臨床化學(xué)檢驗(yàn)試劑

1、1 臨床化學(xué)檢驗(yàn)試劑2臨床化學(xué)試劑.臨床化學(xué)發(fā)展 臨床 意義試劑盒性能評(píng)價(jià)1臨床診斷試劑的現(xiàn)狀3 臨床生化試劑 試劑盒發(fā)展及現(xiàn)狀 方法學(xué)：化學(xué)法酶法免疫法物理性狀：液體型試劑（自配）凍干型試劑干(片)粉型試劑液體型試劑 組合方式：多劑型試劑單劑型試劑雙劑型（多劑型）試劑操作方式：手工多步操作離心式生化儀分立式（雙試劑功能）生化儀4生化試劑的臨床意義:醫(yī)院檢驗(yàn)科分布臨檢室微生物室生化室免疫室血液室血常規(guī)小便常規(guī)大便常規(guī)肝功能腎功能血脂心肌酶譜電解質(zhì)糖類腦脊液、體液常規(guī)肝炎類免疫項(xiàng)目腫瘤標(biāo)志物腎炎類心肌損傷標(biāo)志物性病類風(fēng)濕類急性時(shí)相蛋白培養(yǎng)鑒定藥敏骨髓涂片鑒別實(shí)驗(yàn)5臨床生物試劑測(cè)定物分 類 名 稱

2、 酶類-淀粉酶、-羥丁酸脫氫酶、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同功酶、堿性磷酸酶、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶 糖類 葡萄糖、果糖胺 脂類 膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白膽固醇、載脂蛋白A-1/B 6分 類 名 稱 肝功能 直接膽紅素、總膽紅素 蛋白質(zhì)及代謝物白蛋白、總蛋白、尿素、肌酐 無(wú)機(jī)元素類 鈣、氯、鎂、無(wú)機(jī)磷 臨床化學(xué)控制血清 續(xù)上表72 國(guó)內(nèi)臨床診斷試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展的前景（1）免疫診斷試劑將會(huì)逐漸取代臨床化學(xué)試劑，成為診斷試劑發(fā)展的主流。（2）診斷技術(shù)正在向兩極發(fā)展。一是高度集成、自動(dòng)化的儀器診斷，另一種是簡(jiǎn)單、快速便于普及的快速診斷。8

3、（4）產(chǎn)品更新應(yīng)用加快，由于遺傳工程、基因重組以及單克隆抗體等現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷應(yīng)用和發(fā)展，使這些精確的診斷試劑能迅速由研究階段進(jìn)入臨床階段，縮短了開(kāi)發(fā)時(shí)間。（3）檢驗(yàn)產(chǎn)品種類將快速擴(kuò)大。9 3 化學(xué)試劑等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)3.1 國(guó)產(chǎn)化學(xué)試劑 通用的化學(xué)試劑，共分為四個(gè)純度。市售化學(xué)試劑在瓶子的標(biāo)簽上用不同的符號(hào)和顏色標(biāo)明它的純度等級(jí)。試劑的純度不同，其適用范圍不同。見(jiàn)下表 。10 國(guó)產(chǎn)化學(xué)試劑的品質(zhì)規(guī)格級(jí)別 名稱符號(hào)色標(biāo) 說(shuō)明 一級(jí) 優(yōu)級(jí)純 GR 綠色純度高,適用于研究和配制標(biāo)準(zhǔn)液 二級(jí) 分析純AR紅色純度較高,適用于定量分析 三級(jí) 化學(xué)純CP藍(lán)色純度略低于二級(jí)試劑,用途與其相同四級(jí) 實(shí) 驗(yàn)試 劑LR

4、黃色質(zhì)量較粗,用于一般定性試驗(yàn) 113.2 國(guó)外生產(chǎn)化學(xué)試劑 國(guó)外化學(xué)試劑規(guī)格種類繁多，頗不一致，和國(guó)產(chǎn)試劑規(guī)格對(duì)照, 見(jiàn)表。等級(jí) 規(guī)格符號(hào) 相當(dāng)于國(guó)產(chǎn)試劑 規(guī)格 AR,GR,ACS,PA 一級(jí)品 CP,PUSS,LAB,Reinse 二級(jí)品 LR,EP,Pract,Rein 三級(jí)品 Pure 四級(jí)品 12 4 危險(xiǎn)、有害化學(xué)品 4.1 爆炸品 注意避免撞擊、摩擦、打火花和加熱 爆炸性物質(zhì)（E符號(hào)）134.2 氧化劑 能使易燃物質(zhì)燃燒或使存在的火燒的更旺，使得救火更難。 注意：保持遠(yuǎn)離易燃物質(zhì)氧化性物質(zhì)（O符號(hào)）144.3 極度易燃物質(zhì) 閃點(diǎn)在0OC以下的液體和沸點(diǎn)/開(kāi)始沸點(diǎn)最大值為35OC的

