離子色譜在藥品檢驗中應(yīng)用和展望

1、關(guān)于離子色譜在藥品檢驗中的應(yīng)用與展望第一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子型物質(zhì) : 在水溶液中電離，具有 + 或 電荷的元素陰離子：Cl-，NO2-，SO42-,CrO42-陽離子：Na+，NH4+，Ca2+，F(xiàn)e3+ ，Mg2+離子色譜 -利用色譜技術(shù)測定離子型物質(zhì)的方法 第二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月20世紀(jì)40年代 20世紀(jì)60年代末 Novel ion exchange chromatographic method using conductimetric detection -Hamish Small, et. al. Anal. Chem., 1975

2、, 47 (11), 1801-中國藥典2010年版二部附錄 J第三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月內(nèi) 容1.離子色譜的分離方式及機理2.流動相3.抑制器4.檢測器5.離子色譜在醫(yī)藥及藥檢領(lǐng)域的應(yīng)用第四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子排斥色譜（HPIEC）：無機弱酸和有機酸、醇、 醛、氨基酸和糖類的分離離子對色譜 (MPIC) ：分離金屬絡(luò)和物和表面活性陽離 子/陰離子高效離子交換色譜（HPIC）：親水性陰、陽離子的分離分離的方式第五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月Temporal course離子交換分離過程第七

3、張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月分離陰離子Column ： IonPac AG12A / AS12AEluent ： 2.7mM Na2CO3 0.3mM NaHCO3Flow rate： 1.2mL/minDetection： Conductivity (ASRS Recycle mode)0246810121416Retention time(min)08mSF-NO3-SO42-Cl-NO2-Br-HPO42-第八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月影響離子保留的因素離子色譜法中用分配系數(shù)（指在固定相和流動相中的濃度比）來描述離子的色譜保留行為，不同離子分配系數(shù)的差異是色

4、譜分離的基礎(chǔ)。影響因素有流動相流速、分離柱長度、柱溫、固定相性質(zhì)、流動相的種類與濃度、流動相的pH等。第九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子排斥色譜法的分離假說Donnan排斥作用吸 附 空 間 排 阻第十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 Donnan membrane （）（） 固定相 流動相離子排斥分離機理第十一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月Column ：IonPac ICE AS1Eluent ：0.4 mM Octonesulfonic acidFlow rate ：1.0 mL/minSuppressor ： AMMS-ICERegenerator

5、 liquid ：5mM TBAOH 50mM H3BO3Detection ： Conductivity離子排斥法分離有機酸 20100保留時間 (min)0S5123451. 甲酸2. 乙酸3. 丙酸4. 丁酸5. 戊酸第十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子對的分離機理1.生成離子對待測離子與離子對試劑生成中性“離子對”分布于 固定相與流動相之間，其分離類似傳統(tǒng)的反相分離2.動態(tài)離子交換離子對試劑的疏水部分吸附于固定相形成動 態(tài)的離子交換表面，其分離機理類似于離子交換。3.離子間相互作用除包括以上兩種分離機理和固定相表面雙 電層結(jié)構(gòu)的分離機理。第十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作

6、于2022年6月Mobile phase TBAOHACNH2OSampleY+ X- 固定相 TBA+OH- Y+ X- Y+ X- (TBA+X-) (TBA+X-) (TBA+X-) (TBA+X-) TBA+OH- ACN ACN ACN ACN ACN ACN ACN TBA+ OH- TBA+ OH- 疏水相 親水 相離子對分離機理 Y+ OH-第十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 Column : IonPac NS1、NG1 Eluent : 2 mM TBAOH, 24%48% CAN gradient in 10 min Flow rate : 1.0 mL/m

7、in Detection : Conductivity (suppressor type) （ASRS MPIC Mode） Regenerator : 10 mN H2SO41. Methanesulfonic acid 5.0 g/mL (ppm)2. 1-Propanesulfonic acid 8.63. 1-Butanesulfonic acid 8.74. 1-Hexanesulfonic acid 8.85. 1-Heptanesulfonic acid 8.96. 1-Octanesulfonic acid 8.97. 1-Decanesulfonic acid 9.10Ret

8、ention time (min)12168S0.0416234578.0反相離子對分離測定第十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子色譜固定相分離的核心抓住基礎(chǔ)注重積累關(guān)注發(fā)展第十六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子色譜流動相選擇的條件有一定的洗脫能力；化學(xué)、物理性質(zhì)穩(wěn)定；與被測離子有一定的性質(zhì)差異；對檢測器響應(yīng)值盡可能小第十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子色譜使用的水與試劑純度盡可能高高純水 ：電阻率 17M、0.22m 濾膜過濾：流動相脫氣（在線氦氣脫氣或超聲、減壓過濾離線脫氣） 冷凍方式脫氣？試劑 ：盡可能使用優(yōu)級純 ：配標(biāo)準(zhǔn)的試劑應(yīng)預(yù)先干燥第十八

