實驗一培養(yǎng)基配制

1、關(guān)于實驗一培養(yǎng)基的配制第一張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、實驗?zāi)康牧私庵参锿庵搀w離體培養(yǎng)所需各種營養(yǎng)成分及激素種類。初步掌握培養(yǎng)基母液配制方法。第二張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、實驗原理 植物材料培養(yǎng)要獲得成功，并正常生長，培養(yǎng)基的成分是一個決定性因素，不同植物要求不同的培養(yǎng)基。大多數(shù)植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基由無機營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機附加物等五類物質(zhì)組成。第三張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 在配制培養(yǎng)基之前，為了使用方便、簡化操作、用量準確，減少每次配藥稱量各種化學成分所花費的時間和誤差，常常將配制培養(yǎng)基所需無機大量元素、微量元素、鐵鹽、

2、有機物、激素成分分別配制成比需要量大若干倍的濃縮母液，置于冰箱內(nèi)保存。當配制培養(yǎng)基時，按預(yù)先計算好的量分別吸取各種母液稀釋即可。第四張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三、實驗材料與器具1、用具器材 滅菌鍋、普通及精密天平、燒杯、醫(yī)用瓷缸、量桶、移液管、試劑瓶、藥勺、玻璃棒、pH試紙。 2、藥品試劑 蒸餾水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、瓊脂、各種所需化學藥品（分析純）。第五張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月四、實驗步驟 1、母液配制（1）配制10倍1 L MS大量元素母液NH4NO3 16.5 g KH2PO4 1.7 gKNO3 19 g CaCl22H2O 4

3、.4 gMgSO47H2O 3.7 g第六張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 配制成200倍1 L母液，依次稱取:KI 0.166 g Na2MoO42H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO45H2O 0.005 gMnSO44H2O 4.46 g CoCl26H2O 0.005 gZnSO47H2O 1.72 g（2）配制MS微量元素母液第七張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 配制成200倍l L鐵鹽母液，依次稱取:EDTA二鈉（Na2EDTA7H2O） 7.46 g FeSO47H2O 5.56 g（3）配制MS鐵鹽母液第八張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6

4、月 配制成200倍1 L有機母液，依次稱?。蝴}酸硫胺素（VB1） 0.02 g煙酸 0.1 g鹽酸吡哆醇（VB6） 0.1 g（4）配制MS有機母液第九張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（5）配制MS有機母液配制成200倍1 L有機母液：肌醇 20.0 g（6）配制MS有機母液配制成200倍1 L有機母液：甘氨酸 0.4 g第十張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 0.1mg/mL 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的鹽酸溶解，再加蒸餾水定容至250mL。0.1mg/mL NAA：取25mg的NAA可溶于熱水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至2

5、50mL。0.1mg/mL 2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量95%乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素的配制 第十一張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 2、培養(yǎng)基的配制（以1L培養(yǎng)基為例）1、計量 根據(jù)配制培養(yǎng)基的量（1L）和母液的濃度計算需要吸取母液的量，計算公式：吸取量 mL=培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度（mg/L）1000mL/母液濃度（mg/L）。 母液濃度/培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度=稀釋倍數(shù)2、移液 取大燒杯（1L）一只，按照計算吸取母液的量依次吸取各母液置于燒杯中備用。3、稱取 稱取10g瓊脂，30g蔗糖備用。第十二張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月4、融化 用搪瓷量杯

6、量取600700mL 的蒸餾水放在電爐上，加入瓊脂，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀將其取下，加入蔗糖，攪拌使之溶解。5、混合 將融化的瓊脂和蔗糖倒入裝有母液的大燒杯中，充分混合，用蒸餾水定容到1000mL。6、調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH 或HCl溶液調(diào)pH 為6.0。第十三張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月編號6-BA（mg/l）NAA（mg/l）2,4-D（mg/l）第一組0.50.11.0第二組0.50.52.0第三組0.50.050第四組1.00.10共分4組，每組配750mL培養(yǎng)基，每瓶倒25-30mL，共接種28瓶左右每瓶編號1（1/2/3/4）n號分組情況第十四張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3、培養(yǎng)基的分裝和滅菌溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分裝時，將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶中，每瓶約25 mL -30 mL。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。用封口膜封口并編號。滅菌：121，15-20 min。第十五張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月五、注意事項 配制鐵鹽母液時，F(xiàn)eS04和Na2EDTA應(yīng)分別加熱溶解后混合， 并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色（約加熱20-30min），調(diào)pH值至5.5，防止FeS0