imax蘆薈大黃素（Aloe-emodin）:橙黃色針狀結(jié)晶，mp223224C（甲苯），能升華?？扇苡谝颐选⒈?、熱乙醇、稀氨水、碳酸鈉和氫氧化鈉水溶液。UV九300,259,289,433nmmaxIR（KBr）v3430,1628cm-lmax大黃酸（Rhein）:黃色針狀結(jié)晶，mp321322C（升華），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氫鈉水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。UV（MeOH）九229,258,435nmmaxIR（KBr）v1701,1637cm-1max羥基蒽醌苷類（表1）:表1大黃中羥

8、基蒽醌類成分中文名英文名性狀mp(C)大黃素甲醚葡萄糖苷Physcionmonoglucoside黃色針狀結(jié)235晶蘆薈大黃素甲醚葡萄Aloe-emodinmonoglucoside239糖苷大黃素葡萄糖苷Emodinmonoglucoside淺黃色針狀190191結(jié)晶大黃酸葡萄糖苷Rhein-8-monoglucoside266270大黃素-1-O-卩-D-葡萄1-O-卩-D-glucopyranosylemodin239241糖蘆薈大黃素-C-卩-D-C-卩-D-glucopyranosyl187189葡萄糖aloe-emodin【主要儀器及試劑】儀器：天平，250mL燒杯，500mL燒杯

9、，250mL分液漏斗，索氏提取器，布氏漏斗，100mL量筒，250mL圓底燒杯，真空冷凝管，牛角管，250mL錐形瓶，pH試紙。試劑：乙醚，20%H2SO4溶液，鹽酸，5%碳酸氫鈉溶液，5%碳酸鈉溶液，0.25%氫氧化鈉溶液5%氫氧化鈉溶液石油醚（沸程6090C）-乙酸乙酯（7:3），石油醚（沸程6090C）-乙酸乙酯（15:1）。操作方法】實(shí)驗(yàn)流程圖：大黃粉末20%H2SO4直火加熱，抽濾，干燥濾餅乙醚索氏提取器回流提取乙醚層水層HCI5%NaHC03乙醚層5%Na2CO3黃色沉淀大黃酸結(jié)晶水層HCI乙醚層025%NaOH黃色沉淀大黃素結(jié)晶水層HCI乙醚層5%NaOH黃色沉淀蘆薈大黃素結(jié)晶水

10、層HCI乙醚層（回收）淺黃色沉淀（大黃酚+大黃素甲醚）硅膠柱色譜先洗脫下部分（大黃酚）后洗脫下部分（大黃素甲醚）大黃酚結(jié)晶大黃素甲醚結(jié)晶酸水解用天平稱取大黃粉末10g，置500mL燒杯中，加20%H2S04水溶液100mL，直火加熱1小時(shí)，用布氏漏斗抽濾，過濾水洗后于70C左右干燥?？偭u基蒽醌苷元的提取濾餅經(jīng)干燥后，置索氏提取器中，加入乙醚100mL,回流提取2小時(shí)，得乙醚提取液。乙醚提取液經(jīng)薄層色譜檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚。薄層板為硅膠CMC-Na板，展開劑為石油醚（沸程6090C）-乙酸乙酯（7:3），近水平或直立展開，在可見光下可看到4個(gè)斑點(diǎn)，Rf.9的黃色斑

11、點(diǎn)為大黃酚和大黃素甲醚混合物，在此條件下分不開，其余3個(gè)斑點(diǎn)，依Rf值由大到小分別為大黃素（橙色斑點(diǎn)）、蘆薈大黃素（黃色斑點(diǎn)）、大黃酸（黃色斑點(diǎn)）。pH梯度萃取分離（1）大黃酸的分離和提純：將上述乙醚提取液以5%碳酸氫鈉溶液振蕩提取，水層呈紫紅色。分出水層，再重復(fù)提取數(shù)次，直至不顯紅色為止。合并水層提取液，用鹽酸酸化至pH3左右，即得黃色沉淀。過濾，先用水洗沉淀數(shù)次，再以少量冰冷的丙酮洗以除去有色雜質(zhì)。干燥后以冰醋酸或吡啶結(jié)晶23次，得黃色針狀結(jié)晶。經(jīng)熔點(diǎn)測定、紙色譜或薄層色譜，與標(biāo)準(zhǔn)品對照鑒定為大黃酸。（2）大黃素的分離和提純：碳酸氫鈉溶液提取后的乙醚層再以5%碳酸鈉溶液振蕩提取數(shù)次，水層呈

