HP111有機(jī)殘留檢測方法學(xué)驗證方案一

1、審核人審核人/日期：目的確保鹽酸厄洛替尼有機(jī)殘留檢測方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)并耐用，為建立檢驗操作程序提供依據(jù)。范圍鹽酸厄洛替尼有機(jī)殘留檢測方法方法學(xué)驗證。驗證小組成員及職責(zé)成員姓名部門職務(wù)工作分工負(fù)責(zé)人劉曉紅分管質(zhì)量副總批準(zhǔn)驗證方案審核張加明QAQA科長負(fù)責(zé)對方案及報告進(jìn)彳丁型式申核組長鄧福英QCQC科長組織協(xié)調(diào)和實施驗證工作組員QC檢驗員檢測驗證的分析工作組員QC檢驗員檢測驗證的分析工作驗證依據(jù)ICHQ2QC-SMP014驗證內(nèi)容5.1驗證可接受標(biāo)準(zhǔn)項目指標(biāo)方法專屬性稀釋劑空白實驗不干擾樣品測試溶劑混合實驗分離度大于1.5系統(tǒng)適用性理論塔板數(shù)大于10000重復(fù)進(jìn)樣各溶劑峰面積的RSD%小于10.0%

2、對稱因子0.8-1.2分離度大于1.5檢測限符合S/N=3(+1)：1定量限符合S/N=10(1)：1線性測定相關(guān)系數(shù)大于0.99方法耐用性色譜條件略有變化情況下測試，各溶劑峰分離度大于1.5重復(fù)性(RSD%)小于10.0%加入實驗符合S/N=3(+1)：1方法準(zhǔn)確度(回收率)90.0%110.0%中間精密度小于10.0%5.2測試方法的驗證色譜條件儀器：Agilent7890氣相色譜儀（帶Agilent7694頂空進(jìn)樣器）QC-097色譜柱：DB-624（30mx0.53mmx3ym）柱溫：初溫40C，維持5分鐘，以每分鐘20C升溫至220,維持3分鐘。汽化室溫度：200C檢測器溫度：300

3、C檢測器：FID流速：3.0ml/分鐘分流比：1：1進(jìn)樣量：3.0mlAgilent7694頂空進(jìn)樣器時間參數(shù)：平衡時間30分鐘，加壓時間0.5分鐘，充環(huán)時間0.2分鐘，壓力平衡時間0.2分鐘，進(jìn)樣時間1分鐘。溫度參數(shù)：平衡溫度80C，定量環(huán)120C，輸送管溫度130C。驗證內(nèi)容工藝中用到的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、一氯甲烷、二氯甲烷、異丙醇、正己烷、苯、二甲基甲酰胺、甲苯和三乙胺。三乙胺為原料M2可能殘留的有機(jī)溶劑，因中間體Z2的后處理過程經(jīng)過多次水洗，且成品制備過程中加入鹽酸成鹽，系統(tǒng)pH值約為2左右，故關(guān)鍵起始原料M2中可能殘留的三乙胺在成品中沒有存在的可能性。故我們對關(guān)鍵起始原料中除

4、三乙胺以外的II類溶劑、中間體及成品制備過程中用到的所有溶劑，即二氯甲烷、甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯、丙酮，采用氣相頂空進(jìn)樣法在成品進(jìn)行研究與控制（方法學(xué)驗證一）。一氯甲烷為成品制備過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物，考慮到一氯甲烷常溫下為氣體，我們通過購買一氯甲烷甲醇溶液作為對照品來測定樣品中一氯甲烷的含量。因一氯甲烷對照品為甲醇溶液，會干擾成品中甲醇的測定，以及方法學(xué)驗證一中溶劑N,N-二甲基乙酰胺會干擾N,N-二甲基甲酰胺的測定,故我們另建系統(tǒng)對成品中的一氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和苯進(jìn)行研究與控制（方法學(xué)驗證二）5.223因存在樣品效應(yīng)，正己烷回收率不能達(dá)到80%120%,故在試生產(chǎn)階段轉(zhuǎn)給合川時，將

5、溶劑正己烷，成品中不進(jìn)行檢測，在中間體Z2中進(jìn)行單獨(dú)控制（方法學(xué)驗證三）。5.2.3驗證用樣品、試劑及結(jié)果概要5.2.3.1有機(jī)溶劑及殘留允許限度見下表：溶劑名稱ICH指南的分類ICH限度指標(biāo)內(nèi)控指標(biāo)一氯甲烷無毒理數(shù)據(jù)600ppm(USP467)600ppm乙醇III類5000ppm5000ppm丙酮III類5000ppm5000ppm異丙醇III類5000ppm5000ppm甲醇II類3000ppm3000ppm正己烷II類290ppm290ppm甲苯II類890ppm890ppm二氯甲烷II類600ppm600ppmN,N-二甲基甲酰胺II類880ppm880ppm三乙胺II類290ppm

