徐敏鳳(醫(yī)療器械無菌環(huán)境控制及微生物檢測)

1、無菌醫(yī)療器械的環(huán)境控制及微生物檢測12020/4/9內(nèi) 容 YY0033的潔凈室（區(qū)）要求 相關(guān)法規(guī)和GMP中關(guān)于潔凈室（區(qū)）的內(nèi)容比較 潔凈室（區(qū)）的測試/維護(hù)及驗證 產(chǎn)品的微生物檢測22022/8/18生產(chǎn)環(huán)境的污染與生產(chǎn)環(huán)境質(zhì)量相關(guān)的微粒污染 微生物的污染途徑通常有4種：A：自身污染由于患者或工作人員自身帶菌而污染B：接觸污染由于和非完全無菌的用具，器械和人的接觸而污染C：空氣污染由于空氣中所含細(xì)菌的沉降、附著或被吸入而污染D：其他污染由于昆蟲等其他因素而污染細(xì)菌還可能產(chǎn)生毒性物質(zhì)、色素等代謝產(chǎn)物32022/8/18空氣凈化的主要過程空氣凈化主要的過程一是利用過濾器有效地控制送入室內(nèi)的全

2、部空氣的潔凈度，由于細(xì)菌都會依附在微粒上，微粒過濾同時也濾掉了細(xì)菌；二是利用合理的氣流組織排除已經(jīng)發(fā)生的污染，由送風(fēng)口送入潔凈空氣，使室內(nèi)產(chǎn)生的微粒和細(xì)菌被潔凈空氣稀釋后強(qiáng)迫其由回風(fēng)口進(jìn)入系統(tǒng)的回風(fēng)管路，在空調(diào)設(shè)備的混合段和從室外引入的經(jīng)過過濾的新風(fēng)混合，再經(jīng)過進(jìn)一步過濾后又進(jìn)入室內(nèi)，通過反復(fù)的循環(huán)就可以把污染控制在一個穩(wěn)定的水平上，這個水平就應(yīng)該低于相應(yīng)的潔凈度級別；三是通過調(diào)整，使不同級別潔凈室室內(nèi)的空氣靜壓大于5帕（包括與非潔凈區(qū)），與室外大氣大于10帕，防止外界污染或交叉污染從門或各種縫隙部位侵入室內(nèi)。42022/8/18空氣凈化系統(tǒng)的三級過濾示意圖52022/8/18通過凈化隔絕或排

3、除污染合理設(shè)計建立的潔凈廠房和有效的管理在無菌醫(yī)療器械生產(chǎn)中會體現(xiàn)出非常優(yōu)越的性能，它通過對墻體、地板、屋頂、管線、水源、照明、通風(fēng)和溫度濕度等功能設(shè)計達(dá)到內(nèi)部的潔凈環(huán)境，通過空氣的三級過濾使進(jìn)入潔凈室的空氣是符合要求的，它能夠通過人員和物料的凈化程序隔絕或消除外來污染，通過氣流組織、壓差和換氣次數(shù)等參數(shù)抑制微生物、微粒的污染，它能夠排除由于光、味道、相對濕度等導(dǎo)致的任何質(zhì)量損害，通過嚴(yán)格的工藝紀(jì)律達(dá)到避免交叉污染的目的。62022/8/18法規(guī)YY0033 無菌醫(yī)療器具質(zhì)量管理規(guī)范醫(yī)療器械管理條例其他相關(guān)規(guī)章72022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局廠址及廠區(qū) 廠址的選擇：（5.1.15.1.

4、2） 遠(yuǎn)離空氣污染、水質(zhì)污染、振動或噪聲干擾的區(qū)域.82022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局廠址及廠區(qū) 廠區(qū)內(nèi)的布局（5.1.35.1.5） 廠區(qū)的道路和綠化、生活區(qū)和輔助區(qū)對生產(chǎn)區(qū)不產(chǎn)生污染為原則.92022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局生產(chǎn)廠房 一般生產(chǎn)區(qū)：（5.2.1）應(yīng)設(shè)計合理，采光、通風(fēng)良好，能滿足生產(chǎn)需要.102022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局生產(chǎn)廠房 一般生產(chǎn)區(qū)：（5.2.1）應(yīng)設(shè)計合理，采光、通風(fēng)良好，能滿足生產(chǎn)需要.112022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局潔凈區(qū)潔凈度的級別和潔凈度級別的設(shè)置（5.2.2.1)附錄A;附錄B122022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局無菌醫(yī)