5、液體。 注意：避免同所有的火源接觸極易燃物質(zhì)（F符號(hào)）15（3）對(duì)濕氣敏感的物質(zhì)，同水接觸時(shí)易形成易燃燒氣體的化學(xué)試劑。 注意：避免接觸濕氣或水（2）各種氣體、氣體混合物（還有液氣體），在正常壓力下同氣體接觸有著火范圍。 注意：避免形成易燃?xì)怏w混合物，保持遠(yuǎn)離火源（1）自發(fā)易燃的物質(zhì)，在空氣中易著火的化學(xué)試劑。 注意：避免接觸空氣4.4 高度易燃物質(zhì) 易燃物質(zhì)（F符號(hào)）16（5）在火源短期作用后，很易著火的固體物質(zhì)。注意：避免同所有火源接觸（4）閃點(diǎn)低于21OC的液體。 注意：保持遠(yuǎn)離開(kāi)放火源、熱源和發(fā)生火花處174.5 很毒、有毒物質(zhì) 當(dāng)吸入、吞入或同皮膚接觸時(shí)對(duì)健康是很危險(xiǎn)的，甚至可導(dǎo)致死

6、亡。非重復(fù)、重復(fù)或長(zhǎng)期接觸這些物質(zhì)，可導(dǎo)致不可逆的損害。 注意：避免同人體接觸，如有不適，立即看醫(yī)生有毒物質(zhì)（T符號(hào)）和極高毒性物質(zhì)（T符號(hào)）18 吸入和食入或皮膚滲入這些物質(zhì)對(duì)人的健康是有害的。非重復(fù)、重復(fù)或長(zhǎng)期接觸這些物質(zhì)導(dǎo)致不可逆的損害。注意：避免同人體接觸，包括吸入蒸汽，如有不適，立即看醫(yī)生4.6 有害化學(xué)品 有害物質(zhì)（Xn符號(hào)）194.7 腐蝕性化學(xué)品 生活組織以及儀器同這些化學(xué)品接觸后會(huì)破壞。注意：不要吸入蒸汽，避免接觸皮膚、眼及衣服腐蝕性物質(zhì)（C符號(hào)）204.8 有刺激性化學(xué)品 注意：不要吸入蒸汽、避免同皮膚和眼接觸刺激性物質(zhì)（Xi符號(hào)）21 5 化學(xué)試劑的保管 化學(xué)實(shí)驗(yàn)所用藥品

7、種類多，有些對(duì)人有毒害作用，另一些易燃、易爆或有劇毒性的，藥品的管理要以安全、不變質(zhì)為原則?；瘜W(xué)試劑的保管應(yīng)分類保管。 5.1 一般試劑的保管 （1）試劑必須按固體、液體分類并歸類按需排列，無(wú)機(jī)物按單質(zhì)(金屬和非金屬)，氧化物(堿性氧化物、酸性氧化物和兩性氧化物)，堿，酸和鹽 進(jìn)行分類做好登記，貯存與陰涼、避光、通風(fēng)、干燥處。22（2）密封 （3）避光（4）陰涼5.2 危險(xiǎn)品的保管 凡是能發(fā)生燃燒、爆炸、中毒、灼燒等災(zāi)害的化學(xué)試劑都屬于化學(xué)危險(xiǎn)品。保存要嚴(yán)格遵守公安部門的使用規(guī)定。 23 貯存時(shí)應(yīng)放在遠(yuǎn)離火源、陰涼、通風(fēng)良好處，嚴(yán)密封固，還應(yīng)與強(qiáng)氧化劑分開(kāi)存放。對(duì)于易爆試劑可存放于冰箱中，貯存

8、室溫應(yīng)在30oC以下。 5.2.1 易燃和易爆試劑 5.2.2 腐蝕性試劑 在貯存和搬運(yùn)時(shí)應(yīng)避免撞擊或強(qiáng)烈震動(dòng)，否則會(huì)引起容器的破裂。最好選用耐腐蝕材料作架子。 245.2.3 劇毒試劑 凡生物試驗(yàn)半數(shù)致死量在50mg/Kg以下者均為劇毒藥品，如氰化物、三氧化二砷、氯化汞等少量進(jìn)入人體或接觸皮膚即可造成中毒甚至死亡。應(yīng)指定專人專柜加鎖保管，嚴(yán)格登記請(qǐng)領(lǐng)制度。256 標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)制備 標(biāo)準(zhǔn)參考物（標(biāo)準(zhǔn)品）的分級(jí) 三種方法和三個(gè)參考物質(zhì)的概念，在每一等級(jí)的測(cè)定方法與參考物質(zhì)間有對(duì)應(yīng)的關(guān)系。6.1 方法的分級(jí) 6.1.1 決定性方法 （definitive method） （1）定義：26 是指準(zhǔn)確

9、度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)詳細(xì)的研究，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，測(cè)定結(jié)果為“確定值”，與“真值”最接近。 （2）用途 只用于發(fā)展及評(píng)價(jià)參考方法和一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。國(guó)際上只有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行研究，不能作為常規(guī)測(cè)定。（3）主要方法 重量分析法、中子活化法、同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）276.1.2 參考方法（reference method） （1）定義 是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實(shí)的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，與重復(fù)測(cè)定的隨機(jī)誤差相比可以忽略不計(jì)，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性、直線性及較寬的分析范圍。 （2）用途 在條件優(yōu)越的實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)經(jīng)常使用，主要應(yīng)用于鑒定常規(guī)方法，