6、苯I類2ppm2ppm5.2.4溶液配制貯備液甲醇貯備液：精密稱取甲醇0.75g，置裝有適量稀釋劑的100ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。乙醇貯備液：精密稱取乙醇1.25g，置裝有適量稀釋劑的100ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。異丙醇貯備液：精密稱取異丙醇1.25g,置裝有適量稀釋劑的100ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。丙酮貯備液：精密稱取丙酮1.25g，置裝有適量稀釋劑的100ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。二氯甲烷貯備液：精密稱取二氯甲烷0.15g，置裝有適量稀釋劑的100ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至

7、刻度，搖勻，備用。甲苯貯備液：精密稱取甲苯0.22g，置裝有適量稀釋劑的100ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。空白溶劑（稀釋劑）N,N-二甲基乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液分別精密移取“5.241項”下貯備液1.0ml同置于100ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋到刻度，搖勻，即可。5.2.4.4樣品溶液稱取供試品約0.125g，精密稱定，置10ml頂空瓶中，加入5.0ml稀釋劑，壓蓋密封，水域加熱，使其溶解，即得。5.2.5測定方法移取5ml標(biāo)準(zhǔn)溶液置10ml頂空瓶中，壓蓋密封，進(jìn)樣；稱取供試品約0.125g,精密稱定，置10ml頂空瓶中，加5.0ml稀釋劑，加蓋密封，立即振搖，使其溶解，即得，

8、進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算測定結(jié)果。計算公式樣品的有機(jī)殘留量按下式計算：CTCT(ppm)=ACTSfAus式中：CT-式中：CT-樣品溶液中有機(jī)溶劑的濃度，Cs-標(biāo)準(zhǔn)溶液中有機(jī)溶劑的濃度ppm；ppm；As-標(biāo)準(zhǔn)溶液中有機(jī)溶劑峰響應(yīng)值；AT-樣品溶液中有機(jī)溶劑峰響應(yīng)值fu-樣品的稀釋因子。5.3方法專屬性5.3.1實驗過程5.3方法專屬性5.3.1實驗過程移取各貯備液1.0ml到不同的100ml的容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，頂空進(jìn)樣,記錄色譜圖。移取各貯備液1.0ml到同一個100ml的容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度,搖勻得到混合溶液,頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。稱取供試品約0.125g

9、，精密稱定，置10ml頂空瓶中，加入5.0ml稀釋劑，壓蓋密封，水域加熱，使其溶解，頂空進(jìn)樣，確定樣品不干擾溶劑的檢測。稱取供試品約0.125g，精密稱定，置10ml頂空瓶中，加入5.0ml混合溶液，壓蓋密封，水域加熱，使其溶解，頂空進(jìn)樣，確定溶劑、樣品互不干擾。移取稀釋劑5.0ml到10ml頂空瓶中，壓蓋密封，頂空進(jìn)樣，確定稀釋劑不干擾溶劑的檢測。表1方法專屬性數(shù)據(jù)溶劑名稱單獨(dú)進(jìn)樣混合進(jìn)樣保留時間（min）保留時間（min）分離度（R）甲醇乙醇異丙醇丙酮二氯甲烷甲苯樣品對溶劑檢測干擾，稀釋劑對檢測干擾。5.3.2結(jié)論：5.4方法耐用性5.4.1實驗過程用專屬性下的混合溶液分別調(diào)整各實驗條件（

10、柱溫土1C、升溫程序土FC/min、柱流速土0.1ml/min）,測試標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄溶劑間的分離度和保留時間，結(jié)果見下表。表2耐用性測試表溶劑正常條件柱流速（ml/min）柱溫（C）升溫速率（C/min）0.91.1991011416甲醇RT(min)分離度乙醇RT(min)分離度異丙醇RT(min)分離度丙酮RT(min)分離度二氯甲烷RT(min)分離度苯RT(min)分離度甲苯RT(min)分離度5.4.2結(jié)論：5.5檢測限及定量限5.5.1實驗過程將各貯備溶液逐級稀釋，進(jìn)樣并記錄色譜圖，符合S/N=3（+1）:1的進(jìn)樣濃度即為檢測限濃度（進(jìn)樣兩針），符合S/N=10（土1）：1的進(jìn)樣濃

11、度即為定量限濃度（進(jìn)樣兩針）。表3定量限數(shù)據(jù)溶劑名稱溶液濃度（yg/ml）保留時間（min）S/N定量限（成品中存在濃度ppm）甲醇乙醇異丙醇丙酮二氯甲烷甲苯表4檢測限數(shù)據(jù)溶劑名稱溶液濃度（yg/ml）保留時間（min）S/N檢測限（成品中存在濃度ppm）甲醇乙醇丙酮異丙醇二氯甲烷甲苯5.5.2結(jié)論：5.6加入實驗5.6.1實驗過程稱取一批樣品兩份，向其中加入未檢出溶劑的檢測限濃度水平，頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，計算各溶劑的S/N表5加入實驗數(shù)據(jù)記錄溶劑S/N平均甲醇乙醇異丙醇丙酮二氯甲烷甲苯5.6.2結(jié)論：5.7線性（LOQ內(nèi)控限度200%）5.7.1實驗過程分別稱取甲醇0.75g,乙醇1.25

