羅漢果組培快繁技術(shù)實(shí)例_含配方

1、羅漢果：葫蘆科多年生藤本植物的果實(shí)。別名拉汗果、假苦瓜、光果木鱉、金不換、羅漢表、裸龜巴，被人們譽(yù)為 神仙果”，其葉心形，雌雄異株，夏季開(kāi)花，秋天結(jié)果。主要產(chǎn)于廣西 壯族自治區(qū)桂林市永?？h龍江鄉(xiāng)、龍勝和百壽等鎮(zhèn)，永福縣和龍勝縣是羅漢果之鄉(xiāng)種植歷史 比較悠久，其中永福種植羅漢果已經(jīng)有300多年歷史，龍勝縣種植羅漢果已經(jīng)有 200多年歷史，中國(guó)百分之九十羅漢果產(chǎn)于永?？h和龍勝縣，羅漢果是桂林名貴的土特產(chǎn)，也是國(guó)家首 批批準(zhǔn)的藥食兩用材料之一，其主要功效是能止咳化痰。果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高，含豐富的維生 素C （每100克鮮果中含400毫克500毫克）以及糖玳、果糖、葡萄糖、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)等。羅漢果的傳統(tǒng)生

2、產(chǎn)采用塊莖和壓蔓等進(jìn)行無(wú)性繁殖，繁殖系數(shù)低，且長(zhǎng)期采用無(wú)性繁殖導(dǎo)致 種質(zhì)退化和病毒積累，產(chǎn)量和品質(zhì)下降，滿(mǎn)足不了農(nóng)戶(hù)擴(kuò)大種植面積的需求，嚴(yán)重制約了羅 漢果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。利用組織培養(yǎng)進(jìn)行種苗繁殖，是羅漢果良種快繁和控制羅漢果病毒病蔓延 的有效途徑，具所用繁殖材料少、增殖系數(shù)大、苗整齊和脫病毒等特點(diǎn)，所繁殖的脫毒苗能 滿(mǎn)足生產(chǎn)的大量需求。從 20世紀(jì)80年代起，就有很多研究學(xué)者從事羅漢果組織培養(yǎng)的研究, 并獲成功。一莖段培養(yǎng)羅漢果最常見(jiàn)的組培方法是以莖段為外植體進(jìn)行培養(yǎng)(蔡時(shí)可等，2005)。培養(yǎng)條件(1)誘導(dǎo)培養(yǎng)基 MS+6-BA1.0mg/L+舊A0.2mg /L。(2)增殖培養(yǎng)基 MS+6-B

3、A1.0 2.0mg/L+舊A0.2mg /L。(3)生根培養(yǎng)基MS+舊A0.2mg/L。培養(yǎng)基用適量瓊脂固化，蔗糖濃度30g/L, pH5.8o培養(yǎng)溫度2530C,光照強(qiáng)度1000lx,光照時(shí)間1012h/天。取材與消毒從羅漢果植株上取510cm嫩梢為外植體，切去葉片，洗凈備用。在超凈工作臺(tái)上用75%酒精將外植體預(yù)消毒10s,然后切成帶1個(gè)節(jié)、長(zhǎng)0.51.0cm的莖段，再用添加數(shù)滴 0.1% HgCl2溶液消毒710min,用無(wú)菌水沖洗 34次，最后接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。誘導(dǎo)培養(yǎng)將羅漢果莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)30天后，黃綠色的腋芽從葉腋處被誘導(dǎo)出來(lái)，誘導(dǎo)率達(dá)99 %以上，莖段基