10、評(píng)價(jià)其誤差大小，干擾因素，并決定其是否可以被接受。它也用于鑒定二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品，為質(zhì)控血清定值，也可用于評(píng)價(jià)商品試劑盒等。28（3）主要方法 原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化學(xué)法，離子交換層析法等296.1.3 常規(guī)方法（routine method） 方法的性能指標(biāo)符合臨床或其他目的的需要，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶医?jīng)濟(jì)實(shí)用。其中有些方法準(zhǔn)確度已經(jīng)確定的方法。 常規(guī)方法在作出評(píng)價(jià)以后，經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可后可以作為推薦方法。用作服務(wù)性實(shí)驗(yàn)室的定量分析。30 臨床化學(xué)方法的關(guān)系圖 臨床生化部分項(xiàng)目的三級(jí)方法 決定性方法 參考方法 常規(guī)方法鉀 ID-MS 火焰光度法 離子選擇電極鈉 中子活化法 火焰光

11、度法 離子選擇電極總蛋白 凱氏定氮法 雙縮脲法肌酐 ID-MS 離子交換層析 苦味酸比色法葡萄糖 ID-MS 己糖激酶法 葡萄糖氧化酶法326.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分級(jí)6.2.1 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（原級(jí)參考物） （1）定義 是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的一種或多種理化性質(zhì)已充分了解，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的方法確定，所含雜質(zhì)也已定量，一般有權(quán)威機(jī)構(gòu)（如美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局，英國(guó)物理實(shí)驗(yàn)室等）提供，有證書。（2）用途 用于校正決定性方法，評(píng)價(jià)及校正參考方法以及為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品定值。33（3）分類國(guó)家確認(rèn)的參考物質(zhì)： 由國(guó)家確認(rèn)、其中成份含量在國(guó)家規(guī)定范圍以內(nèi)，并附有證書的參考物。如美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局（NB

12、S）的參考物質(zhì)屬此類。生物源性參考物質(zhì)： 通常此類參考物質(zhì)與測(cè)定標(biāo)本完全是同類，也就是用混合人血清將其中成份用決定性方法測(cè)定后進(jìn)行定值。34 另一種擬似測(cè)定標(biāo)本的生物源性參考物（其性質(zhì)與病人標(biāo)本很接近），其成份濃度必須用決定性方法或幾種不同類型的高準(zhǔn)確的方法進(jìn)行定值，已知干擾或可能干擾的物質(zhì)須有說(shuō)明。 生物源性參考物質(zhì)常用于評(píng)價(jià)方法的可靠程度或用它證實(shí)干擾物質(zhì)對(duì)參考方法或常規(guī)方法的偏差，以及了解決定性方法、參考方法和常規(guī)方法三種結(jié)果之間的相互關(guān)系。如定值的參考血清屬于此類。356.2.2 二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（次級(jí)參考物） （1）定義 包括用于常規(guī)分析的標(biāo)準(zhǔn)液。這類標(biāo)準(zhǔn)品可有實(shí)驗(yàn)室自己配制或?yàn)樯唐罚?/p>

13、的示值必須用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品和參考方法，并由訓(xùn)練有素、能熟練掌握參考方法的操作者確定。 （2）用途 主要用于常規(guī)方法的評(píng)價(jià)或?yàn)榭刂莆锒ㄖ岛统Ｒ?guī)測(cè)定的結(jié)果計(jì)算。 36（3）分類 純物質(zhì)（通常用水溶液或有機(jī)溶劑溶液）和生物源性介質(zhì)（如透析后血清）中含參考物質(zhì)的成份的制品。 純物質(zhì)本身就是第一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或具有第一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的物質(zhì)。 生物源性介質(zhì)配制的所含各種被測(cè)成份須經(jīng)參考方法定值。自制定值參考血清即屬此類。376.2.3 質(zhì)控物質(zhì) 是用生物源性介質(zhì)制成（如人或動(dòng)物血清），基本應(yīng)用于常規(guī)室內(nèi)或室間質(zhì)量控制。有凍干與液體兩種。6.2.4 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與測(cè)定方法的關(guān)系 見(jiàn)下頁(yè)38決定性方法 用途：評(píng)價(jià)參考方法及一

14、級(jí)參考物一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)用途：發(fā)展及評(píng)價(jià)參考方法，校正決定方法及參考方法，生產(chǎn)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)參考方法 用途：為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)定值、評(píng)價(jià)常規(guī)方法（準(zhǔn)確性、偏差、干擾因素）二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)用途：常規(guī)方法的工作標(biāo)準(zhǔn)及為質(zhì)控定值常規(guī)方法 用途：服務(wù)性實(shí)驗(yàn)室的定量分析質(zhì)控用途：質(zhì)量控制396.3 標(biāo)準(zhǔn)物應(yīng)具備的條件 6.3.1 必備的主要條件 純度高；定值準(zhǔn)確可靠；穩(wěn)定性好，在保管、使用有效期內(nèi)其示值誤差不超出證書的許可范圍；均一性好，任何一份分裝的小樣品都具備整個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性指標(biāo)。406.3.2 附加條件 摩爾質(zhì)量盡量大；具有符合使用目的的反應(yīng)特性；制造簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉，購(gòu)買方便；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的組成發(fā)生變化（吸潮）時(shí)，可采用重新

