DNA的粗提取和鑒定

1、DNA的粗提取和鑒定基礎(chǔ)知識染色體成分蛋白質(zhì)DNA提取DNA的基本思路： 利用DNA與蛋白質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。1）不同濃度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。3）DNA和蛋白質(zhì)對酶耐受性不同：酶的專一性蛋白酶水解蛋白質(zhì)。但是對DNA沒有影響。4）DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080高溫，而DNA在80以上才會變性。5）DNA和蛋白質(zhì)對洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)原理案例一：

2、以雞血為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取1、實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)案例1）不同濃度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。2.實(shí)驗(yàn)材料動物提醒：人和哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核，也沒有DNA，不適于作為DNA提取的材料，但卻是提取血紅蛋白的理想材料。雞血細(xì)胞液的優(yōu)點(diǎn)： 雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞核，含大量的DNA,既經(jīng)濟(jì)又易取 。植物：洋蔥、新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。3、方法與過程 1).制雞血細(xì)胞液0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液血漿血細(xì)胞6

3、提取細(xì)胞核物質(zhì)：溶解核內(nèi)DNA：析出DNA：DNA黏稠物再溶解：提取較純凈的DNA：DNA的鑒定：濾取DNA黏稠物：過濾含DNA的NaCl溶液：2)實(shí)驗(yàn)方法步驟： 在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個(gè)方向輕輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；當(dāng)絲狀物不在增加時(shí)，停止加水（此時(shí)NaCl溶液的濃度相當(dāng)于0.14mol/L）。 用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。 用兩層紗布過濾。濾液中含有DNA。所得的濾液體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個(gè)方向輕緩攪拌，溶液中（析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起。利用細(xì)胞吸水破裂，細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來，用紗布過濾取其濾液。在濾液中加2mol/L的Na

4、Cl溶液并攪拌，使染色質(zhì)中DNA與蛋白質(zhì)分離，DNA充分溶解，過濾(除雜質(zhì))在燒杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。DNA與二苯胺試劑反應(yīng)使溶液呈現(xiàn)藍(lán)色。 鑒定不變藍(lán)對照組溶液逐漸變藍(lán)絲狀物 (DNA)實(shí)驗(yàn)組圖示結(jié)果加入物質(zhì)比較均加入：4 mL二苯胺試劑2mol/LNaCl溶液5 mL自變量你能采用其他方法對DNA進(jìn)行鑒定嗎？ 取少許絲狀物，置玻片中央，加1滴甲基綠溶液，絲狀物變成綠色。注意：鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠。用二苯胺須加熱。用甲基綠不用水浴加熱。 注 意 事 項(xiàng)制備雞血細(xì)胞液時(shí)，要在取雞血的同時(shí)加入檸檬酸鈉，靜置后上層是血清，下層為所需要的血細(xì)胞。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中加入“兩次蒸

5、餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”兩次加蒸餾水的目的不同，一是漲破細(xì)胞，二是稀釋溶液。酒精最好用95%的冷酒精;加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時(shí),動作要輕緩且朝一個(gè)方向。保證DNA分子的完整性。使用時(shí)注意玻璃棒不要碰到燒杯底。鑒定DNA時(shí)需沸水浴加熱。二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,否則會影響鑒定的效果.二苯胺是一種有毒性的試劑,使用時(shí)注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位. 盛放雞血細(xì)胞的容器最好是塑料容器（雞血細(xì)胞破碎后釋放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取過程中DNA的損失）小結(jié)：DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)原理DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同DNA與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同DNA和

6、蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性不同DNA與二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)DNA粗提取選擇適宜材料破碎細(xì)胞DNA的溶解和析出DNA的純化鑒定DNA與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)練習(xí) 1下列圖示中能反映DNA溶解度與NaCI溶液濃度之間關(guān)系的是（ ）2在DNA的粗提取和鑒定的實(shí)驗(yàn)中，提取雞血細(xì)胞的核物質(zhì)和析出含DNA的粘稠物的操作過程中均用到蒸餾水，其作用在于 ( ) A前者用來溶解血細(xì)胞，后者用來溶解DNAB前者使血細(xì)胞吸水破裂，后者用來稀釋NaCl溶液C前者用來分離細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)，后者用來提取DNAD前者使DNA從核中分離出來，后者使DNA析出CB3、下圖為“DNA粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作。這些操作目的正確的是（）A.是洗滌血細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)B.是溶解DNA，去除不溶于酒精的雜質(zhì)C.