12、紅色，合并水層提取液，加鹽酸至酸性，得黃色沉淀過濾，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗，在冰醋酸或吡啶中結(jié)晶數(shù)次，得橙色大針狀結(jié)晶。經(jīng)熔點(diǎn)測定、紙色譜或薄層色譜，與標(biāo)準(zhǔn)品對照鑒定為大黃素。（3）蘆薈大黃素的分離和提純：碳酸鈉溶液提取后的乙醚層，再經(jīng)0.25%氫氧化鈉溶液振蕩提取數(shù)次，水層呈紅色，合并水層提取液，加鹽酸至酸性，得橙色沉淀。過濾后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中結(jié)晶數(shù)次，得橙色長針狀結(jié)晶。經(jīng)熔點(diǎn)測定、紙色譜或薄層色譜鑒定為蘆薈大黃素。（4）大黃酚和大黃素甲醚的分離和提純：上述蘆薈大黃素分離后的乙醚液用5%氫氧化鈉溶液振蕩提取數(shù)次，直至元色。合并深紅色的水層溶液，加鹽酸至酸性，得黃色沉淀

13、。過濾，水洗，干燥后得大黃酚和大黃素甲醚混合物。將此混合物溶于乙酸乙酯，用硅膠柱色譜分離。洗脫劑為石油醚（沸程6090C）-乙酸乙酯（15:1）混合液。先洗脫下的化合物為大黃酚，后洗脫下的化合物為大黃素甲醚，再分別經(jīng)乙酸乙酯結(jié)晶純化，兩者經(jīng)熔點(diǎn)測定、薄層色譜鑒定皆為純品。硅膠柱色譜分離大黃酚和大黃素甲醚（1）裝柱：取100200目硅膠約10g，按濕法裝柱（柱床1.5cmx8.5cm）；（2）加樣：將提取物粉末（已備）溶解于5mL石油醚（沸程6090C）-乙酸乙酯（7:3）混合溶劑中，用吸管吸取樣品溶液于色譜柱床頂端；（3）洗脫：用石油醚（沸程6090C）-乙酸乙酯（7:3）為洗脫劑洗脫，分段收

14、集，每份10mL，用硅膠薄層板跟蹤檢查。實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)鑒定的相關(guān)譜圖示例以大黃素為例將相關(guān)圖譜附在文后供參考，見附圖大黃素（Emodin）:IRv:3462,3414,1628,1616,1400,1367,1136,1105,760cnri；I:max:!:!:1a-II*d1-F-”-一4-T.+一t-r-II|IL-|b廠I4000J20014002000LSOO160014C】2001DDCISDRMK1400DH-il/ctn注意事項(xiàng)】酸水解過程中加熱時(shí)間應(yīng)足夠長，以保證水解充分。同一堿液提取時(shí)可分為幾次萃取，以保證提取充分，可以用薄層色譜作監(jiān)測。乙醚總提取物要用保鮮膜封嚴(yán)實(shí)，防止乙醚

15、揮發(fā)?！緦W(xué)習(xí)要求及思考題】掌握大黃蒽醌化合物的主要性質(zhì)，酸性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系，重要的顯色反應(yīng)及其應(yīng)用。掌握大黃蒽醌類成分的分離方法及其原理。如何檢識(shí)中藥中是否存在蒽醌類成分?比較大黃酸、大黃素及大黃素甲醚的酸性及在硅膠G吸附色譜板上的Rf直。【參考文獻(xiàn)】肖培根主編新編中藥志化學(xué)工業(yè)出版社,2002,第一卷,6667中華本草上?？萍汲霭嫔?1999,第二冊，第六卷,708721王乃利,陳英杰.分離方法的改進(jìn)與設(shè)計(jì).沈陽藥學(xué)院學(xué)報(bào),1979,(11),8489陳瓊?cè)A，戴漢松,蘇學(xué)良中藥大黃的綜合研究XXXI大黃蒽醌衍生物系統(tǒng)分離的改進(jìn)方法.天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2001,13(3):5860陳瓊?cè)A.中藥