15、干燥（恒重）等措施是其復(fù)原。 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物是由美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局等有權(quán)威機(jī)構(gòu)提供，不屬于常規(guī)生產(chǎn)，只介紹常用臨床化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)液的生產(chǎn)。416.3.3 標(biāo)準(zhǔn)液配制 標(biāo)準(zhǔn)液屬于二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其示值的準(zhǔn)確性對(duì)檢驗(yàn)質(zhì)量有重大影響，必須在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)選擇、恒重方法程序、基質(zhì)（包括水）的質(zhì)量、最優(yōu)化的配方和制備工藝上都要嚴(yán)格要求 。6.3.4 一般注意事項(xiàng) （1）試劑規(guī)格要求 （2）對(duì)水的要求 （3）合理選用衡器和量器 42 固體試劑恒重后準(zhǔn)確稱量 液體試劑取量時(shí)選擇合適的量器準(zhǔn)確吸取要求的體積 試劑配制的溶劑一般為蒸餾水或去離子水，應(yīng)注意對(duì)蒸餾水的要求，若需其他溶劑則需注明清楚。 各類試劑分別溶解后按要求順序混合，最

16、后稀釋至刻度。 配制好的試劑應(yīng)在其容器上注明名稱、濃度以及配制時(shí)間。 注意事項(xiàng)：436.3.5 配制方法 方法：直接法與間接法 （1）直接法 用固體溶質(zhì)配制試劑 一般采用稱重法 用液體溶質(zhì)配制試劑 采用容量法 （2）間接法 對(duì)于易失恒重或含量不準(zhǔn)的液體試劑可采用間接配制法 44鉀鈉標(biāo)準(zhǔn)液的配置 81.83g干燥氯化鈉（基準(zhǔn)試劑）和2.982g氯化鉀，用水稀釋后，加入30.0ml分析純硝酸，再用水稀釋至10 000ml。以氯化鉀為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，用火焰比色法測(cè)定其濃度，要求鉀的濃度為4.0 0.1mmol/L,鈉的濃度為140 2mmol/L?？偟鞍讟?biāo)準(zhǔn)液 以人血清白蛋白為原料，其蛋白氮與非蛋白氮值比大

17、于200，用生理鹽水作溶劑，用濾膜進(jìn)行除菌過(guò)濾，以凱氏定氮法測(cè)定其含量。要求其含量為50.0 0.5g/L。45血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 血紅蛋白溶液提純 以正常的新鮮人紅細(xì)胞為原料，用氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞幾次（現(xiàn)用9g/L，后用12g/L氯化鈉溶液），離心除去上清液。加蒸餾水破碎紅細(xì)胞，在加入1/5體積的甲苯提取。最后用離心法去除甲苯，并用玻璃砂心漏斗過(guò)濾。 配制 將提取的血紅蛋白溶液用氯化鉀高鐵氰化鉀溶液稀釋251倍，該溶液的配方為：K3Fe(CN)30.607mmol/L(0.2g/L)，KCN0.768mol/L ( 0.05g/L) ，H2PO41.029mmol/L(0.14.g/L)，Tr

18、ixonX-100 1.0mmol/L,pH7.0-7.4。46檢定 純度檢定： 吸光度比值A(chǔ)540nm/A504nm=1.61 0.02 A700nm 0.002含量測(cè)定: 在1cm光徑比色杯中測(cè)定溶液在A540nm的吸光度A，樣品中血紅蛋白的含量Cmg/L=367.7 A540nm47葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 將分析純葡萄糖于80OC烘至恒重，易于干燥器中保存，然后稱取10 000g干燥葡萄糖，溶于2g/L的苯甲酸溶液至10 000ml，用葡萄糖氧化酶的方法測(cè)定其含量，要求為1.000.02mg/L。48說(shuō)明：（1）對(duì)多數(shù)原料配制時(shí)，需先烘干，烘干的溫度因物而已，多為105110OC，烘干的標(biāo)

19、準(zhǔn)是恒重，要置于干燥器冷卻后方能稱重，配制標(biāo)準(zhǔn)液所用的水質(zhì)要求較高；（2）從理論上講，作為臨床生化測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液最好采用與被測(cè)物質(zhì)相近的介質(zhì)-血清作為介質(zhì)，但因現(xiàn)在不能制備一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)血清，故一般還采用水溶液作介質(zhì)。從發(fā)展的方向看，水溶液樣品必將被標(biāo)準(zhǔn)血清所取代。496.4 酶校準(zhǔn)物6.4.1 酶校準(zhǔn)物的使用方法 使用酶校準(zhǔn)物的方法就是用公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物使一種或多種常規(guī)方法測(cè)定的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方法相同。也就是利用標(biāo)準(zhǔn)物作為載體，使測(cè)定結(jié)果數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)方法和常規(guī)方法見(jiàn)傳遞。這樣使用標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)物，就是可能統(tǒng)一測(cè)定結(jié)果。506.4.2 公認(rèn)酶校準(zhǔn)物的來(lái)源 有關(guān)公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物的來(lái)源目前已有幾個(gè)國(guó)家和國(guó)際組織發(fā)表了測(cè)定

