免疫學(xué)臨床應(yīng)用課件

1、免疫學(xué)應(yīng)用 第一節(jié) 免疫學(xué)防治一、免疫預(yù)防特異性免疫獲得的方式有 自然免疫 主動免疫 被動免疫 主動免疫 人工免疫 被動免疫 過繼免疫 (一)人工主動免疫： 是給機(jī)體接種疫苗或類毒素等抗原物質(zhì)，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答而獲得免疫力的方法，也稱預(yù)防接種。 人工主動免疫常用的生物制劑 1、死疫苗 通過理化方法將病原微生物殺死而制成的制劑，又稱滅活疫苗。如霍亂、流腦、乙腦等疫苗。 2、活疫苗 用人工變異或直接從自然界篩選出來的毒力高度減弱或基本無毒的活病原微生物制成的試劑，又稱減毒活疫苗。如卡介苗、麻疹疫苗、風(fēng)疹疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、流行性腮腺炎疫苗等。 死疫苗和活疫苗的比較 項目 死疫苗 活疫苗

2、 制劑特點(diǎn) 死、強(qiáng)毒 活、弱毒或無毒 接種劑量 較大 較小 接種次數(shù) 23次 1次 接種后反應(yīng) 反應(yīng)較大 反應(yīng)較小 保存及有效期 易保存，1年 不易保存，4數(shù)周 免疫效果 較差，維持?jǐn)?shù)月 較好，維持35年 3、類毒素 將細(xì)菌外毒素經(jīng)0.30.4甲醛處理，使其毒性消失而保留免疫原性。 如破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素等。 百、白、破三聯(lián)疫苗4、新型疫苗（1）亞單位疫苗 （2）合成肽疫苗（3）結(jié)合疫苗 重組抗原疫苗（4）基因工程疫苗 重組載體疫苗 DNA疫苗 轉(zhuǎn)基因植物疫苗（二）人工被動免疫 是給機(jī)體輸入抗體，使機(jī)體獲得特異性免疫力?？闪⒓传@得，但免疫維持時間短，2-3周，多用于治療或緊急預(yù)防。 1、抗

3、毒素 是抗細(xì)菌外毒素的抗體。多為馬血清制劑。 具有雙重性2、人免疫球蛋白制劑 （1）人丙種球蛋白：從正常人血漿或健康產(chǎn)婦胎盤中提取制成。 （2）人特異性免疫球蛋白：來源于恢復(fù)期病人及含高價特異性抗體供血者血漿，或接受類毒素和疫苗免疫者的血漿。3、細(xì)胞因子與單克隆抗體（三）計劃免疫有計劃地進(jìn)行人群免疫接種，以提高人群免疫水平我國推薦的兒童免疫程序 年 齡 疫 苗 年 齡 疫 苗出生時卡介苗、乙肝疫苗8個月麻疹疫苗2個月三價脊髓灰質(zhì)炎疫苗11.5-2歲百白破43個月三價脊髓灰質(zhì)炎疫苗2，百白破14歲三價脊髓灰質(zhì)炎疫苗44個月三價脊髓灰質(zhì)炎疫苗3，百白破27歲卡介苗、麻疹疫苗、百白破三聯(lián)疫苗5個月百

4、白破312歲卡介苗（農(nóng)村） 二、免疫治療（一）治療性疫苗 1.微生物抗原疫苗 2.細(xì)胞疫苗 3.分子疫苗（二）抗體（三）細(xì)胞因子（四）過繼免疫治療和造血干細(xì)胞移植過繼免疫治療：是指給患者轉(zhuǎn)輸具有在體內(nèi)繼續(xù)擴(kuò)增效應(yīng)細(xì)胞的一種療法。 如：給免疫缺陷患者轉(zhuǎn)輸骨髓細(xì)胞 給腫瘤患者轉(zhuǎn)輸特異腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）或 非特異性的淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）造血干細(xì)胞移植：用患者自身或健康人的造血干細(xì)胞移植回輸給患者，讓干細(xì)胞在患者體內(nèi)定居、分化、增殖，使其恢復(fù)造血能力和免疫力。常用臍帶血（五）生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑和免疫抑制劑1、免疫增強(qiáng)劑（IPA）：是增強(qiáng)、促進(jìn)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的生物或非生物制劑。主要用

5、于惡性腫瘤、免疫缺陷病和傳染病的輔助治療。 免疫增強(qiáng)劑只對免疫功能低下者起作用免疫增強(qiáng)劑分類 分 類 舉 例細(xì)胞因子制劑IL-2、TNF、IFN微生物制劑卡介苗、短小棒狀桿菌、脂磷壁酸化學(xué)藥物左旋咪唑、西咪替丁多糖類制劑茯苓多糖、人參多糖2、免疫抑制劑：是一類抑制機(jī)體免疫功能的生物或非生物制劑。常見免疫抑制劑種類 分 類 舉 例抗生素環(huán)孢霉素A、FK-506單克隆抗體制劑抗TC及亞群、抗MHC、抗IL和IL受體激素腎上腺皮質(zhì)類固醇烷化劑環(huán)磷酰胺抗代謝藥硫唑嘌呤、5-氟尿嘧啶 第二節(jié) 免疫學(xué)診斷一、檢測抗原和抗體的體外實驗（一）體液免疫檢測（血清學(xué)反應(yīng)）1、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)：特異性可逆性比例性