5、療器具產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)境潔凈度級別設(shè)置指南（附錄B）潔凈度設(shè)置的原則： 1、 根據(jù)產(chǎn)品的技術(shù)要求，采用使污染降至最低限的技術(shù)； 2、根據(jù)工序的不同要求，采用不同的潔凈度級別.可采用局部工作區(qū)與和全室空氣凈化相結(jié)合.132022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局潔凈區(qū)的內(nèi)表面（5.2.2.2）潔凈區(qū)的密封性（5.2.2.3）潔凈區(qū)門的設(shè)置（5.2.2.4/5）工藝流程布局（5.2.2.6）潔凈區(qū)內(nèi)水電設(shè)施（5.2.2.7）潔凈區(qū)的照明（5.2.2.8）潔凈區(qū)內(nèi)的操作臺要求（5.2.2.9）潔凈區(qū)內(nèi)使用的壓縮空氣的要求（5.2.2.10）水池、地漏等（5.2.2.11）142022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及

6、布局人員凈化人員凈化室（5.3.1）凈化的程序（5.3.2）人員凈化中的換鞋的要求（5.3.3）人員的流向（5.3.4）盥洗室和風(fēng)淋房的設(shè)置（5.3.5/6）潔凈區(qū)人均面積的限制（5.3.7）152022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局物料凈化清潔措施（5.4.1）物料的傳遞（5.4.2）物料的包裝（5.4.3）162022/8/18生產(chǎn)環(huán)境、實(shí)施及布局工藝布局按產(chǎn)品形成過程順向布置（5.5.1）潔凈室內(nèi)的工藝裝備和設(shè)施、產(chǎn)品的中間庫、不同潔凈級別之間的物料傳遞（5.5.2/3/4）潔凈室內(nèi)的器具和潔具的管理（5.5.5/6）172022/8/18潔凈區(qū)的周邊環(huán)境及格局潔凈室（區(qū)）周圍環(huán)境應(yīng)保持

7、清潔整齊，沒有露土地面。潔凈廠房周圍的道路面層，應(yīng)選用整體性能好、發(fā)塵少的材料。潔凈廠房周圍應(yīng)進(jìn)行綠化，可鋪植草坪，但不應(yīng)種植對生產(chǎn)有害的植物，并不妨礙消防作業(yè)。潔凈室（區(qū)）應(yīng)布置在廠區(qū)內(nèi)環(huán)境清潔，人流物流不穿越或少穿越的區(qū)域。潔凈室（區(qū)）應(yīng)為密閉廠房。生產(chǎn)企業(yè)可以根據(jù)產(chǎn)品的分類和用途確定相應(yīng)潔凈級別，并據(jù)此結(jié)合生產(chǎn)工藝進(jìn)行凈化廠房的設(shè)計和施工，以保證產(chǎn)品在符合規(guī)定的環(huán)境里生產(chǎn)。應(yīng)考慮與產(chǎn)品的生產(chǎn)流程相匹配。以最短的時間，即最小被污染的原則來制訂的。一般來說，生產(chǎn)流程是按照產(chǎn)品的生產(chǎn)流向順序排列，不迂回交叉，不相互影響；應(yīng)考慮影響潔凈指標(biāo)的因素，主要是廠房結(jié)構(gòu)、裝修材料、門窗、生產(chǎn)設(shè)備、布局、

8、工藝、人員等等，應(yīng)在滿足使用要求的同時滿足潔凈要求。182022/8/18潔凈室的基本要求HVAC系統(tǒng)工程、工藝布局和相關(guān)維護(hù)設(shè)施應(yīng)遵循物料和產(chǎn)品發(fā)生任何污染的危險度降至最低的原則。當(dāng)生產(chǎn)技術(shù)不能保證生產(chǎn)不受污染或不能有效排除污染時，該生產(chǎn)區(qū)域的潔凈級別應(yīng)在條件許可的前提下提高生產(chǎn)控制區(qū)應(yīng)為密閉空間，內(nèi)表面應(yīng)平整光滑，無顆粒物脫落，墻面和地面能耐受清洗和消毒，以減少灰塵的積聚。應(yīng)使用現(xiàn)行的設(shè)計和安裝標(biāo)準(zhǔn)192022/8/18對潔凈室（區(qū)）測試的規(guī)定換氣次數(shù)（截面平均風(fēng)速）溫度相對濕度靜壓差懸浮粒子浮游菌沉降菌噪聲照度202022/8/18各國法規(guī)的比較藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（1998年修訂）獸藥