20、酶催化活性的參考方法。歐洲標(biāo)準(zhǔn)局（BCR）和美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院（NIST）已經(jīng)研制出了某些酶的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物（有證參考物，certified referense material CRM或standard reference material SRM）。51 推出的部分酶有證參考物（CRM）名 稱 代 碼 來(lái)源類型 GGTCRM319豬腎ALPCRM371豬腎肝、骨、ALTCMR426豬心臟胞漿CKCRM299人胎盤LDCRM410人前列腺*保存條件為-20526.4.3 制備 溫度標(biāo)準(zhǔn)：以鎵的熔點(diǎn)（29.77OC）作為30OC標(biāo)準(zhǔn)。 測(cè)定方法：以國(guó)際臨床生化學(xué)會(huì)（IFCC）推薦法為準(zhǔn)。 制備

21、參考物：規(guī)定酶必須來(lái)源于人體或?qū)嶒?yàn)證明于人體的酶極為相似的動(dòng)物，并純化達(dá)到一定要求。介質(zhì)必須是血清，最好是人血清。 536.5 脂類標(biāo)準(zhǔn)品膽固醇標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的制備6.5.1 制備 1.血清采集：采集健康人血液（膽固醇水平適當(dāng)，即在5.2mmol/L），在無(wú)菌條件下分離血清，剔除溶血和乳靡血清。2.大量血清的混合： 6.5.2 定值 546.6 質(zhì)控血清的制備 質(zhì)量控制血清的名稱來(lái)自英文control serum 。6.6.1 基礎(chǔ)物的選擇 人血清最理想，但大量制備時(shí)血源有困難。國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的為豬血清。 要求：清澈、無(wú)肉眼可見(jiàn)的溶血；無(wú)肝炎和支原體的健康牛的血清，并測(cè)定布氏桿菌凝集試驗(yàn)為陰性。5

22、56.6.2 收集血清和分離血清 血清的收集 采血可用靜脈放血或屠宰動(dòng)物時(shí)接血兩種方法。 分離血清方法 （1）攪動(dòng)血液直到血塊出現(xiàn)，用手拉出凝塊，棄去纖維蛋白?？墒寡寮凹t細(xì)胞成游離狀態(tài)，離心沉淀時(shí)分離快；但注意不能過(guò)分?jǐn)噭?dòng)，要避免溶血可使血鉀含量升高。（2）待血液自然凝固后劃成小塊，使血清盡快自行析出。 56 收集血清置大型離心機(jī)沉淀兩次，要除凈紅細(xì)胞等有形成分。操作過(guò)程盡量采用無(wú)菌技術(shù)并避免溶血。 將血清置于-20 -50OC的低溫條件下冰凍24小時(shí)以上，取出在室溫中融化，增加凍融次數(shù)可減輕血清的濁度（7次）。 另一方法是化學(xué)沉淀法。576.6.3 加入及調(diào)節(jié)各成分 （1）水溶性成分的加入

23、： 無(wú)機(jī)鹽及水溶性有機(jī)化合物（尿素、肌酐、葡萄糖、膽紅素、尿酸等物質(zhì)）的加入、鈣和磷應(yīng)加入鹽類的濃溶液以調(diào)節(jié)其血清中相應(yīng)成分的含量。58上述各成分混入后，在混合血清內(nèi)加入血清內(nèi)適當(dāng)?shù)柠}酸液以恢復(fù)其原來(lái)的pH。（2）酶的加入 加入的酶純度對(duì)質(zhì)控血清并不必要，可自行制備，不需純化。 596.6.4 過(guò)濾（1）血清最好裝在瓶?jī)?nèi)，用氮?dú)饧訅?，通過(guò)濾板。注意血清比水溶液濾過(guò)慢；有些成分（如膽紅素）可吸附于濾板，在過(guò)濾時(shí)有輕度的丟失。（2）有的資料介紹經(jīng)調(diào)節(jié)分析成分、并經(jīng)校正濃度后，血清通過(guò)0.22濾器過(guò)濾，儲(chǔ)存于4OC。分裝前需再經(jīng)0.22濾器過(guò)濾一次。（3）如受條件限制，即可經(jīng)離心沉淀，用消毒棉花或紗

24、布過(guò)濾。 60 WHO材料介紹要進(jìn)行微生物檢定。將除菌后所得的血清，1滴加入巰基乙酸鹽培養(yǎng)基中，置37OC；1滴加入胰酶水解大豆肉湯中，置25OC，1滴于血液瓊脂平板上劃線，置37OC。均經(jīng)48小時(shí)孵育，檢查有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。 8.6.5 液體血清的保存 最好將血清置-20OC以下保存，不加防腐劑 。61 6.6.6 分裝 1、可用青霉素小空瓶作為容器，使用安瓿做容器的缺點(diǎn)示若凍干物附在安瓿尖上，易丟失影響可靠性。盛放凍干質(zhì)控血清的小瓶的容量應(yīng)比加入的血清量大2.5倍，即用25ml瓶盛10ml血清，最好是棕色瓶。小瓶以干熱180OC消毒3小時(shí)，橡膠塞用高壓鍋30分鐘滅菌。兩者均應(yīng)在滅菌后48小時(shí)內(nèi)

