C反應(yīng)蛋白正確度驗(yàn)證物質(zhì)的定值及應(yīng)用

1、C反應(yīng)蛋白正確度驗(yàn)證物質(zhì)的定值及應(yīng)用2019-03-05 20:00作者：吳春穎 張順利 馬懷安 劉巍 張瑞 岳育紅 梁玉芳 趙婷婷 王清濤C反應(yīng)蛋白(Creactive protein，CRP)是一種主要由肝臟合成的經(jīng)典的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在調(diào)節(jié)先天免疫系統(tǒng)方面起著積極的作用。鑒于CRP檢測(cè)的重要作用，其測(cè)量準(zhǔn)確性和結(jié)果一致性受到了廣泛的關(guān)注。實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果一致性的重要途徑是量值溯源和標(biāo)準(zhǔn)化，2011年，由國(guó)際臨床化學(xué)學(xué)會(huì)(International Federation ofClinical Chemistry，IFCC)和參考物質(zhì)與測(cè)量研究所(Institute for Reference

2、 Materials and Measurements，IRMM)研制出了ERMDA474，這一物質(zhì)當(dāng)前被國(guó)內(nèi)外廠商廣泛用于量值溯源。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(external quality assessment, EQA)是多家實(shí)驗(yàn)室分析同一樣本并回報(bào)檢測(cè)結(jié)果，以評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果之間準(zhǔn)確性和可比性的過(guò)程。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心2018年第1次EQA的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明當(dāng)前國(guó)內(nèi)檢測(cè)CRP檢測(cè)試劑種類(lèi)眾多，達(dá)到82種以上。但是不同檢測(cè)試劑對(duì)同一濃度樣本的檢測(cè)數(shù)值差別較大,CRP檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題亟需解決。未來(lái)EQA發(fā)展的方向是采用具有互換性定值的物質(zhì)，要求實(shí)驗(yàn)室重復(fù)檢測(cè)樣本，以獲得實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的精密度和正確度信息，同

3、時(shí)獲得廠商診斷試劑結(jié)果一致性和標(biāo)準(zhǔn)化狀態(tài)的信息。本研究制備兩個(gè)濃度CRP人血清基質(zhì)正確度驗(yàn)證物質(zhì)，前期的研究表明此物質(zhì)與患者血清具有良好的互換性。本研究利用ERMDA474/IFCC國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通過(guò)量值傳遞的方式，在多家實(shí)驗(yàn)室多個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)為其定值，并將其試應(yīng)用于北京市CRP室間質(zhì)量評(píng)價(jià)/正確度驗(yàn)證計(jì)劃。材料與方法一、材料1血清物質(zhì)：兩個(gè)濃度正確度驗(yàn)證物質(zhì)均來(lái)源于患者驗(yàn)后血清，前期研究證明其具有良好的均勻性和穩(wěn)定性，并且與患者血清具有良好的互換性。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERMDA474購(gòu)自于IFCC，共10支(批號(hào)：003095)，有效期范圍內(nèi)。定值過(guò)程中稀釋用低值血清來(lái)自健康體檢個(gè)體混合血清(經(jīng)西門(mén)子A

4、DVIA 2400ORION超敏CRP試劑和貝克曼5821配日本積水CRP試劑共同測(cè)定：每個(gè)系統(tǒng)分別測(cè)3次取均值，最終取兩個(gè)系統(tǒng)的測(cè)定均值為CRP：0.27 mg/L)。2定值檢測(cè)系統(tǒng)：(1)西門(mén)子2400全自動(dòng)生化儀配德國(guó)西門(mén)子原廠試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(2)西門(mén)子2400全自動(dòng)生化儀配德國(guó)德賽試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(3)西門(mén)子2400全自動(dòng)生化儀配國(guó)產(chǎn)利德曼試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(4)西門(mén)子2400全自動(dòng)生化儀配德國(guó)羅氏試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(5)貝克曼Immage800全自動(dòng)免疫分析儀配原廠試劑、校準(zhǔn)品及伯樂(lè)質(zhì)控品；(6)貝克曼AU5821全自動(dòng)生化儀配貝克曼原廠試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(