9、生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2001年修訂） Code of GMP for Medicinal Products (Draft, 2003，F(xiàn)DA)Australian Code of GMP for Medicinal Products (16 August 2002) Code of GMP for Medicinal Products (2003，EU) ISO 14644 Cleanrooms and associated controlled environments ISO 14698 Cleanrooms and associated controlled environmentsBio

10、contamination controlUSP 27-1116 Microbiological Evaluation of Clean Rooms and Other Controlled EnvironmentsPDA Bethesda,Maryland,USA Microbiological Risk Assessment in Pharmaceutical Clean RoomsGB 500732002 潔凈廠房設(shè)計規(guī)范JGJ 7190 潔凈室施工和驗收規(guī)范等等212022/8/18以懸浮粒子為例與國際標(biāo)準(zhǔn)比較動態(tài)與靜態(tài)分級數(shù)值對核心區(qū)的控制222022/8/18ISO/TC209 1

11、4644.1Classification number(N)0.10.20.30.515ISO class 1102ISO class 210024104ISO class 31000237102358ISO class 4100002370102035283ISO class 51000002370010200352083229ISO class 61000000237000102000352008320293ISO class 7352000832002930ISO class 8352000083200029300ISO class 935200000832000029300023202

12、2/8/18以浮游菌為例與國際標(biāo)準(zhǔn)比較EU GMP 附錄 1FDA GMP USP 27TGA GMPISO 14644潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別Grade A11001M3.53Grade A1Class 5Grade B1010007/Grade B10Class 6Grade C1001000010M5.520Grade C100Class 7Grade D200100000100M6.5100Grade D200Class 8/242022/8/18以沉降菌為例與國際標(biāo)準(zhǔn)比較EU GMP 附錄 1FDA GMP USP 27TGA GMPISO

13、14644潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別Grade A11001M3.5/Grade A1Class 5Grade B510003/Grade B5Class 6Grade C50100005M5.5/Grade C50Class 7Grade D10010000050M6.5/Grade D100Class 8/252022/8/18以換氣次數(shù)、壓差為例比較換氣次數(shù)靜壓差關(guān)于測試狀態(tài)262022/8/18潔凈室（區(qū)）的分類舉例首先應(yīng)布局合理、質(zhì)量可控其次應(yīng)重視HVAC系統(tǒng)的功能協(xié)調(diào)(1)潔凈送風(fēng)機(jī)組：三級過濾、去濕增濕、空氣調(diào)節(jié)等裝置等。系統(tǒng)的新風(fēng)量為總送

14、風(fēng)量的1030，一般人均新風(fēng)占有量為40m3，干凈機(jī)組送風(fēng)量設(shè)計的換氣次數(shù)應(yīng)大于驗收標(biāo)準(zhǔn)，機(jī)組功能是處理新風(fēng)和回風(fēng)；(2)送回風(fēng)管路：管道、調(diào)節(jié)筏、防火閥，有的裝有消聲裝置等，功能是輸送較為潔凈的空氣；(3)潔凈室的布局按最低污染原則，主要是明確生產(chǎn)工藝流程、明確人流物流和氣流走向、預(yù)測若達(dá)到設(shè)計指標(biāo)后的凈化系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)產(chǎn)生的后果，然后確定最終格局。272022/8/18值得關(guān)注的問題空調(diào)機(jī)組的設(shè)計和安裝與生產(chǎn)需求不適應(yīng)回風(fēng)管道的設(shè)計和安裝不合理廠房布局不適應(yīng)工藝流程及其空氣潔凈度要求，例如，生產(chǎn)區(qū)作為人流或物流通道，交叉往返太多，盥洗室和生產(chǎn)區(qū)或貯存區(qū)直接往來相通。不同生產(chǎn)操作和相鄰的廠房之間未

