Agilent1260高效液相色譜儀確認(rèn)方案

1、南京健友生化制藥股份有限公司NanjingKing-friendBiochemicalPharmaceuticalCo.Ltd安捷倫1260高效液相色譜儀確認(rèn)方案VerificationProtocolfortheAgilent1260HPLC人員姓名部門簽名/日期起草人審核人審核人審核人批準(zhǔn)人TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark61.目的32.確認(rèn)范圍3 HYPERLINK l bookmark83.背景3 HYPERLINK l bookmark104.職責(zé)3 HYPERLINK l bookmark125.預(yù)確認(rèn)36.運(yùn)行確認(rèn)47.性能確認(rèn)48.偏差與變更

2、109.再確認(rèn)周期10 HYPERLINK l bookmark2010.參考文獻(xiàn)10 HYPERLINK l bookmark2211.歷史10 HYPERLINK l bookmark2412.附錄101.目的通過建立Agilent1260HPLC的確認(rèn)方案，以運(yùn)行確認(rèn)主要檢查Agilent1260HPLC各單元的性能及整機(jī)運(yùn)行是否達(dá)到供貨單位設(shè)計(jì)要求；性能確認(rèn)主要檢查Agilent1260HPLC四元泵、進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測器的性能符合設(shè)計(jì)要求，保證儀器在后續(xù)運(yùn)行檢測的準(zhǔn)確性。確認(rèn)范圍本方案適用于位于制劑廠區(qū)質(zhì)量管理部三樓儀器室固定資產(chǎn)編號為F02-QC00014的Agilent1260

3、型高效液相液譜儀的確認(rèn)。背景可變波長檢測器(VWD)聯(lián)用，主要用于實(shí)驗(yàn)室日常檢測。與示差折光檢測器(RID)聯(lián)用，主要用于依諾肝素鈉原料藥及注射液等分子量及分子量分布的檢測。4.職責(zé)確認(rèn)程序人員責(zé)任準(zhǔn)備/執(zhí)行設(shè)備確認(rèn)小組人員起草確認(rèn)方案、確認(rèn)報告，完成設(shè)備的確認(rèn)。審核QC審核確認(rèn)方案、確認(rèn)報告。工程部審核確認(rèn)方案、確認(rèn)報告。QA審核確認(rèn)方案、確認(rèn)報告。批準(zhǔn)質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)確認(rèn)方案和報告。5.預(yù)確認(rèn)參與測試人員培訓(xùn)確認(rèn)根據(jù)確認(rèn)方案內(nèi)容涉及的文件、儀器、人員的情況，以檢查參與確認(rèn)方案的人員是否都參加過相關(guān)文件、儀器及本方案的培訓(xùn)，記錄培訓(xùn)號和相關(guān)的培訓(xùn)內(nèi)容于附錄1“測試人員培訓(xùn)記錄”中。接受標(biāo)準(zhǔn)：參

4、與儀器確認(rèn)的人員均應(yīng)參加過方案涉及的文件、儀器、方案的培訓(xùn)。測試用試劑、試液確認(rèn)檢查確認(rèn)中使用到的標(biāo)準(zhǔn)品、試劑、計(jì)量容器信息，可用于儀器確認(rèn)。檢查內(nèi)容包括如下：標(biāo)準(zhǔn)品：名稱、規(guī)格、批號、含量、來源等信息。（自制標(biāo)準(zhǔn)品還應(yīng)包括復(fù)標(biāo)日期。）試劑：名稱、規(guī)格、批號、有效期、生產(chǎn)廠家等信息。以上確認(rèn)信息應(yīng)詳細(xì)記錄于附錄2“測試用試劑液確認(rèn)”。接受標(biāo)準(zhǔn)：所有使用的物料應(yīng)在有效期內(nèi)或可用狀態(tài)。測試用儀器、儀表確認(rèn)檢查確認(rèn)中使用到的儀器信息，可用于儀器確認(rèn)，記錄儀器的名稱、編號、有效期等信息于附錄3“測試用儀器、儀表確認(rèn)”。接受標(biāo)準(zhǔn)：所有使用到的儀器，如需校驗(yàn)或者計(jì)量的，均有在校驗(yàn)或者計(jì)量的有效期內(nèi)。5.4