16、大黃的生物化學(xué)研究XXXXIII大黃蒽醌衍生物系統(tǒng)分離的方法改進(jìn).藥物生物技術(shù),1995,2(2):3336李曉瑩,黎知林.大黃中蒽醌類成分提取分離方法研究.廣東藥學(xué),1999,9(4),2729姚新生主編.天然藥物化學(xué)(第三版).北京：人民衛(wèi)生出版社,2001,143166中國藥科大學(xué)中草藥化學(xué)教研室.天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn).1999,121122王振月,李延冰,匡海學(xué).毛脈酸模根中大黃酚、大黃素的分離鑒定.中醫(yī)藥學(xué)報(bào),1996,(02),54李尚德,關(guān)雄泰.中國蘆薈化學(xué)成分研究蘆薈大黃素的分離與結(jié)構(gòu)鑒定.廣東微量元素科學(xué),1994,1(2),5254胡軍,屠鵬飛,果德安.秦嶺大黃化學(xué)成分研究.西

17、北藥學(xué)雜志,1997,12(4),153155實(shí)驗(yàn)二槐花米中蘆丁的提取、分離和鑒定【簡介】蘆丁也稱蕓香苷，廣泛存在于植物界，其中在槐花米和莽麥葉中含量較高，可作為提取蘆丁的原料。槲皮素即蕓香苷苷元，可經(jīng)蘆丁水解制得?；被紫刀箍浦参锏幕ɡ?，古時(shí)用作止血藥?；被椎闹饕煞质|香苷有減少毛細(xì)血管通透性的作用，臨床上主要為防治高血壓的輔助治療藥物。此外，蘆丁對于放射線傷害引起的出血癥亦有一定的作用。【目的】以蘆丁為實(shí)例學(xué)習(xí)黃酮類成分的提取分離方法。掌握黃酮類成分的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖的鑒定?！净驹怼浚ɑ被字幸阎饕煞值睦砘再|(zhì)）蘆?。ㄊ|香苷）本品為淡黃色細(xì)小針狀結(jié)晶，含3個(gè)結(jié)晶水，熔點(diǎn)

18、177178C。蘆丁溶于熱水（1:200），難溶于冷水（1:8000）；溶于熱甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；熱乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶劑。易溶于堿液中呈黃色，酸化后又析出。2.槲皮素即蕓香苷苷元，為黃色結(jié)晶，熔點(diǎn)13314C。槲皮素溶于熱乙醇（1:23）,冷乙醇（1:300）?？扇苡诒姿?、乙酸乙酯、丙酮等溶劑，不溶于石油醚、苯乙醚、氯仿和水中。【主要儀器及試劑】1.儀器（1）燒杯（100mL，500mL）（2）圓底燒瓶（100mL，150mL）（3）冷凝管（4）抽濾瓶（5）循環(huán)水泵（6）紫外燈2.試劑（1）0.4%

19、硼砂水（2）石灰乳（3）乙醇，甲醇等（4）2%硫酸，鹽酸（5）氫氧化鋇（6）三氯化鋁（7）正丁醇:醋酸:水（4:13或4:1:1）(8)25%醋酸，85%醋酸，氨水(9)乙醇：水(7：3)(10)標(biāo)準(zhǔn)品：蘆丁，槲皮素，葡萄糖，鼠李糖【操作方法】自槐花米中提取蘆丁(1)提取方法取槐花米20g，置于lOOmL燒杯中，加0.4%硼砂水的沸騰溶液4OOmL,pH67左右，在攪拌下以石灰乳調(diào)至pH8,加熱保持微沸30分鐘，補(bǔ)充失去的水分，并保持pH8,靜置510分鐘，傾出上清液，用紗布過濾。重復(fù)提取一次，合并濾液，將濾液用鹽酸調(diào)至pH5左右，再加8滴氯仿，放置過夜，抽濾，水洗34次，放置空氣中自然干燥得

20、粗蘆丁。蘆丁的重結(jié)晶取粗蘆丁2g，加乙醇5060mL加熱溶解，趁熱抽濾,將濾液濃縮至2030mL，放置，析出結(jié)晶，母液再濃縮一半，又析出結(jié)晶。合并結(jié)晶，再用乙醇重結(jié)晶一次。蘆丁的水解取蘆丁lg，加2%H2S0450mL,小火加熱微沸回流30分鐘至1小時(shí)。開始加熱10分鐘為澄清溶液，逐漸析出黃色小針狀結(jié)晶，即槲皮素，抽濾取結(jié)晶(保留濾液20mL,以檢查其中所含單糖)，加50%乙醇15mL加熱回流使槲皮素粗晶溶解，趁熱抽濾，放置析晶，抽濾得精制品，在減壓下110C干燥可得槲皮素?zé)o水物。測熔點(diǎn)，進(jìn)行紙層析鑒定。蘆丁、槲皮素及糖的鑒定蘆丁和槲皮素的聚酰胺薄層鑒定樣品：同紙層析展開劑：乙醇-水(7：3)