25、使用。 2、每批的全部血清要在分裝前充分混勻，保留一定量的血清為測(cè)定各成分的濃度用。62 3、凍干處理 分裝血清的加入量都要保證精密度良好，加量好可保證準(zhǔn)確度的水平。 凍干 加蓋及封口 6.6.7 貼瓶簽 636.6.8 儲(chǔ)存 1.液體血清應(yīng)保存在-20OC或更低的深凍冰箱暗處。2.冷凍干燥血清可保存于2OC，在-20OC可保證長(zhǎng)期穩(wěn)定。 6.6.9 鑒定 1.瓶間變異測(cè)定，規(guī)定從凍干機(jī)不同放置部位抽樣檢察。采用測(cè)定方法精度好的及成分易改變的2項(xiàng)以上的測(cè)定，如鈉、葡萄糖等。2.各成分的測(cè)定，防止有的成分在制備過(guò)程中變質(zhì)，成分改變到不合格的程度。643.無(wú)菌檢察。4.含水量測(cè)定。6.6.10 單

26、項(xiàng)質(zhì)控血清的制備 高脂質(zhì)控血清 656.6.11 對(duì)質(zhì)控血清的要求 （1）均勻一致，瓶間差異小，不大于均數(shù)的0.5%，一般不致明顯影響分析的精密度。（2）穩(wěn)定，在有效期內(nèi)控制成分應(yīng)穩(wěn)定不變或改變很小，不影響質(zhì)控的使用。（3）質(zhì)控成分應(yīng)有一個(gè)適合的濃度，最好有三種不同濃度（低值、正常值、病理性高值）的質(zhì)控血清，且高濃度、低濃度分別應(yīng)達(dá)到該項(xiàng)目分析范圍的上限和下限。用3種濃度的血清更容易發(fā)現(xiàn)分析范圍線性的變化，更準(zhǔn)確的判斷系統(tǒng)誤差的性質(zhì)和大小。如僅有一種濃度時(shí)，應(yīng)采用生理參考值上限偏高為宜。66（4）一種控制血清的“控制”項(xiàng)目應(yīng)包括常做的所有實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。67 數(shù)量上，至少2個(gè) 人血清基質(zhì)，分布均勻；

27、 無(wú)傳染性； 添加劑和調(diào)制物的數(shù)量少； 瓶間變異?。?若為凍干品復(fù)溶后穩(wěn)定； 到實(shí)驗(yàn)室后的有效期應(yīng)在1年以上。 操作：與病人標(biāo)本一起檢測(cè)。68 7. 臨床化學(xué)試劑盒 節(jié)約了試劑、時(shí)間和勞動(dòng)力，提高了實(shí)驗(yàn)室的工作效率;保證實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的可靠;節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 試劑盒： 兩種或兩種以上的臨床或普通實(shí)驗(yàn)室使用的材料（不包括復(fù)溶物質(zhì)），有時(shí)還帶有其他操作所需的組份組合成的包裝，并附有所明書。 優(yōu)點(diǎn): 69 使用方便即方便性、低干擾、質(zhì)量和結(jié)果的可靠性及成本低 存在一個(gè)平衡關(guān)系，研制試劑盒時(shí)就要找到一個(gè)盡可能好的平衡點(diǎn)。 試劑盒的效期要求一般在半年以上。 試劑盒的生產(chǎn)必須考慮到:70 配套試劑 校準(zhǔn)品試劑儀

28、器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)程序測(cè)試 得到可溯源性結(jié)果71按物理性狀分：固體型（片劑型或干粉型，凍干型）；液體型；干片型按組合方式： 單劑型；雙劑型；多劑型交叉組合分類：凍干單劑型；凍干雙劑型；液體單劑型；液體雙劑型 7.1 試劑盒分類72試劑種類介紹液體試劑干粉試劑單試劑t雙試劑(R1/R2)單試劑雙試劑(R1/R2)試劑737.1.1 液體型試劑和粉（片）劑型試劑 1. 液體型試劑 為主要?jiǎng)┬汀?yōu)點(diǎn)：試劑組分高度均一，瓶間差異小，測(cè)定重復(fù)性好和使用方便；無(wú)需加入任何輔助試劑及蒸餾水，避免了外源性水質(zhì)對(duì)試劑的影響，性能較穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確。缺點(diǎn)：液體型試劑（尤其是酶試劑）保存時(shí)間較短，不便于運(yùn)輸。74（1

29、）液體單試劑 何謂液體單試劑 是將某種生化檢測(cè)項(xiàng)目所用到的試劑科學(xué)的混合在一起，組成一種試劑。 特點(diǎn)： 應(yīng)用方便，操作簡(jiǎn)便快速，測(cè)定結(jié)果可靠；但抗干擾能力差給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)相當(dāng)大的分析誤差。75（2）液體雙試劑 何謂液體雙試劑 將某些生化檢測(cè)項(xiàng)目所用到的試劑，按用途科學(xué)地分成兩類，分別配成兩種試劑，通常第一試劑加入后可起到全部或部分消除某些內(nèi)源性干擾的作用，第二種試劑為啟動(dòng)被檢測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試劑，兩種試劑混合后才能共同完成被檢測(cè)項(xiàng)目的生化反應(yīng)，然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)結(jié)果。 76 特點(diǎn)： 具有單試劑的優(yōu)點(diǎn)同時(shí)增強(qiáng)了試劑抗干擾能力，扣除樣本空白的影響（R1多為緩沖液，R2多為啟動(dòng)試劑），去除內(nèi)源性干擾物