5、.文件檢查確認(rèn)核查待確認(rèn)的儀器具有相關(guān)的操作文件，IQ/OQ確認(rèn)前應(yīng)至少具備使用說明書，PQ確認(rèn)前應(yīng)至少具備SOP草案，并將其填寫在附錄4“待確認(rèn)儀器相關(guān)文件檢查”。6.運(yùn)行確認(rèn)模塊接受標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)連接正常，初始化自檢通過四元泵連接正常，初始化自檢通過，流動相可流動自動進(jìn)樣器連接正常，初始化自檢通過柱溫箱連接正常，初始化自檢通過VWD檢測器連接正常，初始化自檢通過RID檢測器連接正常，初始化自檢通過以上確認(rèn)信息應(yīng)詳細(xì)記錄于附錄5“Agilent1260HPLC運(yùn)行確認(rèn)”。7.性能確認(rèn)此次性能確認(rèn)包括如下確認(rèn)模塊：四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、VWD檢測器、RID檢測器；測試項(xiàng)目包括：流速準(zhǔn)確度/精

6、密度、梯度混合準(zhǔn)確性和波動、進(jìn)樣精密度、進(jìn)樣殘留、溫度準(zhǔn)確性、響應(yīng)值線性（VWD）、波長準(zhǔn)確度（VWD）、基線噪音（VWD）、基線漂移（VWD）、基線噪音（RID）、基線漂移（RID）。模塊測試項(xiàng)目測試標(biāo)準(zhǔn)四元泵流速準(zhǔn)確度/精密度準(zhǔn)確度：5%,RSDS0.50%梯度混合準(zhǔn)確性和波動準(zhǔn)確度：2%，混合波動0.2%自動進(jìn)樣器進(jìn)樣精密度RSDS1.0%進(jìn)樣殘留第1針空白中尼泊金丙酯峰面積與空白后進(jìn)樣的對照溶液b中尼泊金丙酯峰面積的10倍的比值不超過0.5%；對照溶液c中尼泊金丙酯峰面積與空白后進(jìn)樣的對照溶液b中尼泊金丙酯峰面積的比值在0.91.1%之間。柱溫箱溫度準(zhǔn)確性2CVWD檢測器響應(yīng)值線性左0

7、.999波長準(zhǔn)確度2nm基線噪音5X10-4AU基線漂移5X10-3AU/30minRID檢測器基線噪聲2.5x10-9RIU基線漂移V200 x10-9RIU/h7.1四元泵性能確認(rèn)7.1.1流速準(zhǔn)確度/精密度確認(rèn)在儀器控制界面分別設(shè)定流速為1.00mL/min,0.5mL/min,以超純水為流動相，不安裝色譜柱。于廢液出口用潔凈的10ml容量瓶收集，用秒表開始計(jì)時，到容量瓶裝滿至刻度停止，記錄所用的時間。重復(fù)測量5次，結(jié)果記錄于附錄6“Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-流速準(zhǔn)確度/精密度”。由超純水體積與時間的比值計(jì)算得測量流速，準(zhǔn)確度計(jì)算公式為：|平均流速-設(shè)定流速|(zhì)準(zhǔn)確度=x10

8、0%設(shè)定流速接受標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算所得結(jié)果準(zhǔn)確度應(yīng)在士5%，RSD應(yīng)0.50%o7.1.2梯度混合準(zhǔn)確性和波動確認(rèn)在儀器控制界面設(shè)定流速為1.00mL/min，以超純水為流動相A，0.5%丙酮為流動相B，不安裝色譜柱，檢測波長為265nm程序梯度設(shè)置如下表，分別對A-B，A-C，B-D通道進(jìn)行梯度洗脫：時間(min)流動相A的比例（）流動相B的比例（）010000.1901010901010.1505020505020.1109030109030.1010040010040.11000測試前，先用流動相A平衡系統(tǒng)至少10分鐘，然后按上述方法和梯度設(shè)置運(yùn)行，記錄色譜圖。以程序開始B比例為0%時的值為基線

