植物體內(nèi)磷主要以有機(jī)磷如核酸

1、n 一4植物體內(nèi)磷主要以有機(jī)磷如核酸、磷脂、植素等的形態(tài)存在于植物組織中， 有機(jī)磷須經(jīng)干灰化或濕灰化分解轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)正磷酸鹽。溶液中磷一般用比色法測 定。濕灰化應(yīng)用不同比例的HNO3、H2SO4、HC1O4的方法較為普遍，濕灰化法 的消煮溫度不會超過混合酸的沸點(diǎn)，灰分元素不會形成難溶的硅酸鹽，而且當(dāng)用 H2SO4或HC1O4消煮時(shí)，可使SiO2充分脫水且使其吸附作用降至最低限度，不致 造成灰分元素測定產(chǎn)生顯著的負(fù)誤差。但是由于試劑用量大，會帶來污染的危險(xiǎn)， 試劑空白值大。當(dāng)然加有hno3的濕灰化法，則不能在消煮液中同時(shí)測定氮。在十灰化法中，所用的溫度有所不同，一般建議灰化溫度不超過500C，而

2、時(shí)間為28h，近年來，改進(jìn)的十灰法中，添加一些“助灰化劑”，在灰化時(shí)通 02,添加KHSO4等，幫助灰化；干灰化添加試劑量少，污染的可能性比濕灰化 小，而且簡便易行。對于植物全磷的測定用H2SO4-H2O2消煮法，同時(shí)測定氮、 磷和鉀較為方便?？傊?，方法的選擇應(yīng)根據(jù)測定元素的各類、具體條件來決定。 溶液中磷的測定，最常用的鉬藍(lán)比色法和釩鉬黃比色法，可根據(jù)樣品中磷的含量 選用測定方法，當(dāng)磷的含量高時(shí)，選用釩鉬黃法為佳，反之則可用鉬藍(lán)法。13.2.2.植株中磷的測定(H2S04- H202消煮，釩鉬黃比色法)13.2.2.1.1方法原理植物樣品經(jīng)H2S04- H202消煮分解制備待測液(同13.2

3、.1.1.4)。待測液中正磷酸能與偏磷酸鹽和鉬酸鹽在酸性條件下作用形成黃色的雜聚 化合物釩鉬酸鹽，其組成沿不能十分肯定，有人認(rèn)為是 P0 V0 - 22MoO - nHO。溶液的黃色很穩(wěn)定，其深淺與磷含量成正比，可 2 52 532用比色法測定磷的含量。比色時(shí)可根據(jù)溶液中磷的濃度選擇比色波長400490nm， 磷的濃度高時(shí)選擇較長的波長，較低時(shí)選用較短的波長。釩鉬黃法要求比色液中 酸的濃度（即終濃度）很寬，極限是0.041.6mol L-i（H+）；酸度太高時(shí)顯色不完全 或不顯色，太低時(shí)則可能生成沉淀或其它物質(zhì)的顏色。釩酸鹽的終濃度范圍是 8.0X10-52.2X10-3 mol L-1，通常

4、用后一種濃度。鉬酸鹽的終濃度范圍是 1.6X10-35.7X10-3 molL-1。在正常的室溫變化范圍內(nèi)對黃色強(qiáng)度無影響。黃 色發(fā)生很快，在最初15min內(nèi)會降低約1.3%，以后至少2h內(nèi)很穩(wěn)定，在24h內(nèi) 也無顯著變化。本法操作簡便快速，準(zhǔn)確度和重復(fù)性較好，相對誤差約為13% ；靈敏度較 鉬藍(lán)法低，適測范圍廣，約為120 mg - L-1；對酸的濃度要求不嚴(yán)格，容易控制， 在HNO3、HCl、H2SO4、HC1O4等介質(zhì)中都可適用；干擾離子少，特別是Fe3+ 的允許量遠(yuǎn)高于鉬藍(lán)法，因此該法廣泛用于植物和有機(jī)肥料樣品中磷的測定。13.2.2.1.2主要儀器：消煮管（瓶）；控溫消煮爐；分光光度