21、顯色：同紙層析糖的檢出紙層析法取上述濾除槲皮素時(shí)保留的水解濾液20mL，加Ba(OH)2的細(xì)粉2.6g，中和至pH7，濾除生成的BaSO4沉淀，濾液濃縮至1mL,供紙層析點(diǎn)樣用。展開劑：正丁醇-醋酸-水(4：1：5上層或4：1：1)對照品：葡萄糖、鼠李糖水溶液顯色劑：苯胺苯二甲酸鹽(試劑噴后，105C烘10分鐘，顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。)(3)光譜鑒定槲皮素：IR(KBrcm-1)：36002800(broad，OH)，1640(C=O)，1500，1600(benzene)蘆丁:IR（KBrcm-1）：3422（broad,OH），1658（C=0），1602，1502（benzene）1062

22、（broad，OH）UV:357nm,258nm【思考題】1.提取蘆丁工藝中影響產(chǎn)量及質(zhì)量的因素是什么?為什么要加硼砂水溶液?蘆丁水解不完全時(shí)將產(chǎn)生什么結(jié)果?蘆丁和槲皮素用不同展開劑系統(tǒng)展開將出現(xiàn)什么結(jié)果?為什么?蘆丁和槲皮素聚酰胺薄層出現(xiàn)什么結(jié)果?為什么?【參考文獻(xiàn)】1.徐任生主編.中草藥有效成分的提取和分離.上海:上海人民出版社,1972（8）2.中草藥有效成分的研究：第一分冊（提取分離，鑒定和含量測定）.北京：北京人民衛(wèi)生出版社，1972（9）3.中草藥學(xué)：中下冊.南京：江蘇人民出版社.1976（8）,1980（3）4.劉壽山主編.中藥研究文獻(xiàn)摘要.北京:科學(xué)出版社,1963（12）,1

23、979（3）5.黃酮化合物鑒定手冊.北京：科學(xué)出版社,19816.NaturallyoccurringofFlavonoidcompoundsT.A.Geissman19627.TheFlavonoidsJ.B.Harborneetal.19758.于德泉，楊峻山主編.分析化學(xué)手冊：第七分冊（核磁共振波譜分析）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1999實(shí)驗(yàn)三人參皂苷的提取、分離與結(jié)構(gòu)鑒定【簡介】五加科人參為一著名傳統(tǒng)中藥，被廣泛用于貧血、糖尿病、胃炎、失眠等疾病。日曬及硫磺熏過的人參根被作為“生曬參”；而經(jīng)過加工蒸制的人參被稱作“紅參”，其在蒸制過程中產(chǎn)生了焦糖樣的紅棕色。人參中的許多次生代謝產(chǎn)物已被鑒

24、定其主要成分為達(dá)瑪烷型皂苷。在人參中達(dá)瑪烷型皂苷元主要為原人參二醇和原人參三醇，這兩種皂苷元均不穩(wěn)定，水解過程中分別會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)槿藚⒍己腿藚⑷?。在二醇系列皂苷中，糖鏈主要是連接在C-3和C-20位羥基上，而在三醇系列皂苷中糖鏈則連接在C-6和C-20位羥基上。目前已有80余種皂苷從不同來源的人參品種中被鑒定，其中Rb-1和Rg-1分別為二醇和三醇系列的主要成分。而且，在生曬參中一些人參皂苷還連了丙二酸酯結(jié)構(gòu)。另外，在人參總皂苷中還分離得到了幾種齊墩果烷型皂苷。人參總皂苷含量為1.5%2.0%。原人參三醇(Protopanaxatriol)原人參二醇(Protopanaxadiol)OHHO目的

