懷地黃和懷山藥多糖同步提取工藝研究

1、懷地黃和懷山藥多糖同步提取工藝研究【摘要】目的對懷地黃Rehanniaglutinsaf.YhuEihingensis(hanetShih)Hsia，簡稱RG多糖和懷山藥(DisreappsiteThubf.YhueihingensisHsia，簡稱DT)多糖同步提取要領(lǐng)的工藝參數(shù)舉行了研究。要領(lǐng)拔取提取溫度、提取液pH、固液比3個因素，以多糖含量作為指標(biāo)，通過L9(33)正交實行確定最正確工藝參數(shù)。結(jié)果懷山藥與懷地黃多糖同步提取的最正確工藝參數(shù)為：浸提溫度65，浸提液pH5.5，固液比為130；浸提液濃縮比為41，沉落劑乙醇添加量5倍于浸提液體積；接納Sevage法去除卵白質(zhì)，提獲得到的懷山

2、藥與懷地黃同步多糖含量及得率可別離為73.68%和12.67%。結(jié)論用同步提取法得到的多糖含量及得率優(yōu)于分步提齲【關(guān)鍵詞】懷地黃多糖懷山藥多糖同步提取混淆多糖懷山藥，別名山芋、菜山藥，為薯蕷科多年生纏繞型草本植物，以根莖入藥1。山藥多糖是山藥中的重要活性身分。懷地黃具有止血和促進(jìn)血細(xì)胞增殖的藥理活性，同時可以通過影響白血球和血小板來抗炎2。懷地黃在中醫(yī)藥中被以為是治療糖尿病的“四大圣藥之一，當(dāng)代藥理研究也證實其具有落血糖的作用3。研究表白懷山藥多糖與懷地黃多糖同步后對四氧嘧啶導(dǎo)致糖尿病的小鼠具有較好的治療結(jié)果4。由于如今自然產(chǎn)物提取每每接納分步提取而忽略大多自然產(chǎn)物多糖必要舉行復(fù)配才氣起到有用

3、的結(jié)果，因此對自然產(chǎn)物舉行同步提取可以簡化提取步調(diào)，進(jìn)步多糖含量。1質(zhì)料與儀器懷地黃購于河南省焦作市；懷山藥購于河南省焦作市；乙醇、正丁醇、三氯甲烷、葡萄糖、苯酚試劑均為闡發(fā)純,濃硫酸為優(yōu)級純；SP-2000UV型紫外可見分光光度計上海第三闡發(fā)儀器廠，薄膜蒸發(fā)儀德國Heidlph公司。2要領(lǐng)2.1懷山藥與懷地黃多糖同步提取及懷山藥工藝流程2.2同步多糖卵白質(zhì)脫除要領(lǐng)72.3浸提液濃縮倍數(shù)與乙醇添加量對同步多糖提獲得率的影響稱取懷地黃40g，熱水浸提后，3000r/in離心30in，網(wǎng)絡(luò)浸提液3200l，各取200l接納差異的濃縮倍數(shù)和沉落劑乙醇添加量舉行沉落，3500r/in離心，網(wǎng)絡(luò)沉淀物，

4、闡發(fā)同步多糖得率。2.4正交實行法優(yōu)選懷山藥與懷地黃多糖11提取工藝懷山藥、懷地黃多糖同步提取中，為了得到最大多糖含量，并結(jié)合消費現(xiàn)實，選擇提取溫度、提取液pH值和固液比3個重要工藝參數(shù)作為觀察因素，每因素拔取3個程度，按L9(33)正交表擺設(shè)實行，以同步多糖含量作為權(quán)衡提取服從的指標(biāo)，優(yōu)選最正確工藝參數(shù)。為了進(jìn)步其統(tǒng)計闡發(fā)的可靠性，每一條件下舉行3次重復(fù)實行n=3，測定結(jié)果取其均勻值供統(tǒng)計闡發(fā)用。2.5多糖含量與得率的測定要領(lǐng)苯酚-硫酸法2。多糖含量%=D為樣品液中葡萄糖的濃度gl-1；D為供試液的稀釋因素；為供試樣品重量g。圖1葡萄糖尺度曲線略3結(jié)果3.1同步多糖卵白質(zhì)脫除要領(lǐng)的優(yōu)選卵白質(zhì)

5、具有和多糖相似的溶解性，接納水提醇沉等要領(lǐng)所得的多糖中常存在必然量的卵白質(zhì)。常用的脫卵白要擁有Sevage法、三氯乙酸TA法、酶法脫卵白等。圖2是Sevage法、TA法同步多糖提取歷程中同步多糖含量及得率的影響結(jié)果。由圖2可知，經(jīng)Sevage法脫卵白處置懲罰后同步多糖的含量和得率可別離到達(dá)60.26和8.97；顯著高于TA法，從而選擇Sevage法除卵白。圖2差異卵白質(zhì)去除法對同步多糖的影響略3.2浸提液濃縮倍數(shù)與乙醇添加量對多糖提取的影響乙醇是常用的多糖沉落劑。浸提液濃縮倍數(shù)濃縮比和乙醇添加量是影響多糖沉落的關(guān)鍵因素，對RGP的得率有較大的影響，結(jié)果見表1。由表1可知，浸提液濃縮比為41時，