5、計(jì)。13.2.2.1.3 試劑釩鉬酸銨試劑：稱（NH4）6MoO24 - 4H2O12.5g溶于200mL水中。另將偏 釩酸銨（NH4VO3） 0.625g溶于沸水150mL中，冷卻后，加入濃HNO3 125mL， 再冷卻全室溫。將鉬酸銨溶液緩慢地注入釩酸銨溶液中，隨時(shí)攪拌，用水稀釋至 500mL。6mol - L-1 NaOH 溶液：稱 NaOH 24g 溶于水，稀釋至 100mL。2,6-二硝基酚指示劑：2,6-二硝基酚0.25g溶于100mL水中。其變色范圍 是pH2.4 （無色）4.0（黃色）。變色點(diǎn)是pH3.1。50諂-mL-1 P標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)105C烘干的KH2PO40.2

6、195g，溶于 水，移入1000mL容量瓶，加水全約400mL，加濃硫酸5mL，用水定容。裝入 塑料瓶中低溫保存?zhèn)溆谩Ｆ渌噭┩?3.2.1.1.3。吸取13.2.1.1.4消煮好經(jīng)過濾的待測液2025mL(含 P 0.251.0mg),置于 50mL容量瓶中，加2,6-二硝基酚指示劑2滴，用6mol L-1 NaOH溶液中和全 剛呈黃色，加入釩鉬酸銨試劑10.00mL，用水定容。放置15min后用波長450nm, 在分光光度計(jì)上比色，以空白液調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：分別吸取50g - mL-1 P標(biāo)準(zhǔn)溶液0，1.0，2.5, 7.5, 10.0， 15.0于50mL容量瓶中，同上述操作步

7、驟顯色和測定，該標(biāo)準(zhǔn)系列P的濃度分別 為 0， 1.0，2.5， 5.0，7.5，10.0，15.0 旺 mL-1。13.2.2.1.5結(jié)果計(jì)算全 P (%) = p V X 分取倍數(shù) X 10-4 / m式中：p一從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得顯色液P的質(zhì)量濃度(旺mL-1 )；V一顯色液體積(mL)；分取倍數(shù)一消煮液定容體積(mL) /吸取消煮液體積(mL)；m一十樣品質(zhì)量(g)。13.2.2.2植株中磷的測定(H2SO4-H2O2消煮，鉬銻抗比色法)囹13.2.2.2.1方法原理植物樣品經(jīng)H2SO4-H2O2分解(原理同13.2.1.1.1)。溶液中的磷用鉬銻抗比色 法測定。主要儀器：同 13.2.2.

8、1.2試劑1.濃 h2so4；3. 50g - mL-1 標(biāo)準(zhǔn)溶液：同 13.2.2.1.3(4)； 4.其它試劑同5.2.2.313.2.2.2.4操作步驟吸取13.2.1.1.4消煮好經(jīng)過濾的待測液25mL（含P 525旺）置于50mL容 量瓶中，按照5.2.2.4, 2調(diào)節(jié)溶液酸度和顯色步驟進(jìn)行比色測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：同5.2.2.4, 3。結(jié)果計(jì)算：參照 13.2.2.1.5注釋：參照 5.2.2.6HCIO4H2SO4 法5.2.2.1方法原理 用高氯酸分解樣品，因?yàn)樗仁且环N強(qiáng)酸，又是一種 強(qiáng)氧化劑，能氧化有機(jī)質(zhì)，分解礦物質(zhì)，而且高氯酸的脫水作用很強(qiáng)，有助于膠 狀硅的脫水，并能與F

9、e3+絡(luò)合，在磷的比色測定中抑制了硅和鐵的干擾。硫酸的 存在提高消化液的溫度，同時(shí)防止消化過程中溶液蒸干，以利消化作用的順利進(jìn) 行。本法用于一般土壤樣品分解率達(dá)97-98%，但對紅壤性土壤樣品分解率只有 95%左右。溶液中磷的測定采用鉬銻抗比色法(其原理見5.2.1.2)。5.2.2.2主要儀器721型分光光度計(jì)；LNK-872型紅外消化爐。5.2.2.3 試劑濃硫酸(Hso，P Q1.84gcm-3 ，分析純)；247072%高氯酸(HClO4，p Q1.60gcm-3 ，分析純)；2, 6-二硝基酚或2, 4-二硝基酚指示劑溶液：溶解二硝基酚0.25g于100mL水中。此指示劑的變色點(diǎn)約為