25、】通過本實(shí)驗(yàn)，學(xué)生們將學(xué)會(huì)如何提取、純化和鑒定人參皂苷成分。【原理】人參皂苷是極性成分，能被醇性溶劑（如甲醇、乙醇等）提取及通過D101大孔吸附樹脂得到純化。主要皂苷成分（Rb-1和Rg-1）可通過與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf直比較而加以確定?！局饕獌x器和試劑】1.儀器（1）小層析柱（2）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（3）TLC層析缸（4）顯色瓶（5）三角燒瓶（50mL）（6）加熱器2.試劑（1）D101型大孔吸附樹脂（40-60目）（2）90%乙醇（化學(xué)純），石油醚（化學(xué)純），正丁醇（化學(xué)純），氯仿（分析純），甲醇（分析純）（3）硅膠薄層板（4）5%香草醛-濃硫酸（5）人參皂苷Rb-1和Rg-1標(biāo)準(zhǔn)品【實(shí)驗(yàn)過程】1.提取人

26、參粉末2g，用95%乙醇回流提取三次（30,24,24mL）,每次1小時(shí)。合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行減壓回收，所得浸膏再混懸于10mL水中，并用石油醚進(jìn)行脫脂萃取3次，每次5mL。純化脫脂后的混懸液中加入少量乙醇，使其溶解。以上溶液慢慢滴入大孔吸附樹脂柱上，使其吸附完全。然后分別用水200mL、15%乙醇100mL、30%乙醇100mL、60%乙醇100mL及95%乙醇100mL進(jìn)行梯度洗脫。合并60%乙醇的洗脫液，回收至干，得到人參總皂苷。薄層層析鑒定標(biāo)準(zhǔn)品：Rb-1和Rg-1樣品：人參總皂苷薄層板：硅膠GF254展開劑：氯仿-甲醇-水（6.5:3.5:1，下層），乙醇-醋酸-水（4:1:

27、1）顯色劑：5%香草醛-濃H2S04【備注】DIO1樹脂在吸附樣品前須經(jīng)過處理在提取之前人參原料應(yīng)粉碎【實(shí)驗(yàn)要求】掌握人參皂苷的提取和分離方法。掌握人參總皂昔的D101大孔吸附樹脂純化方法。掌握人參皂昔成分的TLC檢測方法?！揪毩?xí)題】概括描述人參皂苷的提取和分離過程。描述Rg-1和Rb-1在薄層層析上的斑點(diǎn)位置情況?！居懻摗吭谌藚⒃碥罩写嬖谥鴰追N皂元?僅在生曬參中發(fā)現(xiàn)部分人參皂苷成分含有丙二酸酯結(jié)構(gòu)片段，為什么?【參考文獻(xiàn)】（1）Hostettmann,K.,Marston,A.ChemistryandPharmacologyofNaturalProducts:Saponin.Cambridg

28、eUniversityPress:Cambridge,1995:342421（2）Dewick,PaulM.MedicinalNaturalProducts.JohnWiley&SonsLtdPress:NewYork,1997:2O42O6實(shí)驗(yàn)四粉防己生物堿的提取、分離與結(jié)構(gòu)鑒定【簡介】粉防己(或稱漢防己)是防己科千金藤屬植物倒地拱(StephaniatetrandTaMoore)的干燥根，主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)疼痛，有效成分為生物堿，主要為粉防己堿(Tetrandrine，又稱粉防己甲素或漢防己堿)和防己諾林堿Fangchinoline,又稱去甲粉防己堿(Demethyltetrandrine)或

29、粉防己乙詞，二者均屬雙苯甲基四氫異喹啉類生物堿。此外，粉防己中還含有輪環(huán)藤酚堿(Cyclanoline)，屬原小檗堿型，是水溶性季銨生物堿。防己諾林堿(Frangchinoline)【目的】了解總生物堿的提取方法；掌握酚性生物堿與非酚性生物堿的分離方法，以及水溶性生物堿的分離方法熟悉生物堿的鑒別反應(yīng)?！驹怼糠鄯兰簤A的兩個(gè)氮原子均為叔胺狀態(tài)，親脂性較強(qiáng)，可溶于冷苯中。防己諾林堿是粉防己堿的O-去甲衍生物，由于酚羥基受到鄰位取代基的空間障礙，以及分子內(nèi)氫鍵的形成，使酚羥基的酸性大大減弱，因此防己諾林堿不能溶于強(qiáng)堿溶液。但由于酚羥基的存在，使親脂性減弱，難溶于冷苯中，借此可與粉防己堿分離。【儀器和