5、7)貝克曼AU5821全自動(dòng)生化儀配北京九強(qiáng)試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(8)貝克曼AU5821全自動(dòng)生化儀配日本積水試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(9)貝克曼AU5821全自動(dòng)生化儀配寧波美康試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；(10)西門(mén)子BN全自動(dòng)免疫分析儀配原廠試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品。(1)(5)北京朝陽(yáng)醫(yī)院檢驗(yàn)科的4個(gè)透射比濁法和1個(gè)散射比濁法，共5個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)：(6)(10)北京潞河醫(yī)院檢驗(yàn)科的4個(gè)透射比濁法和1個(gè)散射比濁法，共5個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)。3正確度驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)室及檢測(cè)系統(tǒng)：北京地區(qū)采用常規(guī)CRP生化或免疫檢測(cè)系統(tǒng)的42家醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室。生化檢測(cè)系統(tǒng)為開(kāi)放式，包括：Beckman AU系列15家，HITACHI

6、系列7家，Roche系列2家，西門(mén)子2400系列2家及其他品牌5家；免疫檢測(cè)系統(tǒng)為封閉式，包括：Beckman Immage 800 7家，西門(mén)子BNP系列4家。二、多家實(shí)驗(yàn)室多系統(tǒng)聯(lián)合定值1檢測(cè)系統(tǒng)的選擇：根據(jù)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)2015年第1次EQA的851家實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，從眾多CRP檢測(cè)儀器中選出目前使用率較高的4種主流儀器：Siemens BN II/BNProspec(22.8%)、Beckman IMMAGE/IMMAGE800(21.6%)、Beckman AU系列(9.7%)和Siemens ADVIA 1800/2400(1.7%)；在試劑選擇上選出了全國(guó)使用率較高的8種CRP試

7、主流試劑，包括：Beckman、Roche、Siemens、北京利德曼、日本積水、DiaSys、北京九強(qiáng)、寧波美康，使用率1.6%23.0%；隨后在兩家三級(jí)醫(yī)院將其組合為以上的10個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)：2個(gè)采用速率散射比濁法的封閉系統(tǒng)和8個(gè)采用增強(qiáng)透射比濁法的開(kāi)放的檢測(cè)系統(tǒng)。對(duì)10個(gè)系統(tǒng)分別做性能驗(yàn)證并在通過(guò)后的一周內(nèi)完成定值。以這10個(gè)CRP血清學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)來(lái)作為CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)的定值系統(tǒng)。2ERMDA474工作曲線(xiàn)工作液的配制：根據(jù)IFCC的ERMDA474國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)說(shuō)明書(shū)。每瓶ERMDA474血清CRP濃度為(41.22.5)mg/L。取ERMDA474冰凍人血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)6支，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)

8、行復(fù)溶?；靹蚝笥眉訕訕屓?，用CRP低值血清(0.27 mg/L)作為稀釋液，用分析天平稱(chēng)量法測(cè)重量，精確配制工作曲線(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)溶液；最終用稱(chēng)重法將ERMDA474稀釋成4個(gè)濃度水平，具體配制如表1所示，標(biāo)記為W1W4，80 凍存?zhèn)溆?，?shí)際濃度的計(jì)算公示如下：表1稱(chēng)重法稀釋ERMDA474國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)C1表示C反應(yīng)蛋白國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中C反應(yīng)蛋白的濃度；1表示C反應(yīng)蛋白國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的密度；M1表示C反應(yīng)蛋白國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稀釋溶液中C反應(yīng)蛋白國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量；C2表示稀釋液中C反應(yīng)蛋白的濃度；2表示稀釋液的密度；M2表示C反應(yīng)蛋白國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稀釋溶液中所述稀釋液的質(zhì)量；3表示C反應(yīng)蛋白國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和稀

9、釋溶液混合后的密度；C表示C反應(yīng)蛋白國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和稀釋溶液混合后的理論濃度3正確度驗(yàn)證物質(zhì)定值工作液的配制：水平2(L2)理論值(約25.3 mg/L)在工作曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍內(nèi)，因此無(wú)需稀釋。水平1(L1)理論值(約110.0mg/L)超出工作曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍，故將L1標(biāo)物用低值血清稀釋成兩個(gè)濃度即U3和U4后，再進(jìn)行定值，U3和U4與ERMDA474的稀釋液(W1W4)的配制采用同一CRP低值血清(0.27 mg/L)，具體配制見(jiàn)表2,L2、U3和U4每種共配制12支，每支1 500 l，放80凍存?zhèn)溆谩１?稱(chēng)重法稀釋正確度驗(yàn)證物質(zhì)4所有定值樣本的密度測(cè)定：由于CRP的準(zhǔn)確定值計(jì)算過(guò)程中需要各種工作