30、質(zhì)（R1含與內(nèi)源性干擾物質(zhì)反應(yīng)的物質(zhì)，R2為啟動(dòng)試劑）；組分高度均一；穩(wěn)定性良好；試劑更科學(xué)合理；提高了測(cè)定的準(zhǔn)確性；使用方便，不易造成浪費(fèi)；代表診斷試劑盒的主要發(fā)展方向。772. 粉（片）劑型試劑粉劑型試劑及片劑型試劑 將試劑的各組分用球磨技術(shù)粉碎成粉劑或混合后壓成片劑，使用前再加入指定的溶液復(fù)成液體試劑。試劑存在的問(wèn)題 ： （1）要使試劑各組分混合的非常均勻，技術(shù)難度很大； （2）分裝過(guò)程中的稱量誤差及復(fù)溶時(shí)加水量的準(zhǔn)確性 影響試劑的瓶間差； （3）水質(zhì)優(yōu)劣對(duì)試劑的穩(wěn)定性和測(cè)定的可靠性有相當(dāng)大的影響。78液體試劑與干粉試劑的比較797.1.2 其他類型的試劑盒 1. 快速反應(yīng)試劑盒 2.

31、一步試劑盒3. 多項(xiàng)同測(cè)組合試劑盒 4. 卡式試劑盒 5. 濃縮試劑盒 80801.快速反應(yīng)試劑盒 快速反應(yīng)試劑盒主要是為了適應(yīng)生化分析的技術(shù)進(jìn)步，縮短反應(yīng)時(shí)間，提高工作效率。 如:血液葡萄糖快速測(cè)定試劑盒。同一般葡萄糖氧化酶法試劑相比是明顯增加了葡萄糖氧化酶及過(guò)氧化物酶用量，更主要是增加了變構(gòu)酶，可使反應(yīng)加快，34分鐘后即生成最終顏色。 快速膽固醇試劑盒，樣品與試劑比例是1:100。37反應(yīng)2分鐘即可完成反應(yīng)。它加大膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶等效應(yīng)酶用量，從而使反應(yīng)加速。目前要求這種快速反應(yīng)的試劑用戶還不多，但它是一種發(fā)展趨勢(shì)。81812.一步法試劑盒 這是隨著方法學(xué)的改進(jìn)，特別是免疫技術(shù)的進(jìn)

32、步，利用特異性抗體參與反應(yīng)的新型試劑。 如高密度脂蛋白（HDL）測(cè)定。以往多采用超速離心法和沉淀法使HDL從其他脂蛋白中分離后再測(cè)定HDL中膽固醇，沉淀法操作繁瑣，必須預(yù)先處理才能用生化分析儀分析。 近年來(lái)采用抗低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白血清預(yù)先抑制LDL及VLDL，然后再測(cè)定HDL，這樣就減少沉淀預(yù)處理，直接測(cè)定出高密度膽固醇。類似的試劑盒還有肌酸激酶（CK）及其同工酶CK-MB的測(cè)定。8282 3.多項(xiàng)同測(cè)組合試劑盒 這類型試劑主要是用于三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)終點(diǎn)法、三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)連續(xù)監(jiān)測(cè)法和三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)終點(diǎn)速率法測(cè)定的試劑盒。 方法是在同一比色杯中，先后加入兩種試劑與檢品中的兩種被檢物發(fā)生反應(yīng)，在

33、各反應(yīng)達(dá)到平衡期時(shí)分別測(cè)定，整個(gè)測(cè)定過(guò)程進(jìn)行三次比色，測(cè)定兩個(gè)項(xiàng)目，稱為三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)終點(diǎn)法。 8383例:甘油三脂、膽固醇同時(shí)測(cè)定法第一試劑 Tris緩沖液，含膽固醇酯酶、ATP、MgCl2、過(guò)氧化物酶、磷酸甘油氧化酶、甘油激酶、脂肪酶、4-氨基安替吡啉、2-羥3.5-氯苯磺酸鈉、Triton-X等第二試劑 Tris緩沖液，含膽固醇氧化酶。當(dāng)血清或標(biāo)準(zhǔn)液與第一試劑混合后立即進(jìn)行第一次比色（510nm）得空白吸光度。37作用5分鐘后進(jìn)行第二次比色，為甘油三酯與酶試劑反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度，又是膽固醇測(cè)定的空白吸光度。然后加入第二試劑，37作用510分鐘，進(jìn)行第三次比色，為膽固醇與酶試劑反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度