30、試劑】1.儀器(1)圓底燒瓶500mL(2)三角燒瓶500mL（3）分液漏斗250mL（4）布氏漏斗（5）抽濾瓶2.試劑粉防己粗粉95%乙醇1%鹽酸1%氫氧化鈉無水碳酸鉀濃氨水氯仿丙酮苯甲苯甲醇層析用氧化鋁碘化鉍鉀試劑雷氏銨鹽試劑苦味酸試劑【實(shí)驗(yàn)操作】總生物堿的提取稱取粉防己粗粉50g，置于500mL圓底瓶中，加95%乙醇約150mL，水浴加熱回流12小時(shí)，過濾，藥渣再以95%乙醇約1OOmL同法提取一次，過濾，并將瓶內(nèi)藥渣倒在布氏漏斗上抽干。合并兩次提取液，放冷后如有絮狀物析出，再抽濾一次，回收乙醇，濃縮，得總生物堿浸膏。親脂性生物堿和親水性生物堿的分離將總生物堿浸膏移至三角瓶中，逐漸加入1

31、%鹽酸稀釋，充分?jǐn)嚢枋股飰A溶解，不溶物呈樹脂狀析出沉淀。在水液未加足前，樹脂狀物?；鞈矣谒校^續(xù)加稀鹽酸攪拌，直至加酸水時(shí)溶液不再發(fā)生混濁為止（約需150mL）,靜置，傾出上清液，瓶底的樹脂狀雜物以1%鹽酸少量分次洗滌，直至洗液對生物堿沉淀劑反應(yīng)微弱時(shí)為止。合并洗液與濾液，靜置片刻，抽濾得澄清液體，置500mL三角瓶中，滴加濃氨水至pH9左右，移至250mL分液漏斗。加氯仿150mL振搖提取。分取氯仿層，氨堿性水溶液再以新鮮氯仿萃取數(shù)次，每次用氯仿50mL，直至氯仿抽提液的生物堿反應(yīng)微弱時(shí)為止。（檢查時(shí)取少量氯仿抽提液置表面皿上，待溶劑揮干，殘留物中加稀鹽酸數(shù)滴使溶解，再加生物堿沉淀劑試之

32、）合并氯仿液，此氯仿溶液中含親脂性叔胺堿，而氯仿萃取過的氨堿性水溶液含親水性生物堿。后者取出少量，加鹽酸酸化至pH45，滴加雷氏銨鹽飽和水溶液，觀察有無沉淀生成。親脂性生物堿中酚性與非酚性堿的分離氯仿液移至250mL的分液漏斗中，以1%氫氧化鈉水溶液4OmL萃取3次，氯仿液再用水30mL洗滌4次。氯仿層加無水碳酸鈉脫水干燥，過濾，將氯仿全部蒸去，揮去殘留溶劑后，得粗總非酚性生物堿。叔胺生物堿的純化在盛有非酚性生物堿的圓底燒瓶中，加苯50mL，在水浴上加熱回流使生物堿溶解，傾出上清液，再用苯熱提數(shù)次，合并苯溶液，如不澄清再過濾一次?；厥毡剑瑲埩粑锛颖訜崛芙?，過濾，用熱丙酮洗滌濾紙，合并濾液和

33、洗液置三角燒瓶中（50100mL），回收丙酮至適量，放冷，加塞靜置待結(jié)晶析出。析出完全后用布氏漏斗抽濾，即得粉防己堿和防己諾林堿的混合物。粉防己堿和防己諾林堿的分離方法一:苯冷浸法取上述結(jié)晶狀混合物稱重，置于50mL三角燒瓶中，加5倍量的苯冷浸，時(shí)時(shí)振搖，冷浸1小時(shí)后，過濾分開苯溶液和苯不溶物。苯溶液回收苯至盡，殘留物以丙酮重結(jié)晶，得細(xì)針狀結(jié)晶，為粉防己堿。苯不溶物待揮去殘余苯后，也用丙酮重結(jié)晶，得粒狀結(jié)晶，為防己諾林堿。方法二:氧化鋁層析法取上述結(jié)晶狀混合物，以30倍量中性氧化鋁（160目，IIIII級），氯仿濕法裝柱，將混合堿加少量氯仿溶解，加于柱頂，用氯仿洗脫。流分用氧化鋁薄層層析檢查，

