電阻抗法白細(xì)胞檢驗(yàn)

1、電阻(dinz)抗法白細(xì)胞檢測原理美國(mi u)庫爾特原理（coulter principle)共四十頁細(xì)胞計(jì)數(shù)電阻抗(zkng)原理共四十頁把用等滲電解質(zhì)溶液（稀釋液）稀釋的細(xì)胞懸液倒入到一個(gè)不導(dǎo)電的容器中，將小孔管，也稱傳感器插到細(xì)胞懸液中，小孔是電阻抗法細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)重要部分，其內(nèi)(q ni)充滿了稀釋液，并有一個(gè)電極，其外側(cè)細(xì)胞懸液中有一個(gè)外電極。當(dāng)電流接通后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流，細(xì)胞懸液通過有固定直徑和厚度的小孔向小孔內(nèi)部流動，計(jì)數(shù)孔直徑一般100um，厚度為75um左右。因?yàn)樾】字車錆M了具有傳導(dǎo)性的液體，其電子脈沖是穩(wěn)定的。如果供給的電流I和阻抗Z是穩(wěn)定的，那么根

2、據(jù)歐姆定律，通過小孔的電壓E也是不變的。當(dāng)懸液中一個(gè)細(xì)胞通過小孔時(shí)，由于細(xì)胞有極小的傳導(dǎo)性，細(xì)胞的導(dǎo)電性質(zhì)比等滲的稀釋液要低，在電路中小孔感應(yīng)區(qū)內(nèi)電阻增加，于瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)一個(gè)脈沖信號，這被稱為通過脈沖，電壓增加程度取決于細(xì)胞體積，細(xì)胞體積越大，引起的電壓變化越大，產(chǎn)生的脈沖振幅越高。通過對脈沖大小的測量可以測定出細(xì)胞體積，記錄脈沖的數(shù)目可以得到細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果；經(jīng)過對各種細(xì)胞所產(chǎn)生脈沖大小的電子選擇，可以區(qū)分不同種類的細(xì)胞，并進(jìn)行分析。共四十頁電阻(dinz)抗法白細(xì)胞分群及計(jì)算方法根據(jù)脈沖的大小，即可人為地將血內(nèi)的白細(xì)胞分成幾群（二分群或三分群）電阻法白細(xì)胞“分類”實(shí)際上是根據(jù)溶血劑

3、作用后的白細(xì)胞體積(tj)大小的分群，其測量的標(biāo)準(zhǔn)只是根據(jù)白細(xì)胞體積(tj)的大小，而體積(tj)大小并不是細(xì)胞形態(tài)惟一的指標(biāo)。共四十頁直方圖與脈沖(michng)信號的關(guān)系共四十頁白細(xì)胞體積(tj)分布直方圖共四十頁經(jīng)過溶血劑處理后的白細(xì)胞根據(jù)(gnj)體積大小可以初步確認(rèn)其相應(yīng)的種類：第一亞群（小細(xì)胞群）是淋巴細(xì)胞（LYM);第二個(gè)亞群是單個(gè)核細(xì)胞區(qū)（MONO),也被稱為中間細(xì)胞（MID)；相當(dāng)于粒細(xì)胞的細(xì)胞群（GRAN)位于第三亞群（大細(xì)胞群）。例如位于3590fl的顆粒被計(jì)數(shù)為淋巴細(xì)胞，90160fl的顆粒計(jì)數(shù)為單核細(xì)胞，160fl以上的顆粒計(jì)數(shù)為粒細(xì)胞。共四十頁在白細(xì)胞計(jì)數(shù)池中除加入

4、一定量的稀釋液外還加入了溶血劑，此溶血劑一方面使紅細(xì)胞迅速溶解；另一方面使白細(xì)胞漿經(jīng)細(xì)胞膜滲出，胞膜緊裹在細(xì)胞核或存在的顆粒物質(zhì)周圍。經(jīng)此處理后的白細(xì)胞體積與其自然體積無關(guān)，含有顆粒的粒細(xì)胞經(jīng)溶血劑處理后比無顆粒的單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞體積要大些，但其真實(shí)體積與單核細(xì)胞相等或更小。白血病細(xì)胞、異性淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等多出現(xiàn)在單個(gè)核細(xì)胞區(qū)域，少數(shù)也可見于淋巴細(xì)胞或粒細(xì)胞區(qū)。所以白細(xì)胞直方圖并不能代表自然狀況，但可以(ky)用于判斷白細(xì)胞各體積群分布情況。共四十頁正常(zhngchng)白細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)白細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)白細(xì)胞直方圖共