12、g，異丙醇1.25g,丙酮1.25g,二氯甲烷0.15g和甲苯0.22g同置于100ml容量瓶中，再移取0.1ml、0.2ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml,分別依次到6個100ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，與定量限溶液組成線性溶液。每個濃度點(diǎn)進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，以各溶劑的濃度C（卩g/ml）為橫坐標(biāo)，各溶劑峰面積A為縱坐標(biāo)，做二次回歸，得到回歸方程及相關(guān)系數(shù)。表6線性測定結(jié)果溶劑名稱LOQ10%20%50%100%150%200%甲醇C（卩g/ml）峰面積回歸方程及相關(guān)系數(shù)醇C（卩g/ml）峰面積12回歸方程及相關(guān)系數(shù)異丙醇C（卩g/ml）峰面積12回歸方程及相關(guān)

13、系數(shù)丙酮C（卩g/ml）峰面積12回歸方程及相關(guān)系數(shù)5.8系統(tǒng)適用性5.8.1標(biāo)準(zhǔn)溶液取甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、甲苯、丙酮貯備液各1.0ml到同一個100ml容量瓶中，用稀釋劑稀釋到刻度，取5ml到10ml頂空瓶中，平行移取6份頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，計算溶劑間的分離度、對稱因子、理論塔板數(shù)及各溶劑峰面積RSD%。表7系統(tǒng)適用性數(shù)據(jù)記錄溶劑名稱甲醇乙醇異丙醇丙酮二氯甲烷甲苯峰面積123456RSD%理論塔板數(shù)分離度對稱因子5.8.2結(jié)論：重復(fù)性5.9.1實驗過程選擇一批樣品，平行稱取6份，照“5.2.4溶液配制”項下制成樣品溶液，進(jìn)樣并記錄色譜圖，計算6份樣品溶液中每個殘留溶劑的平均含量及

14、相應(yīng)的RSD%。表8重復(fù)性數(shù)據(jù)記錄5.9.25.9.2審核人審核人/日期：審核人審核人/日期：方法準(zhǔn)確度5.10.1實驗過程稱取一批樣品9份，配制成樣品溶液，在3份樣品溶液中加入5ml相對標(biāo)準(zhǔn)濃度30%的溶液，另3份中加入5ml相對標(biāo)準(zhǔn)濃度60%的溶液，剩余3份中加入5ml相對標(biāo)準(zhǔn)濃度120%的溶液，制成3種不同準(zhǔn)確度驗證溶液，以重復(fù)性數(shù)據(jù)為空白對照。計算各溶劑的加樣回收率?；厥章视嬎愎綖椋夯厥章剩ɑ厥章剩ǎ?加樣量（相對含量）表9方法準(zhǔn)確度測定結(jié)果甲醇溶劑殘留量(ppm)力叭水平稱樣量(g)峰面積檢出值(pjpm)加入量(pjpm)回收率單次測定平均值RSD%甲醇乙醇溶劑殘留量(pjpm)

15、力叭水平稱樣量(g)峰面積檢出值(pjpm)加入量(pjpm)回收率單次測定平均值RSD%醇異丙醇溶劑殘留量（ppm）力叭水平稱樣量（g）峰面積檢出值（pjpm）加入量（pjpm）回收率單次測定平均值RSD%異丙醇丙酮溶劑殘留量（pjpm）力叭水平稱樣量（g）峰面積檢出值（pjpm）加入量（pjpm）回收率單次測定平均值RSD%丙酮二氯甲烷溶劑殘留量（ppm）力叭水平稱樣量（g）峰面積檢出值（pjpm）加入量（pjpm）回收率單次測定平均值RSD%氯甲烷甲苯溶劑殘留量（pjpm）力叭水平稱樣量（g）峰面積檢出值（pjpm）加入量（pjpm）回收率單次測定平均值RSD%甲苯5.10.2結(jié)論：中間精密度（不同人員、不同時間、相同儀器）5.11.1實驗過程選擇一批樣品，平行稱取6份，照“5.2.4溶液配制”項下制成樣品溶液，進(jìn)樣并記錄色譜圖，計算6份樣品溶液中每個殘留溶劑的平均含量、相應(yīng)的RSD%以及兩人數(shù)據(jù)的RSD%。表10中間精密度數(shù)據(jù)記錄人員序列溶劑甲醇(ppm)乙醇(ppm)異丙醇（ppm）內(nèi)酮(ppm)二氯甲烷（ppm）甲苯(