9、張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月抑制型陰離子色譜的典型流動相四硼酸鈉 (Na2B4O7)硼酸 (H3BO3)氫氧根 (NaOH)碳酸氫根 (NaHCO3) 碳酸根 (Na2CO3)通常，作為流動相使用的化合物在水溶液中的pH大于8時為陰離子，pH在5-8之間為中性分子，其陰離子對固定相親合力.與待測離子相近，這類化合物可作陰離子分析的流動相。 流動相強度第十九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月陽離子交換流動相的選擇流動相有足夠的電離，以提供陽離子的脫離；多價陽離子有更大的洗脫能力；洗脫離子半徑越大，洗脫能力越強；與被測離子有足夠大的電導(dǎo)差異；對抑制電導(dǎo)法，抑制后流動相背景電導(dǎo)

10、足夠小流動相的背景較小較理想；酸或?qū)?yīng)的弱堿對于有機胺類，加入有機改進劑，會減少保留時間并且改善峰形第二十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月陽離子交換所用的流動相鹽酸硝酸硫酸甲磺酸吡啶2,6二羧酸第二十一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月離子排斥色譜常用流動相主要作用:改變?nèi)芤旱膒H值,控制有機酸的離解最簡單的是去離子水，對有機酸的分析，常用礦物酸，如 HCl，H2SO4，HNO3等。Ag+型陽離子交換劑作抑制器填料: HCl若用直接UV檢測: H2SO4第二十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月混合流動相流動相中添加有機溶劑（疏水性離子的吸附、分配）強流動相弱流動相（

11、淋洗強度的準(zhǔn)確調(diào)節(jié)）流動相中有目的地添加特殊試劑（如：酒石酸冠醚，用于鉀鈉分離）調(diào)節(jié)流動相強度和極性第二十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月色譜柱、流動相的溫度流動相的濃度與組成流動相的流速流動相中的雜質(zhì)影響色譜分析的各種條件第二十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 一價離子 快速洗脫 二價離子 較慢洗脫 溫度增加02468101214202530354045Temp.）Retention time (min)F-Cl-NO2-Br-NO3-HPO42-SO42-色譜柱、流動相的溫度第二十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月流動相濃度 vs. 保留時間0481216

12、208mM9mM10mM11mM12mM13mM濃度（）Retention time (min)Na+NH4+K+Mg2+Ca2+第二十六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月流動相的組成 vs. 保留時間04812162000.110.220.33Comp. ratio (NaHCO3/Na2CO3)Retention time (min)F-Cl-NO2-Br-NO3-HPO42-SO42-第二十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月100S0% ACN20% ACN50% ACN12345671234567010Retention time (min)12,3456710100

13、0SS1.F-2.Cl-3.NO2-4.Br-5.NO3-6.HPO42-7.SO42-流動相中有機溶劑的影響Ex AS4A-SC column第二十八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月流動相的流速 VS.面積0200040006000800010000120000.511.52Flow rate（mL/min）AreaF-Cl-NO2-Br-NO3-HPO42-SO42-流速增加各組份的峰面積減少第二十九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月流動相中雜質(zhì)的影響正常流動相流動相被Cl 沾污 -1 5 uSCl - : 0.5g/ml背景電導(dǎo)：13S0.005.0010.00 -4

14、2 uSRetention time (min)背景電導(dǎo)：56S第三十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月流動相 泵色譜柱檢測器 泵液分離 檢測 記錄F-NO3-SO42-Cl-NO2-Br-HPO42-進樣閥抑制器檢測池進樣離子色譜的基本流程圖第三十一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月廢液NaFNaClNaNO3Na2HPO4Na2SO4Back Ground： Na2CO3 / NaHCO3(700S)Retention timeConductivityHFHClHNO3H3PO4H2SO4Retention timeBack Ground： H2CO3 (15S)Condu

15、ctivity抑制器的作用流動相四元梯度泵保護柱離子色譜柱抑制器電導(dǎo)檢測器第三十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 安裝在電導(dǎo)池之前 提高待測離子的電導(dǎo)率： 提高靈敏度Na+,Cl-H+,Cl- 降低背景電導(dǎo) (流動相) : 減少噪音Na+,HCO3-H2CO3Na+,OH-H2O抑制器第三十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月檢測器檢測方法原理應(yīng)用范圍電導(dǎo)法電導(dǎo)陰、陽離子和有機酸安培法直流安培檢測器測量電活性分子在工作電極表面氧化或還原反應(yīng)時所產(chǎn)生電流變化的檢測器碘離子、亞硫酸根、氰化物、硫化物、酚類、兒茶酚胺類積分安培檢測器伯胺、仲胺、叔胺、硫化物、硫醇、氨基酸脈沖安培檢