5、四十頁異常(ychng)白細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)白細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)白細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)白細(xì)胞直方圖共四十頁白細(xì)胞直方圖變化(binhu)的意義主要是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員如何做好儀器計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制(kngzh)及判斷是否“涂片復(fù)檢”。1.判斷白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)是否受到其他因素的干擾某些貧血的病理性紅細(xì)胞、新生兒紅細(xì)胞等，對溶血劑有較強(qiáng)的抵抗力，使之不溶解或不完全溶解而影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)；血液內(nèi)有較多的有核紅細(xì)胞，溶解后紅細(xì)胞的核當(dāng)做白細(xì)胞計(jì)數(shù)；血小板聚集成團(tuán)，誤計(jì)數(shù)為白細(xì)胞等，影響了白細(xì)胞計(jì)數(shù)，此時(shí)白細(xì)胞直方圖也可發(fā)生相應(yīng)的改變，因而觀察圖形變化可判斷儀器

6、的工作狀態(tài)。共四十頁白細(xì)胞直方圖變化(binhu)的意義2.判斷直方圖是否符合篩選標(biāo)準(zhǔn)，決定涂片鏡檢電阻抗法儀器白細(xì)胞(xbo)“分類”（僅是體積的分群）結(jié)果，只是用于健康體檢或無明顯血液學(xué)檢查異常結(jié)果及白細(xì)胞(xbo)各群分布直方圖正常的病人。換言之，在白細(xì)胞(xbo)數(shù)明顯增高或減低，或末梢血出現(xiàn)形態(tài)不典型或幼稚細(xì)胞(xbo)時(shí)，均可導(dǎo)致直方圖異常，此時(shí)細(xì)胞(xbo)“分類”結(jié)果是不準(zhǔn)確的。因此，中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)會專家座談會明確規(guī)定，使用血細(xì)胞(xbo)分析儀進(jìn)行白細(xì)胞(xbo)“分類”時(shí)，必須具備：病人白細(xì)胞(xbo)計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量均在正常范圍內(nèi)白細(xì)胞(xbo)體積分布直方圖

7、完全正常的情況下，才能作為白細(xì)胞(xbo)分類結(jié)果用于臨床，否則必須涂片鏡檢。共四十頁掌握(zhngw)本實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞正常直方圖不同廠家(chn ji)、不同型號的儀器白細(xì)胞體積分布直方圖是不完全相同的，但電阻法各類儀器白細(xì)胞直方圖的病理變化趨勢是一致的。因此，在分析各種病理變化的圖形之前，必須先掌握自己實(shí)驗(yàn)室所擁有的血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞正常直方圖。共四十頁電阻抗法紅細(xì)胞及血小板檢測(jin c)原理紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(j sh)和紅細(xì)胞比容測定原理紅細(xì)胞通過小孔時(shí)，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少即紅細(xì)胞的數(shù)目，脈沖的高度代表單個(gè)脈沖細(xì)胞的體積。脈沖高度疊加，經(jīng)換算即可得紅細(xì)胞數(shù)，得出紅

8、細(xì)胞比容。共四十頁血紅蛋白測定(cdng)原理共四十頁血紅蛋白測定(cdng)原理被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細(xì)胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血劑中有關(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋白衍生物，進(jìn)入血紅蛋白測試系統(tǒng)，在特定波長（一般530nm550nm)下比色，吸光度的變化與液體中血紅蛋白含量成正比，儀器便可顯示其濃度。國際血液標(biāo)準(zhǔn)委員會（ICSH)推薦的氰化高鐵（HiCN）法，最大吸收在540nm。校正儀器必須以HiCN值為標(biāo)準(zhǔn)。為了減少溶血劑的毒性(d xn)，避免含氰血紅蛋白衍生物檢測后的污物處理，今年來有些血細(xì)胞分析儀使用非氰化溶血劑（如SLS）。實(shí)驗(yàn)證明，形成的衍生物（SLS-Hb)與HiCN吸收

9、光譜相似，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性、準(zhǔn)確性達(dá)到含有氰化物溶血劑同樣水平。共四十頁正常(zhngchng)紅細(xì)胞直方圖共四十頁正常(zhngchng)紅細(xì)胞直方圖儀器在36360fl的范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞。正常紅細(xì)胞主要分布在50200fl范圍內(nèi)，直方圖上可見兩個(gè)細(xì)胞群體：從50125fl區(qū)域有一個(gè)幾乎(jh)兩側(cè)對稱、較狹窄的正態(tài)分布曲線（紅細(xì)胞主群），主峰右側(cè)約分布在125200fl區(qū)域的細(xì)胞，為大紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞。共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖1.缺鐵性貧血的直方圖：其特點(diǎn)為曲線峰左移，峰底變寬，顯示小細(xì)胞不均一性。