6、階段性抗體過剩比例適當(dāng)抗原過?？乖贵w的比例與其形成免疫復(fù)合物大小的關(guān)系可逆性： 抗原抗體反應(yīng)的影響因素1、電解質(zhì)濃度（多用生理鹽水）2、酸堿度（pH: 68）3、溫度（37）常見的抗原和抗體檢測方法：根據(jù)抗原性質(zhì)、出現(xiàn)結(jié)果的現(xiàn)象、參與反應(yīng)成分的不同，可將抗原抗體反應(yīng)分為：凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)采用標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)等 凝集反應(yīng)顆粒性抗原(細(xì)菌、紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集團(tuán)塊，這一類反應(yīng)稱為凝集反應(yīng)(agglutination)。該類反應(yīng)可檢測到ug/ml水平的抗體。 1. 直接凝集反應(yīng)細(xì)菌或紅細(xì)胞等顆粒性抗原 抗體間接凝集和間接凝集抑制試驗沉淀反應(yīng)血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液等可溶性抗原與相應(yīng)

7、抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，此類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)(precipitation)。 沉淀反應(yīng)：單向瓊脂擴(kuò)散試驗用于Ig、C3等的定量測定沉淀反應(yīng)：雙向瓊脂擴(kuò)散試驗沉淀反應(yīng)對流免疫電泳-+補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)(immunolabelling technique) 是指用熒光素、放射性核素、酶、發(fā)光劑或電子致密物質(zhì)(膠體金、鐵蛋白)作為示蹤劑標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。 此類方法具有靈敏、特異、快速，能夠定性、定量甚至定位測定，結(jié)果易于觀察、適合自動化檢測等很多優(yōu)點(diǎn)。廣泛用于各種生物活性物質(zhì)的分析鑒定與定量檢測。免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫熒光技術(shù)免疫熒光直接法免疫熒光間接法免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫

8、酶技術(shù)1、包被抗體 洗2、加抗原 洗3、加酶標(biāo)抗體 洗4、加底物顯色1、包被抗原 洗2、加抗體 洗3、加酶標(biāo)抗球 蛋白 洗4、加底物顯色ELISA雙抗體夾心法ELISA間接法免疫標(biāo)記技術(shù)：放射免疫測定法（RIA） 放射免疫測定法（RIA）是將放射性核素分析的靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合的測定技術(shù)。具有靈敏、精確、特異性高、易規(guī)范化及自動化等優(yōu)點(diǎn)的一種先進(jìn)的免疫標(biāo)記技術(shù)。免疫標(biāo)記技術(shù)：金免疫技術(shù)（金標(biāo)法） 金免疫技術(shù)是一處以膠體金作為標(biāo)記物的免疫標(biāo)記技術(shù)。是目前應(yīng)用廣泛、簡便、快速的檢驗方法。二、免疫細(xì)胞及功能測定細(xì)胞免疫檢測T細(xì)胞總數(shù)測定（1）E花環(huán)試驗：正常情況下，外周血淋巴細(xì)胞中能形成

9、花環(huán)的細(xì)胞（即T細(xì)胞）約60%-80%。（2）熒光抗體染色 從外周血分離單個核細(xì)胞（PBM）后，用鼠抗人CD3的單克隆抗作第一抗體與PBM結(jié)合，再用熒光素（FITC）標(biāo)記的兔抗鼠IgG抗體作第二抗體進(jìn)行間接熒光染色。細(xì)胞免疫檢測T細(xì)胞亞群測定 用間接熒光法檢測CD4和CD8 T細(xì)胞 CD4/CD8正常比值為1.7-2.0左右。細(xì)胞免疫檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗-細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗B細(xì)胞的檢測B細(xì)胞數(shù)量的檢測(1)膜表面免疫球蛋白(SmIg)的檢測：SmIg是B細(xì)胞特有的表面標(biāo)志，因此是鑒定B細(xì)胞的可靠指標(biāo)。用抗SmIg抗體，借助直接免疫熒光法或免疫組織化學(xué)法進(jìn)行檢測。(2)間接免疫熒光法：應(yīng)用針對

10、B細(xì)胞表面抗原(CDl9、CD20、CD21、CD22等)的特異性單克隆抗體，以間接免疫熒光法對B細(xì)胞進(jìn)行鑒定和計數(shù)。B細(xì)胞功能測定B細(xì)胞增生試驗 原理與T細(xì)胞增生試驗相同； 但刺激物主要為美洲商陸(PWM)、富含SPA的金葡菌、細(xì)菌脂多糖等。體內(nèi)免疫學(xué)檢測（一）體液免疫檢測 1、I型超敏反應(yīng)皮膚試驗 用常見變應(yīng)原作皮內(nèi)注射或劃痕后，在20分鐘內(nèi)引起紅斑及丘疹。如超過1cm或無紅腫但注射處有癢感，或全身有不適反應(yīng)者均為陽性，反之為陰性。2、中和反應(yīng)皮膚試驗 將微量外毒素注射于受試者前臂屈側(cè)皮內(nèi)，24-48小時局部出現(xiàn)皮膚紅腫者為陽性反應(yīng)，表示無免疫力。陰性反應(yīng)為有免疫力。（二）細(xì)胞免疫檢測 以特異性抗原或有絲分裂原注入皮內(nèi)，剌激體內(nèi)致敏T細(xì)胞分化增殖，釋放淋巴因子，引起局部皮膚的IV型超敏反應(yīng)。 1、特異性抗原皮