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文檔簡介
1、關(guān)于菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定第一張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月主要內(nèi)容菌落總數(shù)測(cè)定大腸菌群測(cè)定MPN法原理(拓展內(nèi)容)第二張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測(cè)定掌握菌落總數(shù)測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)原理 不同稀釋度的樣品,營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,36 ,48h(水產(chǎn)品30 ,72h ),菌落數(shù)第三張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測(cè)定器材與試劑: 樣品,無菌生理鹽水,平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基,1ml吸管,培養(yǎng)皿第四張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測(cè)定第五張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月傾注培養(yǎng)第六張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)結(jié)果第七
2、張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 5.菌落計(jì)數(shù): 肉眼觀察,可用放大鏡,可標(biāo)記 必要時(shí)分區(qū)計(jì)數(shù),菌落成片者作廢計(jì)算方法 某稀釋度的菌落數(shù):兩平板菌落數(shù)取平均值 選擇菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度 (1)僅有一個(gè)稀釋度在此范圍: 菌落數(shù)稀釋倍數(shù)第八張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月菌落總數(shù)測(cè)定計(jì)算方法: (2)有兩個(gè)稀釋度在30-300之間 菌落數(shù)之比2,選較小值 菌落數(shù)之比300 取稀釋倍數(shù)最大者 (4)所有稀釋度均30 取稀釋倍數(shù)最小者 (5)沒有任何稀釋度在30-300之間 選最接近該范圍者結(jié)果單位:CFU/ml(g)第九張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于
3、2022年6月菌落總數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng): 1.無菌操作 2.標(biāo)記 3.何時(shí)更換吸管 4.吸吹混勻 5.瓊脂培養(yǎng)基保溫 6.安全常識(shí)第十張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理 36 ,48h,產(chǎn)氣(小倒管) 三步法:初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵器材與試劑 樣品、無菌生理鹽水、LST肉湯,BGLB肉湯 1ml吸管、10ml吸管、試管、小倒管第十一張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月初發(fā)酵器材與試劑樣品、225ml無菌生理鹽水、9ml無菌生理鹽水、雙料LST肉湯,單料LST肉湯,10ml吸管、1ml吸管、吸球第十二張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟
4、: 1.初發(fā)酵 第十三張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第十四張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第十五張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月吸取樣品方法第十六張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月加注樣品第十七張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月初發(fā)酵結(jié)果右邊為陽性結(jié)果,小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生。第十八張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)步驟 3.復(fù)發(fā)酵 (1)選取產(chǎn)氣試管 (2)接種至10mlBGLB肉湯中 (3)培養(yǎng):36,48h (4)觀察指標(biāo):若產(chǎn)氣則報(bào)告大腸菌群陽性。第十九張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 2.分離培養(yǎng)
5、 (1)制備伊紅美藍(lán)平板: 45 ,無菌,傾注,15ml (2)選產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管 (3)接種至伊紅美藍(lán)平板 分區(qū)劃線法 (4)培養(yǎng): 36,48h第二十張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月分離培養(yǎng)器材與試劑 初發(fā)酵結(jié)果(4只發(fā)酵管)、酒精燈、接種環(huán)、伊紅美蘭平板培養(yǎng)基第二十一張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二十二張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月分區(qū)劃線法操作要點(diǎn) 1.劃下一個(gè)區(qū)前必須滅菌接種環(huán) 2.劃線時(shí)接種環(huán)同平板呈30-40角 3.每次劃線應(yīng)該壓到上一個(gè)區(qū)域的2-3條線 4.用接種環(huán)的“面”
6、而不是“弧”在平板上滑動(dòng)第二十三張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 2.分離培養(yǎng): (5)菌落特征: 深紫黑色、有金屬光澤 紫黑色、無或略有金屬光澤 淡紫紅色、中心顏色深 (6)革蘭染色、鏡檢:選特征菌落第二十四張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色法器材與試劑 結(jié)晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、酸性復(fù)紅、生理鹽水、酒精燈、載玻片、濾紙第二十五張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色法涂片:接種環(huán),挑取菌落, 生理鹽水一滴,涂勻熱固定:通過火焰若干次初染:結(jié)晶紫一滴,1min,水洗媒染:盧戈碘液一滴,1min,水洗脫色:95%乙醇,30s或至無色
7、為止復(fù)染:復(fù)紅一滴,30s第二十六張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月涂片第二十七張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月熱固定第二十八張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月初染第二十九張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月媒染第三十張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月脫色第三十一張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月復(fù)染第三十二張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陽性革蘭染色法第三十三張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月復(fù)發(fā)酵器材與試劑 培養(yǎng)24小時(shí)后的伊紅美蘭平板、酒精燈、接種環(huán)、復(fù)發(fā)酵管第三十四張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于20
8、22年6月大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 3.復(fù)發(fā)酵 (1)選取鑒定為無芽孢G-桿菌的菌落1-3個(gè) (2)接種至10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 (3)培養(yǎng):37,24h (4)觀察指標(biāo):產(chǎn)酸,產(chǎn)氣第三十五張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月液體接種第三十六張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月復(fù)發(fā)酵復(fù)發(fā)酵陽性結(jié)果,培養(yǎng)基變成黃色,小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生第三十七張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月大腸菌群數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng): 1.無菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.顯微鏡保養(yǎng) 5.液體接種第三十八張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月MPN法原理MPN法(Most Probable N
9、umber Method)目的:對(duì)某種細(xì)菌進(jìn)行選擇性計(jì)數(shù)核心思想:泊松分布實(shí)施方法:多次稀釋直至無菌,每個(gè)稀釋度分別接種若干培養(yǎng)管,根據(jù)陽性管數(shù)估算MPN值第三十九張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月MPN法原理MPN法(Most Probable Number Method)1.細(xì)菌進(jìn)入發(fā)酵管的概率近似服從泊松分布: P(x=k)=e-x xk/k! x:細(xì)菌濃度,k:進(jìn)入發(fā)酵管的細(xì)菌數(shù)2.若在n管發(fā)酵中,令接種水樣量為Vi,陽性管數(shù)為Pi,陰性管數(shù)為Qi,則該檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)生的概率為: 其中C為常系數(shù) V為總水樣量,x為細(xì)菌個(gè)數(shù)第四十張,PPT共四十三頁,創(chuàng)作于2022年6月MPN法原理3.當(dāng)y(x)max,XMPN4.由于y(x)為單極值函數(shù),令dy/dx=0,即5.解此方程,得x=M
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