10、pH3，酸性時(shí)無色，堿性時(shí)呈黃色。4molL-1氫氧化鈉溶液：溶解NaOH 16g于100mL水中。2molL-1(1/2 hso)溶液，吸取濃硫酸6mL，緩緩加入80mL水中，邊24加邊攪動，冷卻后加水至100mL。鉬銻抗試劑：A.5g.L-i酒石酸氧銻鉀溶液：取酒石酸氧銻鉀 K(SbO)C4H4O6)0.5g，溶解于100mL水中。B.鉬酸銨一硫酸溶液：稱取鉬酸 銨(NH4)6Mo O24 4H2O) 10g，溶于 450mL 水中，緩慢地加入 153mL 濃 H2SO4， 邊加邊攪。再將上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分搖勻，貯于 棕色瓶中，此為鉬銻混合液。臨用前（當(dāng)天），稱

11、取左旋抗壞血酸（C6H8O5，化學(xué)純）1.5g，溶于100mL鉬銻 混合液中，混勻，此即鉬銻抗試劑。有效期24小時(shí)，如藏于冰箱中則有效期較 長。此試劑中H2SO4為5.5molf-1（H+），鉬酸銨為10g L-1，酒后酸氧銻鉀為 0.5g L-1，抗壞血酸為 15g L-1。（7）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取在105C烘箱中烘干的KH2PO4（分析純）0.2195g， 溶解在400mL水中，加濃H2SO45mL（加 H2SO4防長霉菌，可使溶液長期保存）， 轉(zhuǎn)入1L容量瓶中，加水至刻度。此溶液為50p g mL-1P標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取上述 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液25mL，稀釋至250mL，即為5p g mL-1P標(biāo)

12、準(zhǔn)溶液（此溶液不宜久 存）。5.2.2.4操作步驟（1 ）待測液的制備：準(zhǔn)確稱取通過100目篩子的風(fēng)干土樣 0.50XX1.0XXXg（的），置于50mL開氏瓶（或100mL消化管）中，以少量水 濕潤后，加濃H2So8mL，搖勻后，再加7072%HClO4 10滴，搖勻，瓶口上加一個(gè) 小漏斗，置于電爐上加熱消煮（全溶液開始轉(zhuǎn)白后繼續(xù)消煮）20min。全部消煮時(shí) 間約為4060min。在樣品分解的同時(shí)做一個(gè)空白試驗(yàn)，即所用試劑同上，但不 加土樣，同樣消煮得空白消煮液。將冷卻后的消煮液倒入100mL容量瓶中（容量瓶中事先盛水3040mL），用 水沖洗開氏瓶（用水應(yīng)根據(jù)少量多次的原則），輕輕搖動容量

13、瓶，待完全冷卻后， 加水定容。靜置過夜，次日小心地吸取上層澄清液進(jìn)行磷的測定；或者用十的定 量濾紙過濾，將濾液接收在100mL干燥的三角瓶中待測定。（2）測定：吸取澄清液或?yàn)V液5mL （對含P，0.56gkg-1以下的樣品可 吸取10mL），以含磷（P）在2030p g為最好注入50mL容量瓶中，用水沖稀全 30mL，加二硝基酚指示劑2滴，滴加4molL-1NaOH溶液直至溶液變?yōu)辄S色，再 加2molL-1（1/2HS） 1滴，使溶液的黃色剛剛褪去（這里不用NH OH調(diào)節(jié)酸度，244因消煮液酸濃度較大，需要較多堿去中和，而NH OH濃度如超過10g-L-1就會使4鉬藍(lán)色迅速消退）。然后加鉬銻抗

14、試劑5mL，再加水定容50mL，搖勻。30min后， 用880nm或700nm波長進(jìn)行比色(g ，以空白液的透光率為100(或吸光度為0), 讀出測定液的透光度或吸收值。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確吸取5p g-mL-i，P標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、4、6、8、10mL， 分別放入50mL容量瓶中，加水全約30mL，再加空白試驗(yàn)定容后的消煮液5mL, 調(diào)節(jié)溶液pH為3，然后加鉬銻抗試劑5mL，最后用水定容至50mL。30min后進(jìn)行 比色。各瓶比色液磷的濃度分別為0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0. gmL-iP。5.2.2.5結(jié)果計(jì)算 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得待測液的磷含量后，可按下式進(jìn)行計(jì) 算：土壤全磷(P)量(gkg-1) = p XV/mX V2/V