16、測器伯胺、仲胺、叔胺、醇、乙二醇、醛、糖類紫外/可見光檢測紫外/可見光吸收亞硝酸根離子、硝酸根離子及其他具有強紫外吸收成分的測定，柱后衍生常用于分離分析過渡金屬離子和鑭系金屬等熒光（結(jié)合柱后衍生）激發(fā)和發(fā)射銨、氨基酸第三十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月樣品處理過濾樣品中除去顆粒物用0.45m 或0.22m 濾膜用高純水沖洗濾膜 ，以減少沾污稀釋待測物濃度較高時，應(yīng)預(yù)先稀釋.降低干擾物的濃度.去除干擾物預(yù)處理柱，超濾固相萃取液相萃取離心鹽析在線柱處理第三十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月在藥檢領(lǐng)域的應(yīng)用中國藥典2010年版新增品種糖類分析氨基酸分析第三十六張，PPT共五

17、十四頁，創(chuàng)作于2022年6月新增品種帕米磷酸二鈉氯膦酸二鈉第三十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月帕米磷酸二鈉Pamidronate Disodium(Pamidronate Disodium Pentahydrate)第三十八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月帕米磷酸二鈉中國藥典2010年版USP32(原料和注射用)BP2008(原料)EP6.0(原料)有關(guān)物質(zhì)無高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.0188%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5為流動相,折光檢測器高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.02%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH

18、值至3.5為流動相,折光檢測器高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.02%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5為流動相,折光檢測器含量離子色譜法陰離子交換色譜柱，以3mmol/L草酸為流動相，流速1.2ml/min,電導(dǎo)檢測器高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.0188%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5為流動相,折光檢測器電位滴定法電位滴定法第三十九張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月氯膦酸二鈉 Clodronate Disodium(Clodronate Disodium Tetrahydrate)第四十張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022

19、年6月氯膦酸二鈉WS1-（X-061）2002Z中國藥典2010年版EP (原料)有關(guān)物質(zhì)無離子色譜法陰離子交換色譜柱,以水為流動相A,以0.1mol/L氫氧化鉀溶液為流動相B,梯度洗脫電導(dǎo)檢測器離子色譜法陰離子交換色譜柱,以0.21g/L氫氧化鈉溶液為流動相A,以4.2g/L氫氧化鈉溶液為流動相B,梯度洗脫電導(dǎo)檢測器含量電位滴定法離子色譜法陰離子交換色譜柱，以45mmol/L氫氧化鉀為流動相，流速1.2ml/min,抑制型電導(dǎo)檢測器電位滴定法第四十一張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月糖類分析的原理在強堿溶液中呈離子化狀態(tài)糖具有電化學(xué)活性第四十二張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6

20、月Rocklin R D, Pohl C A.J Liquid Chromatoger 1987, 388:46 第四十三張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月六種單糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子色譜圖1、鼠李糖2、阿拉伯糖3、半乳糖4、葡萄糖5、木糖6、果糖第四十四張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月氨基酸分析1樣品不需衍生化處理，可直接分析；2靈敏度高，最小檢測濃度可達ppb級（g/L）。常見的氨基酸如下： 丙胺酸、精氨酸、天冬酰胺酸、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、甘氨酸、異亮氨酸、亮氨基酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、頡氨酸、羥基賴氨酸

21、、羥基脯氨酸、正亮氨酸、磺基丙氨酸、胱氨酸、甘氨酰基。第四十五張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月氨基酸兩性分子陰離子形式陽離子形式氨基酸的分子結(jié)構(gòu)第四十六張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月氨基酸分析的原理 氨基酸具有兩性離子結(jié)構(gòu)，在酸性介質(zhì)中，以氨基陽離子狀態(tài)存在；在堿性介質(zhì)中，以羧基陰離子狀態(tài)存在，這也是氨基酸分離分析方法的基礎(chǔ)。 在pH 12-13，氨基酸與陰離子交換樹脂之間的靜電吸引的大小次序是酸性氨基酸中性氨基酸堿性氨基酸,因此氨基酸的洗脫順序大體是堿性氨基酸,中性氨基酸和酸性氨基酸。第四十七張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月An Integrated Ampe

22、rometry Waveform for the Direct, Sensitive Detection of Amino Acids and Amino Sugars Following Anion-Exchange Chromatography Clarke A P, Jandik P, Rocklin R D, et al. Anal Chem. 1999,71:2774 Analyzing mixtures of amino acids and carbohydrates using bi-modal integrated amperometric detection Jandik P, Clarke A P, Rocklin R D, et al. J Chrom. B. 1999,732:193第四十八張，PPT共五十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 色譜條件如下： 分離柱：AminoPac PA10 (2mm250mm) 流動相:0.25mol/L NaOH，1.0mol/L NaAc 流 速：0.25mL/min 進樣體積：10L 溫 度：30 檢測方式:積分脈沖