15、能有效隔離，且有妨礙不同空氣潔凈度級別的潔凈室（區(qū)）之間的人員和物料的出入，沒有防止交叉污染的產(chǎn)生，特別室級別不同的窗戶之間沒有緩沖設(shè)施潔凈室（區(qū)）與非潔凈室（區(qū)）之間，沒有人、物獨(dú)立的緩沖設(shè)施，人流、物流走向也不合理10000級潔凈室（區(qū)）使用的傳輸設(shè)備穿越了更低級別的區(qū)域282022/8/18潔凈室（區(qū)）的測試方法測試人員測試儀器測試方法注意事項292022/8/18人員和物品的出入控制在潔凈室（區(qū)）內(nèi)，所需工作人員應(yīng)滿足最小數(shù)量，同時，潔凈環(huán)境以外區(qū)域的工作人員也應(yīng)盡可能監(jiān)控。這在滿足測試條件時尤其重要；不得在潔凈室（區(qū)）內(nèi)佩戴腕表和飾物、不得化妝；潔凈工作服的選材、式樣及穿戴方式應(yīng)與生

16、產(chǎn)操作的空氣潔凈度等級要求相適應(yīng)所有的工作人員，包括與測試、維護(hù)有關(guān)的人員，應(yīng)該定期接受與潔凈室（區(qū)）生產(chǎn)有關(guān)的培訓(xùn)，其中包含涉及到的衛(wèi)生知識和基本微生物知識潔凈室（區(qū)）的測試人員應(yīng)進(jìn)行本專業(yè)的培訓(xùn)并獲得相應(yīng)資格后才能履行對潔凈室（區(qū)）測試的職責(zé)302022/8/18注意事項在進(jìn)行測試之前，應(yīng)先確定待測區(qū)域、測試狀態(tài)、儀器設(shè)備、測試規(guī)程、采樣點(diǎn)位置、評價標(biāo)準(zhǔn)以及相關(guān)注意事項；建立環(huán)境監(jiān)測程序，這樣才能證實(shí)設(shè)備以及產(chǎn)品的接觸環(huán)境是潔凈和衛(wèi)生的，并可以確定潛在的污染物是否能被控制到適當(dāng)水平；所有儀器設(shè)備在未進(jìn)入被測區(qū)域時，應(yīng)保證其符合性、有效性和已完成清潔，或在相應(yīng)的潔凈室內(nèi)準(zhǔn)備和存放（用保護(hù)罩或

17、其它適當(dāng)?shù)赝庹直Ｗo(hù)儀器）；測試人員在測試時必須穿戴符合被測環(huán)境級別的潔凈工作服；在測試時應(yīng)避免膚屑、微生物或人體皮膚上的油造成潛在的污染；312022/8/18測試方法測試順序溫度, 相對濕度的影響換氣次數(shù)/風(fēng)速的影響靜壓差的影響氣流組織與自凈時間對測試的影響測試數(shù)據(jù)的處理322022/8/18檢測結(jié)果的評價檢測數(shù)據(jù)經(jīng)過整理后，可以與標(biāo)準(zhǔn)值比較后得出結(jié)論。 檢測時應(yīng)做好記錄，記錄包含足夠的信息?，F(xiàn)場記錄會發(fā)給大家。 標(biāo)題、記錄的唯一性標(biāo)識（如編號等）、工序或潔凈室名稱、檢測日期、采用標(biāo)準(zhǔn)、采用儀器名稱及編號、檢測項目、檢測數(shù)據(jù)及其計算、簽名等332022/8/18維護(hù)及驗證微生物的控制人員以及

18、管理良好的規(guī)范以及執(zhí)行Part 2Supplier GuidePart 1User Guide342022/8/18人員的管理有能力，有資格，有經(jīng)驗數(shù)量充分組織機(jī)構(gòu)完善、關(guān)鍵崗位人員配備合理生產(chǎn)，工程，維護(hù)，保潔等部門所有員工的培訓(xùn)：潔凈廠房，衛(wèi)生學(xué)，微生物學(xué)以及行為的基本培訓(xùn)制訂健康規(guī)定，行為規(guī)范，服裝規(guī)則控制人員到最小量，出入控制352022/8/18系統(tǒng)驗證的測試項目氣溶膠對的檢漏氣溶膠測定儀1.jpg自凈時間氣流流型動態(tài)的重現(xiàn)性核心區(qū)的控制微生物其他常規(guī)項目的測試驗證評價回顧性驗證362022/8/18HVAC系統(tǒng)的驗證步驟常規(guī)的驗證工作有以下幾個步驟；1，設(shè)立驗證的組織機(jī)構(gòu)（驗證小組