34、丙酮:苯（1:1）為展開劑，改良碘化鉍鉀為顯色劑，合并相同流分，分別回收氯仿，用丙酮重結(jié)晶，即得粉防己堿和防己諾林堿?！旧飰A的一般鑒定方法】1.沉淀反應(yīng)碘化汞鉀試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液1mL,加碘化汞鉀試劑（Mayer試劑）12滴，出現(xiàn)白色或類白色沉淀示有生物堿存在。碘化鉍鉀試驗(yàn)：取樣品的稀酸水溶液1mL,加碘化鉍鉀試劑（Dragendorff試劑）12滴，出現(xiàn)棕紅至桔紅色沉淀說明有生物堿存在。雷氏銨鹽試驗(yàn)：取樣品的酸水溶液（pH45）1mL，加雷氏銨鹽試劑數(shù)滴，出現(xiàn)沉淀說明有生物堿存在。苦味酸試驗(yàn):取祥品的中性水溶液，加苦味酸的飽和水溶液，生成黃色沉淀說明有生物堿存在。2.薄層層析吸附劑：

35、硅膠CMC-Na層析板或高效薄層板樣品：粉防己堿；防己諾林堿；總生物堿；均溶于乙醇中展開劑：氯仿-乙醇（10:1，or10:0.7）,氨氣飽和甲苯-丙酮-甲醇（4:5:1）,氨氣飽和氯仿-丙酮-甲醇（43:1）,氨氣飽和顯色劑：碘化鉍鉀試劑【思考題】粉防己甲素和粉防己乙素在結(jié)構(gòu)上有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？這些異、同點(diǎn)在理化性質(zhì)上有哪些反映？實(shí)驗(yàn)過程中，我們?nèi)绾卫盟鼈兊墓残院蛡€(gè)性？如何利用薄層層析條件判斷分離得到了什么化合物及其純度？分離水溶性與脂溶性生物堿的常用方法有哪些？【物理性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)】粉防己堿，無色針晶，mp.217218C,aD25+297(c=l,CHC)，不溶于水、石油醚。易溶于

36、乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、苯和稀酸水溶液。UV(EtOH)九nm(lg):282.5(3.88).UV(EtOH)九.nm(lg):257maxmin(3.41).IR(KBrcm-1):2920,2825,1540,1568,1490,1250,1220,1090,830,813.防己諾林堿，六面體結(jié)晶(丙酮)，mp.134136C；細(xì)棒狀結(jié)晶(甲醇)，mp.177179C;細(xì)棒狀結(jié)晶(乙醇)，mp.241242C，aD25+275(c=1，CHCl3)，溶解性能與粉防己堿相似，但在苯中的溶解度小于粉防己堿，在乙醇中的溶解度大于粉防己堿。UV(EtOH)九nm(lg):282(3.99).UV

37、(EtOH).nm(lg):259maxmin(3.44)IR(KBrcm-1):3420，1610，1580，1510，1460，1380，1320，1260，1060，1120【參考文獻(xiàn)】北京醫(yī)學(xué)院，北京中醫(yī)學(xué)院主編.中草藥成分化學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，1980肖崇厚主編.中藥化學(xué)，上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1987徐任生主編.天然產(chǎn)物化學(xué)，北京:科學(xué)出版社LuziaKoike，AnitaJ.Marsaioli，EdmundoA.Ruvedaetal.StereochemicalAspectsand13CNMRSpectroscopyoftheBerbamineClassofBisben

38、zylisoquinolineAlkaloids.TetrahedronLetters，1979，(39)，3765S.MorrisKupchan，AndrisJ.Liepa，RobertL.Barteretal.NewAlkaloidsandRelatedArtifactsfromCycleapeltata.TheJournalofOrganicChemistry.1973，38(10)，1846附錄1.常用有機(jī)溶劑及有關(guān)數(shù)據(jù)表溶劑的極性與洗脫能力大小決定于溶劑的分子結(jié)構(gòu)，在很大程度上可以用介電常數(shù)來比較。附錄1.1常用溶劑性質(zhì)表溶劑名稱及結(jié)構(gòu)沸點(diǎn)(C)介電常數(shù)溶解度(2025C)溶劑在水中

