食品中大腸埃希氏菌檢驗原始記錄

1、食品中大腸埃希氏菌檢驗原始記錄樣品編號： 檢驗開始時間： 年 月 日樣品名稱： 檢驗完成時間： 年 月 日檢測項目：大腸埃希氏菌 檢測依據(jù)：GB4789.38-2012 MPN計數(shù)法（第一法）： 1.樣品稀釋：無菌操作稱（量）取樣品25g加入盛有225ml的無菌磷酸鹽緩沖液的無菌均質(zhì)杯中，8000r/min10000r/min均質(zhì)2分鐘，做成110樣品液；若樣品為液態(tài)，吸取25ml樣品至盛有225ml無菌磷酸鹽緩沖液的錐形瓶（預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，震蕩混勻，作為1:10的樣品勻液。調(diào)樣品勻液pH至6.57.5。取110樣品勻液1ml加入到盛有9ml磷酸鹽緩沖液稀釋管中，混勻，做成110

2、0樣品均液。根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增一次，換用1支1ml無菌吸頭。2.初發(fā)酵：每個樣品，選取3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1ml（接種量超過1ml，則用雙料LST肉湯），361培養(yǎng)242h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，對于242h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵。對于未產(chǎn)氣者，則繼續(xù)培養(yǎng)482h，觀察，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵實驗。如所有LST肉湯管均未產(chǎn)氣，即可報告大腸埃希氏菌結(jié)果。3.復(fù)發(fā)酵：用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于提前預(yù)溫至45EC肉湯管中，放入

3、帶蓋的44.50.2水浴箱中。水浴的水面應(yīng)高于肉湯培養(yǎng)基頁面，培養(yǎng)242h，檢查小導(dǎo)管是否有氣泡產(chǎn)生，如未有氣泡產(chǎn)生則繼續(xù)培養(yǎng)至482h。記錄24h和48h內(nèi)產(chǎn)氣的EC肉湯產(chǎn)氣管數(shù)，如所有EC肉湯管均為產(chǎn)氣，即可報告大腸埃希氏菌MPN結(jié)果；如有產(chǎn)氣，則進(jìn)行EMB平板分離。4.EMB平板分離：用接種環(huán)取培養(yǎng)物分別劃線接種于EMB平板，361培養(yǎng)1824h，觀察平板上有無具有黑色中心光澤或無光澤的典型菌落。5.營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)：從每個平板上挑去5個典型菌落，如無典型菌落則可挑取可疑菌落，接種到營養(yǎng)瓊脂斜面，361培養(yǎng)1824h。取培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色和生化試驗。接種量g,ml培養(yǎng)時間（h）培養(yǎng)溫度

4、（）空白LST初發(fā)酵（MPN法）361EC肉湯44.50.2EMB平板分離劃線361營養(yǎng)瓊脂斜面361革蘭氏染色 鏡檢/生化實驗注： eq oac(,+)產(chǎn)氣或有典型菌落或有可以菌落；-不產(chǎn)氣或無可疑菌落；結(jié)果：根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，得 MPN/g(ml)。電子天平編號: 使用狀況 試驗前： 試驗后：培養(yǎng)箱編號： 使用狀況 試驗前： 試驗后：檢測人： 校核人： 審核人：樣品編號： 平板計數(shù)法（第二法）：1.樣品的稀釋：同MPN法。2.平板計數(shù)：選取23個適宜連續(xù)稀釋度的樣品勻液，每個稀釋度接種2個無菌平皿，每個平皿接種1ml，同時取1ml稀釋液加入無菌平皿做空白對照。將1015ml冷卻至450.5的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）傾注于 每個平皿中，旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣品勻液充分混勻。待瓊脂凝固后，再加34mlVRBA-MUG覆蓋平板表層，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，361培養(yǎng)1824h。選擇10100CFU之間的平板，暗室中360366nm波長紫外燈下，計數(shù)平板上發(fā)淺藍(lán)色熒光的菌落。稀 釋 度lO0lO-110-210-310-4 空白對照VRBA VRBA-MUG（CFU/板）有淺藍(lán)色熒光的菌落數(shù)/計算及結(jié)果：