19、等）；2，制定驗證計劃，確定所需的設(shè)備、系統(tǒng)、過程和時間表；3，制定驗證方案，必須確定為達(dá)到預(yù)期目的的具有可操作性的驗證方法；包括驗證目的、適用范圍、系統(tǒng)或設(shè)備、驗證方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)施步驟等4，按照驗證方案實(shí)施；5，收集驗證數(shù)據(jù)出具驗證報告，包括驗證結(jié)果、驗證評價和建議，再驗證周期等。372022/8/18微生物的基本知識定義：自然界中除動植物外，還存在一個龐雜，形態(tài)微小 結(jié)構(gòu)簡單的生物類群，因個體微小，肉眼不能看到，需借光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大幾百，幾千，幾萬倍才能看到。此類微小的生物統(tǒng)稱為微生物（microorganism）特點(diǎn)：形體小，結(jié)構(gòu)簡單，新陳代謝能力強(qiáng)，生長繁殖快，細(xì)胞未明

20、顯分化，易發(fā)生變異，種類多分布廣。舉例：細(xì)胞，真菌分布：土壤，空氣，水， 動植物人體表，腔道中等382022/8/18微生物的主要特性細(xì)菌和菌類名稱 單體尺寸（m） 菌類（含真菌） 380 枯草菌 510 水腫菌 510 肺炎桿菌 1.17 乳酸菌 17 白喉菌 16 大腸菌 15 結(jié)核菌 1.54 破傷風(fēng)菌 24 傷寒桿菌 13 普通化膿桿菌 0.71.3 白色（黃色）葡萄球菌 0.31.2 炭疽桿菌 0.460.56392022/8/18微生物的基本知識對于細(xì)菌的生長來說所需的營養(yǎng)物質(zhì)有： 水， 碳源（有機(jī)：糖類；無機(jī)：CO2）， 氮源（N2，硝酸鹽，銨鹽， 有機(jī)蛋白胨，氨基酸等）， 生長

21、因子（維生素，氨基酸， 嘌呤，嘧啶）， 無機(jī)鹽（磷酸鹽，硫酸鹽，氯鹽， 鉀鹽，鈉鹽，鎂鹽，鈣鹽等）402022/8/18微生物的基本知識生長條件：1.充足的營養(yǎng) 2.合適的pH值，6.8-7.4 3.合適的溫度，哺乳動物寄生的 為35，其他腐生的為25 4.氣體：氧氣，二氧化碳412022/8/18微生物的基本知識培養(yǎng)方法：固體培養(yǎng)基：接種于平板固體培養(yǎng)基上，由單個繁殖形成肉眼可見的集團(tuán)菌落菌落特點(diǎn)的判定：大小， 形狀，光滑或粗糙，色澤 （固體培養(yǎng)基上）；若于液體 培養(yǎng)基中，有菌生長則呈混濁。422022/8/18微生物的基本知識細(xì)菌的生長：分為延遲期，對數(shù)生長期，穩(wěn)定期，衰亡期。 其中，對數(shù)生長期是細(xì)菌生 長最旺盛的時期，很多藥物 選擇在這一時期作用最有效， 我們觀察細(xì)菌生長也是在這 一時期最明顯。432022/8/18微生物的基本知識霉菌：絲狀真菌的統(tǒng)稱，有分支或不分支的菌絲與孢子構(gòu)成，形成的菌落疏松呈絨毛狀絮狀。結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁，細(xì)胞膜，細(xì)胞漿， 細(xì)胞核。特點(diǎn)：對酸不敏感，pH2-9， 生長溫度為22-28。442022/8/18革蘭氏染色法分類鑒定菌種的重要指標(biāo)初染（結(jié)晶紫）媒