9、值，手動測量出B占整個混合梯度段的10%、50%、90%、100%時對應(yīng)的高度h（各梯度開始時的高度），計(jì)算時以B占100%時的高度為H。結(jié)果記錄于附錄7“Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-梯度混合準(zhǔn)確性和波動”。計(jì)算公式：式中N：B占50%時梯度時的噪音值，在梯度內(nèi)選1min計(jì)算;h50：B占50%時的高度。接受標(biāo)準(zhǔn)：計(jì)算所得結(jié)果準(zhǔn)確度應(yīng)在2%,混合波動應(yīng)0.2%07.2自動進(jìn)樣器性能確認(rèn)7.2.1進(jìn)樣精密度和殘留確認(rèn)流動相配制：色譜級甲醇與超純水按體積比6:4混勻，即得60%的甲醇水溶液。樣品溶液配制過程：對照溶液a：稱取15mg尼泊金丙酯溶于100.00mL流動相中；對照溶液b：吸

10、取1.0mL對照溶液a于流動相中并定容至10.00mL；對照溶液c：吸取1.0mL對照溶液b于流動相中并定容至100.00mL。結(jié)果記錄于附錄8“Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-進(jìn)樣精密度和殘留”。儀器設(shè)定條件及進(jìn)樣順序見下表：條件流速1.00mL/min流動相甲醇：水=60：40色譜柱C-8波長254nm進(jìn)樣體積20pL進(jìn)樣順序進(jìn)樣順序進(jìn)樣次數(shù)對照溶液b6對照溶液a1空白（流動相）1對照溶液b1空白（流動相）1對照溶液C1接受標(biāo)準(zhǔn)：進(jìn)樣精密度：對照溶液b色譜圖中所有峰的峰面積，RSD應(yīng)1.0%0進(jìn)樣殘留：第1針空白中尼泊金丙酯峰面積與空白后進(jìn)樣的對照溶液b中尼泊金丙酯峰面積的10倍的

11、比值不超過0.5%；對照溶液c中尼泊金丙酯峰面積與空白后進(jìn)樣的對照溶液b中尼泊金丙酯峰面積的比值在0.91.1%之間。7.3柱溫箱性能確認(rèn)柱溫箱溫度準(zhǔn)確性確認(rèn)設(shè)定柱溫箱的溫度分別為20C、30C、40C、50C。等待約30min平衡系統(tǒng)，將校正過的多點(diǎn)巡回檢測儀（或者校正過的溫度計(jì)）放入柱溫箱，等待10min后，每隔一分鐘記錄一次柱溫箱內(nèi)左側(cè)、右側(cè)的溫度，連續(xù)記錄10次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于9Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-柱溫箱溫度準(zhǔn)確性”。接受標(biāo)準(zhǔn)：平均值與設(shè)定值之差應(yīng)在士2C。7.4VWD檢測器性能確認(rèn)響應(yīng)值線性確認(rèn)（VWD）咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法：標(biāo)準(zhǔn)溶液5（50.0口g/mL）：稱

12、取9.0mg至11.0mg咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品，用色譜級甲醇稀釋至200.0mL，混勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液4（25.0口g/mL）：取5.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液5,用色譜級甲醇稀釋至10.00mL,混勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液3（5.0口g/mL）:取1.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液5,用色譜級甲醇稀釋至10.00mL，混勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液2（1.0口g/mL）:取2.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液3,用色譜級甲醇稀釋至10.00mL，混勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液1（0.5口g/mL）：取1.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液3,用色譜級甲醇稀釋至10.00mL,混勻。儀器設(shè)定及進(jìn)樣順序見下表：條件流速1.00mL/min流動相甲醇色譜柱C-18柱溫箱40弋采集時間1min波長273nm進(jìn)樣體積20p

13、L分析時間20min進(jìn)樣順序進(jìn)樣順序次數(shù)空白（甲醇）2標(biāo)準(zhǔn)11標(biāo)準(zhǔn)21標(biāo)準(zhǔn)31標(biāo)準(zhǔn)41標(biāo)準(zhǔn)51以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積作縱坐標(biāo)，建立線性回歸曲線，計(jì)算r2值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于附錄10“Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-響應(yīng)值線性（VWD）”。接受標(biāo)準(zhǔn)：r2應(yīng)大于等于0.999。注：由于此檢測中要注入不同濃度，因此也包括了自動進(jìn)樣器樣品瓶位置正確性的確認(rèn)。7.4.2波長準(zhǔn)確性確認(rèn)（VWD）在儀器控制界面設(shè)定流速為1.00mL/min,柱溫箱溫度設(shè)為40C,超純水為流動相，進(jìn)樣體積為20pL，進(jìn)樣時間為1min,按照附錄11“Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-波長準(zhǔn)確性”設(shè)置波長，每次增加