6、同步多糖得率到達(dá)最高，為10.51，這說明濃縮后浸提液過稀和過稠都倒霉于多糖沉落。別的，同步多糖得率到達(dá)最高時乙醇添加量為濃縮液的5倍量，說明只管沉落劑乙醇可低落多糖溶解度促進(jìn)沉落，但過高的乙醇添加量又會增長溶液總體積而對沉落產(chǎn)生倒霉影響。表1濃縮比及乙醇加量對多糖得率的影響略3.3正交實行法優(yōu)選懷山藥多糖與懷地黃多糖同步提取工藝條件表24的正交實行結(jié)果表白因素提取溫度對懷地黃與懷山藥同步多糖的提取有明顯影響，而因素ApH值、B料液比對提取無明顯影響。由極差R得出影響因素巨細(xì)挨次為：BA。最正確提取工藝參數(shù)為A1B32，即在DEET法提取懷地黃多糖時的最正確工藝參數(shù)是：pH值5.5，加酶量7.

7、5%，溫度65，固液比為130。根據(jù)上述最正確工藝A1B32舉行重復(fù)實行n=3舉行驗證,懷地黃多糖均勻含量為73.68%。表2因素程度略表3L9(34)正交實行闡發(fā)略3.4同步提取多糖與分步提取多糖的比力同步提取時，選用懷山藥與懷地黃各10g舉行水提法提??；分步提取那么各取懷山藥、懷地黃10g別離接納雙酶法舉行提取，盤算提取后多糖得率與多糖含量，并對分步提取后的多糖舉行混淆復(fù)配，盤算其多糖含量，并與同步提取法所得多糖含量舉行比擬，別離舉行3次平行實行。結(jié)果見表5。表4方差闡發(fā)略*表現(xiàn)具有顯著結(jié)果項表5多糖同步提取與單一水提法提取多糖含量比擬略分步提取接納雙酶法；同步提取接納水提法懷山藥與懷地黃

8、同步提取所得多糖含量與得率比擬酶法分步提取懷地黃、懷山藥多糖，其多糖得率與含量略有進(jìn)步。4討論傳統(tǒng)的從自然產(chǎn)物中提取多糖是對單一產(chǎn)物舉行提取，而本實行中是對懷山藥和懷地黃單獨舉行提取的底子上，將兩種質(zhì)料同步后舉行提取，創(chuàng)始了多糖提取的新思緒。同樣量的懷山藥和懷地黃同步提取比擬兩種質(zhì)料單獨提取，得到的多糖得率和多糖含量均有很大的進(jìn)步。由于后續(xù)的繼承純化本錢較高，該要領(lǐng)不但進(jìn)步了中藥材的使用率，為后續(xù)純化低落了本錢。作為如今中藥研究中，只針對單一中藥身分舉行研究，而每每忽略中藥處方藥為多種中藥同步。本實行為將來舉行處方藥有用身分的提取舉行開端的研究。本論文接納雙酶法舉行分步提取舉行比擬，而雙酶法提

9、取是如今研究單一自然產(chǎn)物提取中得到多糖含量較高的一種要領(lǐng)，通例提取方法為水提法8。如今本實行室所得水提法的懷地黃多糖與懷山藥多糖的多糖含量別離為：40.17%和34.21%10。遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于同步提取所得多糖含量。同步提取可以簡化自然產(chǎn)物提取工藝，而且其提取后所得多糖含量要略高于雙酶法分步提取自然產(chǎn)物多糖含量之和，節(jié)流了酶制劑的用量，低落了消費難度，簡化了消費工藝，從而低落了自然產(chǎn)物有用身分消費本錢。研究創(chuàng)造懷山藥與懷地黃多糖同步提取后，顏色較懷地黃多糖提取后較淺，并形成了外層為褐色中心為白色的物質(zhì)布局。推測大概是多糖提取歷程中，色素分開并再次沉落附著在所提取多糖外貌上。本實行所得同步多糖的樣品與多

10、糖單一提取后所得多糖的粘性要遠(yuǎn)小于懷地黃多糖的粘度，造成這種差異的緣故原由有待進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】1高小榮，劉培勛多糖構(gòu)效干系研究希望J.中草藥，2022，35(2)：229.2李宏霞，許閔，孟江懷地黃多糖的含量測定J.河南科學(xué)，2002，20(2)：144.3國度藥典委員會中國藥典，部S.北京：化學(xué)產(chǎn)業(yè)出書社，2000：94.4闞健全，王雅茜山藥活性多糖抗突變作用的體外實行研究J.營養(yǎng)學(xué)報，2001，23(1)：7678.5張士國，邵偉國灰樹花子實體多糖提取要領(lǐng)的比力J.中國林副特產(chǎn)，2022，75：40.6盧曉琳，陳曦，駱健美，等懷地黃多糖雙酶法提取工藝研究J.自然產(chǎn)物研究與開拓，2022，125：36.7張立娟，于國萍黑木耳多糖酶法提取條件的優(yōu)化及脫卵白工藝的研究J