4、部產(chǎn)生白色海綿狀愈傷組織。增值培養(yǎng)待腋芽長(zhǎng)到46cm時(shí)，將其切成帶1個(gè)節(jié)的莖段，接種在增殖培養(yǎng)基上。25天后腋芽被重新誘導(dǎo)和生長(zhǎng)，增殖倍數(shù)達(dá)46倍，但在第4代后容易從基部誘導(dǎo)出叢芽，增殖倍數(shù)最高可達(dá)12倍。生根培養(yǎng)將35cm高的腋芽切割后接種在生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)10天后就開(kāi)始誘導(dǎo)出白色根系，培養(yǎng)30天生根率達(dá)95.8%。又據(jù)周鳳玨等（2007）報(bào)道，采用野生翅子羅漢果植株新生藤蔓的莖段為外植體，以MS+NAA0.1mg / L+LFS（靈發(fā)素）0.2mg/ L培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，1520天誘導(dǎo)率達(dá)90%100%;于MS+LFS0.2mg/L上進(jìn)行繼代增殖和生根，培養(yǎng) 2530天，

5、苗高達(dá)4 7cm,平均增殖倍數(shù)3.7,生根率達(dá)95%以上。二莖尖脫毒培養(yǎng)由于羅漢果花葉病的流行，許多種植園都感染花葉病毒，導(dǎo)致單位面積減產(chǎn)，品質(zhì)下降，經(jīng) 濟(jì)效益大大降低。杭玲等(1999)采用了組織培養(yǎng)方法培育羅漢果無(wú)毒苗。供試材料為羅漢果 的青皮果品種，采用種子播種的實(shí)生苗，以受感染花葉病毒而致病的植株的莖尖為外植體， 接種于MS+6-BA1.0mg/L+IAA 0.1mg /L培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，長(zhǎng)至 5cm高時(shí)，置于生 長(zhǎng)培養(yǎng)箱內(nèi)于38c下培養(yǎng)1周后，切取2mm大小莖尖接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上按常規(guī)方法培養(yǎng)， 培養(yǎng)3周后，長(zhǎng)勢(shì)良好，成苗率達(dá) 100%。經(jīng)檢查，脫毒率達(dá)100%。當(dāng)小苗長(zhǎng)至57

6、cm高 時(shí)，切成長(zhǎng)0.5cm左右，帶一個(gè)節(jié)間的莖段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA0.5mg /L+IAA0.1mg /L+IBA0.10.5mg/L(或NAA0.10.5mg/L)進(jìn)行增殖培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基以 MS+NAA0.1mg /L或MS+IBA0.10.5mg/L為宜。生根苗的移栽成活率達(dá)90%。用汁葉摩擦法接種于指示植物上進(jìn)行病毒檢測(cè)，結(jié)果表明組培苗已完全脫毒。黃燕芬等（2005）采取貴州貞豐栽培的3個(gè)羅漢果品種：紅毛 2號(hào)、青皮果和拉江果的莖尖和莖段為外植體，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA0.51.0mg/L+IAA 0.2mg/L上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),15天后即可誘導(dǎo)出芽；將芽轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基

7、MS+6-BA0.5mg/L+IAA0.1mg /L+IBA0.1mg /L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，每20天繼代1次，增殖系數(shù)達(dá)8.5;將芽苗轉(zhuǎn)人生根培養(yǎng)基MS+NAA0.1mg /L中進(jìn)行生根培養(yǎng)，30天可誘導(dǎo)生根并壯苗。三其他器官培養(yǎng)黃春梅等（2005）以羅漢果胚軸為外植體，在 Ms+6-BA4.0mg/L+IAA1.0mg /L培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽分化平均高達(dá)7.6個(gè)，單芽段在生根培養(yǎng)基 1/2Ms+NAA0.2mg /L+IBA0.5mg /L中一步生根成苗，生根率達(dá) 100%。四試管苗移栽組培苗生根后，將培養(yǎng)瓶搬到煉苗棚內(nèi)，以20001x散射光煉苗，20天后長(zhǎng)成莖葉青綠、根系白色的健壯小苗。將生根苗從培養(yǎng)瓶中取出，用清水洗掉培養(yǎng)基，然后用0.01 %高鎰酸鉀溶液浸泡消毒1min,再用清水沖洗1次，然后種植在裝有泥土：椰糠：珍珠巖一5: 3: 2或基質(zhì)