10、外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積(tj)大小不均，中央淡染區(qū)明顯增大，小紅細(xì)胞明顯增多。2.輕型珠蛋白生成障礙性貧血的直方圖：圖形表現(xiàn)為曲線峰左移，峰底變窄，顯示小細(xì)胞均一性。外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積減小，但大小變化不明顯，有時(shí)可見靶形紅細(xì)胞。共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖3.鐵粒幼細(xì)胞性貧血的直方圖：圖形表現(xiàn)為曲線(qxin)峰左移，可呈“雙峰”形，峰底明顯變寬。外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積明顯大小不均，存在明顯的小紅細(xì)胞和大紅細(xì)胞或正常紅細(xì)胞兩個(gè)細(xì)胞群，呈“雙形性”改變，但以小細(xì)胞低色素最為突出。缺鐵性貧血經(jīng)鐵劑治療有效，在3周左右時(shí)也可出現(xiàn)類似的“雙峰”狀圖形，但峰底更寬。共四十頁異常(yc

11、hng)紅細(xì)胞直方圖4.葉酸或VitB12缺乏引起巨幼紅細(xì)胞貧血的直方圖:治療前的直方圖曲線(qxin)峰變低、右移，峰底明顯變寬，顯示明顯的大細(xì)胞不均一性，是葉酸或VitB12缺乏引起巨幼細(xì)胞性貧血的重要直方圖特征。外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積大小不均，橢圓形的大紅細(xì)胞明顯增多；而且部分中性粒細(xì)胞核分葉增多。共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖5.急性失血性貧血的直方圖：直方圖的曲線峰變低，其它(qt)特點(diǎn)與正常紅細(xì)胞直方圖一致。共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖共四十頁異常(ychng)紅細(xì)胞直方圖共四十頁電阻(

12、dinz)抗法血小板檢測原理血小板隨紅細(xì)胞一起在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測，由于血小板體積與紅細(xì)胞體積有明顯的差異，儀器設(shè)定了特定的閾值，將高于閾值者定于紅細(xì)胞，反之為血小板，檢測數(shù)據(jù)經(jīng)儀器內(nèi)部的計(jì)算機(jī)處理后分別給出血小板與紅細(xì)胞數(shù)目。血小板分別儲存于64個(gè)通道(tngdo)內(nèi)，直方圖范圍為230fl。不過，不同儀器的血小板直方圖范圍不一。MPV就是此平整曲線所含的群體算術(shù)平均體積，所以，MPV也就是PLT體積分布直方圖的產(chǎn)物。共四十頁電阻(dinz)抗法血小板計(jì)數(shù)原理共四十頁正常(zhngchng)血小板直方圖共四十頁各類血小板直方圖共四十頁異常(ychng)血小板直方圖1.巨大(jd)血小板增多的

13、血小板直方圖：與正常直方圖相比，圖形分布峰右移，特別是與橫坐標(biāo)的接近或重合點(diǎn)明顯右移，同時(shí)MPV明顯增高，有時(shí)儀器不顯示MPV值；有的儀器在35fl處可見一個(gè)小峰。血片上可見較多的大血小板。2.小血小板增多的血小板直方圖：與正常直方圖相比，圖形分布峰左移，特別是與橫坐標(biāo)的接近或重合點(diǎn)明顯左移，同時(shí)MPV值明顯減低。血片上可見較多的小血小板。共四十頁異常(ychng)血小板直方圖3.血小板聚集干擾的血小板直方圖：與正常直方圖相比(xin b)，圖形分布峰明顯右移，也不與橫坐標(biāo)重合；血小板計(jì)數(shù)值通常明顯減低，儀器一般也不顯示MPV值。血片上可見較多聚集的血小板。4.小紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片干擾的血小板直方圖：與正常直方圖相比，圖形分布峰右側(cè)明顯抬高上揚(yáng)，血小板計(jì)數(shù)值通常假性增高，儀器一般也不顯示MPV值。血片上可見較多的小紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片。共四十頁內(nèi)容摘要電阻抗法白細(xì)胞檢測原理。當(dāng)電流接通后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流，細(xì)胞懸液通過有固定直徑和厚度的小孔向小孔內(nèi)部流動，計(jì)數(shù)孔直徑一般100um，厚度為75um左右。因?yàn)樾】字車錆M了具有傳導(dǎo)性的