39、水在溶劑中石油醚30601.80不溶不溶正己烷691.880.00095%0.0111%環(huán)己烷812.020.010%0.0055%二氧六環(huán)1012.21任意混溶四氯化碳772.240.077%0.010%苯802.290.1780%0.063%甲苯1112.370.1515%0.0334%間二甲苯1372.380.0176%0.5402%二硫化碳462.340.294%0.005%乙醚354.346.04%1.168%醋酸戊酯1494.750.17%1.15%氯仿614.810.815%0.072%乙酸乙酯776.028.08%2.94%醋酸1186.15任意混溶苯胺1846.893.38%

40、4.76%苯酚1809.788.66%28.72%1，1-二氯乙烷57106.03%0.2%1，2-二氯乙烷8410.40.81%0.15%吡啶11512.3任意混溶叔丁醇8212.47任意混溶正戊醇13813.92.19%7.41%異戊醇13114.72.67%9.61%仲丁醇10016.5612.5%44.1%正丁醇11817.87.45%20.5%環(huán)己酮15718.32.3%8.0%甲乙酮8018.524%10.0%異丙醇8219.92任意混溶正丙醇9720.3任意混溶醋酐14020.7微溶微溶丙酮5620.7任意混溶溶劑名稱及結(jié)構(gòu)沸點(diǎn)(C)介電常數(shù)溶解度(2025C)溶劑在水中水在溶劑

41、中乙醇7824.3任意混溶甲醇6433.6任意混溶二甲基甲酰胺15337.6任意混溶乙腈8237.5任意混溶乙二醇19737.7任意混溶甘油39042.5任意混溶甲酸10158.5任意混溶水10080.4任意混溶甲酰胺211101任意混溶四氫咲喃667.58任意混溶*有機(jī)溶劑多易燃，有害或有毒。附錄1.2分離各類成分的溶劑系統(tǒng)和顯色劑化合物類型溶劑系統(tǒng)顯色劑脂肪酸及其酯類乙醚-己烷-甲醇(25:74:1)乙醚-己烷(30:100)二乙醚-石油醚(5:95)50%硫酸己烷-苯(65:35)己烷-苯(5:5)5%磷鉬酸的4%鹽酸醇溶液蠟質(zhì)類二乙醚-乙醚(5:95)膽固醇類石油醚-二乙醚(4:1)二

42、乙醚5%硫酸含氧脂肪酸二乙醚-石油醚(4:1)甾醇類異丙醇-氯仿(1.5:98.5)氯仿己烷-乙醚(4:1)己烷-苯(5:3)石油醚-苯(5:3)石油醚-氯仿-醋酸(75:25:0.5)50%硫酸五環(huán)三萜苯-5%鹽酸醋酸乙酯苯5%硫酸和5%醋酸單甾烴類己烷苯五氧化銻氯仿溶液化合物類型溶劑系統(tǒng)顯色劑萜醇類己烷-乙醚(4:1)己烷-苯(5:3)石油醚-氯仿-醋酸(75:25:0.5)50%硫酸三氯化銻氯仿溶液揮發(fā)油己烷-醋酸-氯仿(6:2:2)甲苯-乙酸乙酯(7:3)1%香蘭醛濃硫酸溶液內(nèi)酰胺衍生物乙酸乙酯碘雌性激素異辛烷-氯仿-乙醇(40:70:18)50%硫酸乙醇溶液吡啶同系物Dragendo

43、rff試劑附錄1.3萃取水溶液用的溶劑B.P(C)可燃性本表中的大部分?jǐn)?shù)據(jù)曲子A.J.GordonandR.A.Ford,TheChemistsCompanion(wileynterscience,NewYork,1972)一書。4代表最毒或最易燃。4321；0代表不燃。毒性*注苯80.133易成乳濁液用有機(jī)溶劑萃取水溶液時(shí)會(huì)形成乳濁液，有可能使分離變得很困難，溶液呈堿性時(shí)，這種乳濁液更易形成；加稀硫酸(如果許可)可以破壞這種乳濁液。以下是通常使用的破乳法：將水相用鹽飽和(NaCl,Na2SO4等)；加幾滴醇或醚(尤其是當(dāng)有幾層是氯仿時(shí))；將混合物進(jìn)行離心，這是最成功的2方4法之一。；較適宜于從緩沖液中提取生物堿及酚類2-丁醇99.513高沸點(diǎn)；較適宜于從緩沖液中提取高極性水溶性物質(zhì)四氯化碳76.504易干燥；較適宜于非極性物質(zhì)氯仿61.704能形成乳濁液；易于干燥能吸收大