34、。8484 甘油三酯濃度=A2（樣品）-AB（樣品）/A2（TG標(biāo)準(zhǔn)）-AB（TG標(biāo)準(zhǔn)）甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)的濃度 總膽固醇濃度=A3（樣品）-A2（樣品）/A3（TC標(biāo)準(zhǔn)）-A2（TC標(biāo)準(zhǔn)）膽固醇標(biāo)準(zhǔn)的濃度8585 4.卡式試劑盒 試劑首先裝入試劑瓶，瓶上充分使用編碼技術(shù)，而后根據(jù)編碼啟動(dòng)調(diào)配、使用及更換儲(chǔ)存。其特點(diǎn)是： 卡式試劑瓶上條碼令使用者可快捷準(zhǔn)確地輸入試劑數(shù)據(jù)，如測(cè)試數(shù)量、批號(hào)、有效期，保證正確識(shí)別試劑。 試劑裝載后能自動(dòng)調(diào)配，可消除潛在誤差，并節(jié)省操作時(shí)間。 持續(xù)不斷地監(jiān)察儀器上已裝載的試劑存量，并在供應(yīng)量不足時(shí)通知使用者。試劑裝載使用時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。 8686 所有卡式試劑盒大小劃一

35、，有利儲(chǔ)存。卡式試劑設(shè)計(jì)較獨(dú)特，可防止試劑蒸發(fā)及降解，能確保試劑裝載后的穩(wěn)定性更長(zhǎng)，從而節(jié)省成本。 標(biāo)簽根據(jù)測(cè)試類別以顏色編碼，便于使用者識(shí)別。8787 5.濃縮試劑盒 卡式試劑盒就是采用的濃縮試劑，使用時(shí)自動(dòng)完成稀釋，而后用于測(cè)定。 濃縮試劑便于工作、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、裝載等優(yōu)越性是很明顯的，濃縮試劑便于監(jiān)控、減少校正次數(shù)、提高工作質(zhì)量。 在濃縮試劑基礎(chǔ)上又組成雙試劑及多項(xiàng)同測(cè)組合試劑，又體現(xiàn)出它們所具有的特點(diǎn)及優(yōu)越性。 以后這種濃縮試劑及其各種組合，將成為一種時(shí)尚，成為人們樂(lè)于使用的新型試劑盒。887.2 臨床生化試劑盒的質(zhì)量控制 試劑盒性能指標(biāo)：試劑性能評(píng)價(jià) 靈敏度 穩(wěn)定性 穩(wěn)定性的指標(biāo)有三個(gè)

36、 （1）原包裝試劑的穩(wěn)定性 （2）復(fù)溶后試劑的穩(wěn)定性 （3）不同溫度下保存期 正常參考范圍幻燈片 8189試劑性能評(píng)價(jià)ABCDE5. 穩(wěn)定性4. 抗干擾能力1. 準(zhǔn)確度2. 精密度3. 線性范圍90 7.3 常用臨床化學(xué)試劑盒配置 所用的水均為二級(jí)交換水，化學(xué)試劑除特殊指定的外均為分析純，配制溫度為室溫，試劑在分裝前均需用2號(hào)沙芯漏斗過(guò)濾，除去不溶物質(zhì)。 總蛋白測(cè)定試劑 150g干燥CuSO4H2O溶于25 000ml水中，加450g酒石酸鉀鈉，250g碘化鈉，待完全溶解后，在加入6mol/L氫氧化鈉5000ml，用水稀釋至50 000ml,分裝于250ml塑料瓶中。91 膽固醇測(cè)定試劑盒 酶

37、液 將Na2HPO42H2O 231g及NaH2PO42H2O 265.56g配成pH6.7磷酸緩沖液，然后在10 000ml緩沖液中，加入40g 膽酸鈉，5g 4-氨基安替比林，62ml TritonX-100,1.5g NaN3, 77 500U過(guò)氧化物酶，1 860U膽固醇氧化酶，再加入5500ml乙二醇，混勻后分裝與150ml塑料瓶中。 稀釋液 用同樣的pH6.7磷酸緩沖液配制，在15 500ml中含重蒸苯酚，分裝每瓶150ml。927.4 試劑盒性能的評(píng)價(jià) 7.4.1說(shuō)明書審查 說(shuō)明書是用戶了解和正確使用試劑盒的指南，內(nèi)容包括： 試劑名稱；用途；測(cè)定原理和技術(shù)要求； 試劑盒內(nèi)的包裝內(nèi)容；適用儀器；標(biāo)本要求；測(cè)定步驟及注意事項(xiàng)；貯存的條件及有效期；性能特征，包括準(zhǔn)確度、精確度、特異性、受干擾的程度、線性范圍、參考范圍； 生產(chǎn)單位名稱、地址、郵編及電話。937.4.2 理學(xué)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià) 外包裝應(yīng)完整牢固，封口嚴(yán)密，標(biāo)簽清晰；有詳細(xì)的用戶說(shuō)明書，衛(wèi)生部批準(zhǔn)的文號(hào)， 生產(chǎn)日期，有效期和保存條件；粉劑型應(yīng)均勻無(wú)凝塊，不粘附瓶壁；液體型試劑應(yīng)無(wú)沉淀，無(wú)混濁，無(wú)滲漏；復(fù)溶后或液體試劑的pH應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。94 8.試劑級(jí)水 8.1 自來(lái)水中污染物8.2