10、液的密度，所以在配制完成后，分裝凍存前用稱(chēng)重法準(zhǔn)確測(cè)定每種工作液密度：公式：m/v，采用有檢定合格證書(shū)的加樣槍吸取200 l，經(jīng)檢定合格的分析天平稱(chēng)重計(jì)算，每份測(cè)定3次取均值(表3)。表3稱(chēng)重法測(cè)定樣本密度5多系統(tǒng)定值：每個(gè)實(shí)驗(yàn)室均分兩天進(jìn)行多系統(tǒng)聯(lián)合定值，每天測(cè)定前將配制分裝好的待測(cè)樣本從80 冰箱中取出，實(shí)驗(yàn)室間采用冰袋運(yùn)送，1 h內(nèi)送達(dá)定值實(shí)驗(yàn)室，放置室溫待完全復(fù)融后開(kāi)始檢測(cè)。選擇兩家實(shí)驗(yàn)室10個(gè)測(cè)量系統(tǒng)，每天每個(gè)實(shí)驗(yàn)室取W1W4各1支，L2、U3和U4各3支，室溫下復(fù)融，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)：W1W4每支每天連續(xù)測(cè)3次；L2、U3和U4每支每天測(cè)定6次，共測(cè)3支，即L2、U3和U4分

11、別有18個(gè)測(cè)定值。每天定值前確保每個(gè)測(cè)量系統(tǒng)室內(nèi)質(zhì)控在控后，依次對(duì)W1W4，L2、U3和U4開(kāi)始測(cè)定，測(cè)定過(guò)程中室內(nèi)溫濕度穩(wěn)定。6定值運(yùn)算方法：用直線(xiàn)擬合的方法為正確度驗(yàn)證物質(zhì)定值和計(jì)算定值過(guò)程的不確定度7,8。用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋后的理論濃度和實(shí)際測(cè)定濃度，每個(gè)系統(tǒng)做出一條直線(xiàn)。將正確度驗(yàn)證物質(zhì)樣本測(cè)出值，計(jì)算均值代入直線(xiàn)方程，得出某一定值，然后把10個(gè)系統(tǒng)的定值結(jié)果取均值，最終得出正確度驗(yàn)證物質(zhì)的定值，L1的定值采用U3和U4的結(jié)果計(jì)算得到。7定值總不確定度的評(píng)估方法：根據(jù)ISO Guide 35文件，總不確定度由候選標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值測(cè)量、均勻性、長(zhǎng)期穩(wěn)定性和測(cè)量工具如分析天平等引入的不確定度

12、合成，計(jì)算公式：ver2為測(cè)量不確定度，它包括了標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、測(cè)定重復(fù)性和ERMDA474的不確定度；bb2為不均勻性引入的不確定度；lts2為長(zhǎng)期穩(wěn)定性引入的不確定度，grav為分析天平等測(cè)量工具引入的不確定度。k2，為擴(kuò)展因子。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERMDA474的說(shuō)明書(shū)給出的擴(kuò)展不確定度是2.5 mg/L，在計(jì)算中應(yīng)加以考慮，但對(duì)于檢定合格的天平，其引入的不確定度較小，不予考慮三、正確度驗(yàn)證試應(yīng)用1分發(fā)樣本：兩個(gè)濃度水平CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)，分發(fā)至北京地區(qū)46家臨床實(shí)驗(yàn)室，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)濃度水平各發(fā)2支。2運(yùn)輸：運(yùn)輸過(guò)程中將樣本放置于有冰袋的保溫容器中，以保證樣本處于冰凍狀態(tài)。3測(cè)定方法和結(jié)果上報(bào)：