14、1nm,依次進(jìn)25pg/mL的咖啡因溶液（具體配制見7.4.1響應(yīng)值線性確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)溶液4）,記錄各個波長處的峰面積，分別記錄波長為197nm213nm之間峰面積最大處的波長、237nm253nm之間峰面積最小處的波長、265nm281nm之間峰面積最大處的波長，實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于附錄11“Agilent1200HPLC性能確認(rèn)-波長準(zhǔn)確性（VWD）”。接受標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)波長分別為205.0nm，245.0nm,273.0nm，分別計(jì)算波長偏差。波長偏差應(yīng)在2nm。7.4.3基線噪音與基線漂移確認(rèn)（VWD）選用C18色譜柱，在儀器控制界面設(shè)定流速為1.00mL/min，100%甲醇為流動相，波長設(shè)定為25

15、4nm，檢測靈敏度調(diào)到最靈敏檔。開機(jī)預(yù)熱，待儀器穩(wěn)定后記錄基線30min，選取基線中噪聲最大峰-峰高對應(yīng)的信號值，按公式計(jì)算基線噪聲，用檢測器自身的物理量（AU）作單位表示?；€漂移用30min內(nèi)基線偏移起始點(diǎn)最大信號值（AU/30min）表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于附錄12“Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-基線噪音與基線漂移（VWD）”計(jì)算公式：Nd=KB式中Nd:檢測器基線噪聲；K：衰減倍數(shù)；B：測得基線峰-峰高對應(yīng)的信號值，AU。接受標(biāo)準(zhǔn)：噪音應(yīng)S5X10-4AU,漂移應(yīng)5X10-3AU/30mino7.5RID檢測器性能確認(rèn)7.5.1基線噪音與基線漂移確認(rèn)（RID）選用C18色譜柱，在

16、儀器控制界面設(shè)定流速為1.00mL/min，100%超純水為流動相，將儀器各部分連接好（檢測器接10mv輸出口），接通電源。量程范圍選擇0.01x10-6RIU,工作站放大倍數(shù)為5。啟動泵，待基線穩(wěn)定后記錄基線60min。根據(jù)檢測器衰減的倍數(shù)和測得的基線峰高對應(yīng)的記錄儀標(biāo)度，按下式計(jì)算基線噪聲和基線漂移。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于附錄13“Agilent1260HPLC性能確認(rèn)-基線噪音與基線漂移（RID）”基線噪聲=AX0.01X10-610X5基線漂移=BX0.01X10-610X5式中：10檢測器輸出電壓為10mv；5工作站放大倍數(shù)；0.01x10-6一為設(shè)置量程，RIU；A單一基線波段基線峰高值的

17、變化，mvB基線在60min內(nèi)偏離原點(diǎn)的值，mv/h。接受標(biāo)準(zhǔn)：基線噪聲2.5x10-9RIU,基線漂移V200 x10-9RIU/h。偏差與變更任何偏差和變更都必須按照SMP-VA-1001.R01驗(yàn)證偏差處理單”和SMP-VA-1001.R02“驗(yàn)證變更處理單”進(jìn)行操作，并按照附錄14“偏差和變更匯總”進(jìn)行總結(jié)。再確認(rèn)周期當(dāng)儀器正常運(yùn)行時，規(guī)定校驗(yàn)周期為2年，當(dāng)儀器的安裝位置發(fā)生變更或儀器更換重要部件時，應(yīng)及時進(jìn)行儀器的校驗(yàn)工作，以保證儀器的正常檢測。10.參考文獻(xiàn)USP(1058)分析儀器的確認(rèn)2003藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南SOP-QC-2003Agilent液相色譜儀使用及維護(hù)操作規(guī)程QualificationofEquipmentAnnex1:QualificationofHPLCequipmentPA/PH/OMCL(11)0411.歷史批準(zhǔn)日期修訂內(nèi)容版本2013.03.22新訂文件IQOQPQ.022.00見首頁增加梯度混合準(zhǔn)確性的確認(rèn)OQPQ.022.0112.附錄附錄1：測試人員培訓(xùn)記錄附錄2：測試用試劑液確認(rèn)附錄3：測試用儀器、儀表確認(rèn)附錄4：待確認(rèn)儀器相關(guān)文件檢查附錄5：Agilent1260HPLC運(yùn)行確認(rèn)附錄6：Agilent