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文檔簡介
1、關于核苷酸和核酸第一張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月一、核酸的化學反應 1.脫氨基作用(脫氨,deamination) 次黃嘌呤5-甲基胞嘧啶黃嘌呤第二張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月2.脫氧核苷酸的水解 脫嘌呤第三張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月3.紫外線和一些化學因子、烷化劑對DNA的損傷第四張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月亞硝酸第五張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月烷化劑:乙基甲烷磺酸(EMS)第六張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月紫外線誘導胸腺嘧啶二聚體第七張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月4.與嵌合劑的反應第八張,PPT
2、共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第九張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月溴乙啶丫啶橙 放線菌素D 第十張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月二、DNA的酶法甲基化(methylation)甲基供體: S腺苷甲硫氨酸甲基受體:被修飾堿基(A、C多于G、T)堿基的甲基化修飾不是隨機的,而是限于一定的順序或DNA的某一區(qū)域,在甲基化酶的作用下進行,甲基化是可逆的。甲基化的意義:幫助細胞識別和區(qū)分自身DNA和外來DNA;調節(jié)基因表達;幫助DNA修復等。第十一張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第八節(jié) 核酸酶和DNA限制性內切酶第十二張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月一、核酸酶(
3、nuclease)能水解核酸的酶為核酸酶核酸酶都是磷酸二酯酶(phosphodiesterases)第十三張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月核酸酶的分類按底物專一性分類:核糖核酸酶(RNase)和脫氧核糖核酸酶(DNase)按作用方式分類:內切核酸酶和外切核酸酶內切核酸酶:從核酸的內部切割核酸鏈,產生核酸鏈片段。外切核酸酶:從核酸鏈的一端逐個切斷磷酸二酯鍵,釋放單核苷酸。按磷酸二酯鍵斷裂方式:3-核酸酶和5-核酸酶第十四張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第十五張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月核酸酶對其底物的作用具有特異性第十六張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月
4、第十七張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月二、限制性內切酶(restriction endonuclease) 限制性內切酶是從細菌中分離的一類專門識別和水解特定核苷酸序列的內切酶類。這類酶在原核生物體內,用于“防御”外來DNA的入侵,將外來DNA以獨特的方式切成無感染能力的片段,而自身不受損害(甲基化作用) 。第十八張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月1. 限制性內切酶的分類、 基因工程技術中常用型第十九張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月不需要ATP參加;不對DNA進行甲基化或其它方式修飾。專門識別和切割特定的核苷酸序列,這個序列一般含46 個核苷酸殘基,并具回文結構“落
5、鶴島上島落鶴,垂柳岸邊岸柳垂” 。 2. II型限制性內切酶 第二十張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月類酶識別序列特點回文結構palindrome第二十一張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月切口(kerf):粘端,平端第二十二張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十三張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十四張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月3.限制性內切酶的種類(約1000多種) 第二十五張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月Hin d 屬 系 株 序Haemophilus influenzae d株流感嗜血桿菌d株的第三種酶命名naming第一個字
6、母取自產生該酶的細菌屬(genus)名,用大寫;第二、第三個字母是該細菌的種(species)名,用小寫;第四個字母代表株(strain);用羅馬數字表示發(fā)現的先后次序(sequence)。第二十六張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月4.限制性內切酶在基因重組中的應用 第二十七張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十八張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十九張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月三、限制片段的長度和限制圖1. 限制片段的長度識別4個核苷酸序列的限制酶產生DNA片段的平均長度:256(44)識別6個核苷酸序列的限制酶產生DNA片段的平均長度:4096(46)第三十張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月2.制性內切酶圖譜 限制性圖譜是各種限制性內切酶切點在某一DNA分子或DNA片段上的排列,由于各酶切點之間的距離是以堿基對(kbp mbp)表示的,所以可計算出二切點間的絕對距離,因此限制
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