13、分別于兩個(gè)工作日測(cè)定，每天測(cè)定1支，在現(xiàn)用檢測(cè)系統(tǒng)連續(xù)測(cè)定3次。測(cè)定當(dāng)天將樣本在室溫放置30 min，待其完全融化，平衡至室溫后，輕輕上下顛倒10次混勻，避免產(chǎn)生氣泡。最后，將所有數(shù)據(jù)上報(bào)至北京市臨檢中心指定郵箱。4正確度驗(yàn)證數(shù)據(jù)處理：用Excel 2007軟件計(jì)算每個(gè)實(shí)驗(yàn)室6次結(jié)果均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，以定值結(jié)果為靶值，以衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心1/2允許總誤差(1/2TEa)為允許限(12.5%)，繪制正確度驗(yàn)證示意圖；對(duì)給予回報(bào)結(jié)果的42家實(shí)驗(yàn)室的均值結(jié)果采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GBT 48832008)Grubbs法9剔除離群值，采用SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，最后將所有方法的均值(x1)和擴(kuò)展不

14、確定度(u1)與正確度驗(yàn)證物質(zhì)認(rèn)定值(x2)和不確定度(u2)，采用效能函數(shù)(En，這里U1和U2分別指u1和u2，此處u1，s*為穩(wěn)健標(biāo)準(zhǔn)差，p為參加實(shí)驗(yàn)室數(shù)；u2為以上定值總不確定度)，驗(yàn)證定值的臨床適用性。結(jié)果一、多系統(tǒng)定值1個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)定值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及正確度驗(yàn)證物質(zhì)定值：各定值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的斜率范圍為0.6600.992，相關(guān)系數(shù)r的范圍為0.9991。需定值的3個(gè)濃度點(diǎn)均在各系統(tǒng)的定值曲線(xiàn)上，見(jiàn)圖1,圖2。圖18個(gè)系統(tǒng)增強(qiáng)透射比濁法定值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及定值圖2兩個(gè)系統(tǒng)速率散射比濁法定值標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及定值2CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)多系統(tǒng)定值：正確度驗(yàn)證物質(zhì)最終定值為10系統(tǒng)定值的均值，定值過(guò)程中的不確定度分

15、量取10個(gè)系統(tǒng)總不確定度的均值，除Beckman Immage 800由于試劑不足，僅僅進(jìn)行了1 d的定值，獲得了18個(gè)定值數(shù)據(jù)，其他9個(gè)系統(tǒng)均進(jìn)行了2d的定值，獲得了36個(gè)定值數(shù)據(jù)(表4)?？紤]到該物質(zhì)的均勻性與穩(wěn)定性引入的不確定度，CRP冰凍混合人血清正確度驗(yàn)證物質(zhì)經(jīng)過(guò)ERMDA474國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值傳遞，經(jīng)2家實(shí)驗(yàn)室，10個(gè)主流檢測(cè)系統(tǒng)聯(lián)合定值，最終定值結(jié)果為：水平1：(109.99.4)mg/L,水平2：(27.12.4)mg/L(表5)，不確定度與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERMDA474(41.22.5)mg/L相當(dāng)。表410個(gè)系統(tǒng)CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)定值結(jié)果表5CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)總不確定度評(píng)

16、估及最終定值結(jié)果二、正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)1正確度驗(yàn)證結(jié)果回報(bào)：該物質(zhì)樣本共分發(fā)北京市46家實(shí)驗(yàn)室，42家實(shí)驗(yàn)室回報(bào)結(jié)果，其中三級(jí)醫(yī)院30家，二級(jí)醫(yī)院12家。2CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)水平1(L1)正確度驗(yàn)證結(jié)果分析：42個(gè)L1回報(bào)結(jié)果中，總體均值為114.19 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)差為19.10 mg/L，穩(wěn)健標(biāo)準(zhǔn)差(s*)為15.968 mg/L，中位值為109.58 mg/L，最大值為162.07 mg/L，最小值為70.1 mg/L。根據(jù)Grubbs法，有1個(gè)離群值(33.37mg/L)，剔除后的結(jié)果見(jiàn)圖3。經(jīng)SPSS 17.0 KolmogorovSmirnov Z檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室回報(bào)的L1數(shù)據(jù)成正態(tài)分布

17、。效能函數(shù)為0.48，小于1。CRP項(xiàng)目室間質(zhì)量評(píng)價(jià)允許偏差為25%，上下限為12.5%(1/2TEa)。從圖3中可以看出高于上限有8家實(shí)驗(yàn)室，低于下限有3家實(shí)驗(yàn)室，北京市有73.8%的實(shí)驗(yàn)室L1測(cè)定結(jié)果合格。圖3高濃度(L1)樣本CRP正確度驗(yàn)證結(jié)果3CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)水平2(L2)正確度驗(yàn)證結(jié)果分析：42個(gè)L2回報(bào)結(jié)果中，總體均值為26.51 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)差為3.23 mg/L，穩(wěn)健標(biāo)準(zhǔn)差(s*)為2.921 mg/L，中位值為25.65 mg/L，最大值為33.90 mg/L，最小值為20.02 mg/L。根據(jù)Grubbs法，所有結(jié)果無(wú)離群值。經(jīng)SPSS 17.0 Kolmogoro

18、vSmirnov Z檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室回報(bào)的L2數(shù)據(jù)成正態(tài)分布。效能函數(shù)為0.28，小于1。CRP項(xiàng)目室間質(zhì)量評(píng)價(jià)允許偏差為25%，上下限為12.5%(1/2TEa)。從圖4可以看出，高于上限有5家實(shí)驗(yàn)室，低于下限有5家實(shí)驗(yàn)室，北京市有76.1%的實(shí)驗(yàn)室L2測(cè)定結(jié)果合格。圖4低濃度(L2)樣本CRP正確度驗(yàn)證結(jié)果42015年CRP正確度驗(yàn)證調(diào)查評(píng)價(jià)：在可接受限內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室為30家，占所有回報(bào)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室的比例為71.4%(圖5)。圖52015年CRP正確度驗(yàn)證調(diào)查評(píng)價(jià)結(jié)果討論近年來(lái)隨著許多靈敏、準(zhǔn)確而簡(jiǎn)便的CRP檢測(cè)方法的相繼問(wèn)世，出現(xiàn)較多的測(cè)定CRP的檢測(cè)系統(tǒng)，不同檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果可能存在差異10,

19、11，如何實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性和可比性成為亟待解決的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題。這也是實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化、實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可及檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)的必然要求，而基于量值溯源室間質(zhì)量評(píng)價(jià)/正確度驗(yàn)證在這一過(guò)程中發(fā)揮重要作用12。本實(shí)驗(yàn)所研制的兩個(gè)濃度CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)，已證明具有良好的均勻性，室溫和28 能穩(wěn)定7天，80 至少穩(wěn)定44個(gè)月，同時(shí)與患者血清具有良好的互換性，而ERMDA474/IFCC稀釋系列與患者血清也具有良好的互換性。這為采用ERMDA474對(duì)該正確度驗(yàn)證物質(zhì)進(jìn)行量值傳遞，多家實(shí)驗(yàn)室多個(gè)系統(tǒng)的聯(lián)合定值提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。為正確度驗(yàn)證物質(zhì)定值最好要基于參考方法，即通過(guò)參考方法將國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的值通過(guò)不間斷溯源鏈，以較小

20、的不確定度進(jìn)行傳遞13。對(duì)于沒(méi)有參考方法的臨床常規(guī)蛋白類(lèi)檢驗(yàn)項(xiàng)目，目前國(guó)際上采用靶值轉(zhuǎn)移的方法14，我們即利用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERMDA474進(jìn)行量值傳遞，在兩家實(shí)驗(yàn)室采用10個(gè)目前國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室最常用的CRP血清測(cè)定系統(tǒng)，用多系統(tǒng)聯(lián)合定值的方法，最終給兩個(gè)水平的CRP正確度驗(yàn)證物質(zhì)進(jìn)行定值，所獲得的不確定度小(9.4和2.4 mg/L)。利用IFCC的ERMDA474國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行量值傳遞，準(zhǔn)確配制一系列已知濃度的ERMDA474的標(biāo)準(zhǔn)工作液是很重要的，我們首先測(cè)定了ERMDA474及其稀釋液、待定值物質(zhì)各自的密度，再按照稱(chēng)得的質(zhì)量，計(jì)算其體積和相應(yīng)的物質(zhì)的量，以減少實(shí)驗(yàn)中可能的吸樣誤差和不確定度15。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)的稀釋液，我們采用了健康體檢個(gè)體的低值血清(經(jīng)兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)試均值為0.27 m