反相高效液相色譜法測(cè)定蒲薏顆粒中咖啡酸含量

1、反相高效液相色譜法測(cè)定蒲薏顆粒中咖啡酸含量【摘要】目的建立測(cè)定蒲薏顆粒中咖啡酸含量的方法。方法色譜柱Lihrspher184.6250，5，以乙腈-水-磷酸71000.1為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：323n,柱溫：40,流速：1inl-1。結(jié)果咖啡酸在0.00530.848gl-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)；平均加樣回收率為97.75%，RSD=2.88%。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于蒲薏顆粒中咖啡酸的含量測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】咖啡酸蒲薏顆粒反相高效液相色譜蒲薏顆粒是由蒲公英、生薏苡仁、生何首烏、靈芝、三棱組成的復(fù)方制劑，具有清熱解毒、活血化瘀、補(bǔ)益氣血之成效。用于消化道腫瘤的放療、化療

2、的輔助治療，臨床適宜病證見(jiàn)皮膚紅斑、色素沉著、脫發(fā)、惡心、嘔吐、口舌生瘡、精神疲憊、面色無(wú)華，舌紅偏紫，舌苔薄膩，脈弦細(xì)數(shù)等熱毒熾盛、血行瘀滯、氣血缺乏者，也可用于消化道腫瘤非放、化療時(shí)而見(jiàn)上述證情者。蒲公英為蒲薏顆粒中的主藥，而?中國(guó)藥典?2000年版收載的蒲公英含量測(cè)定指標(biāo)成分為咖啡酸。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們對(duì)制劑中咖啡酸的含量測(cè)定方法進(jìn)展了研究。1儀器與試藥1.2試藥咖啡酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所批號(hào)：885-200102；規(guī)格：供含量測(cè)定用。乙腈色譜純，甲醇、磷酸、氯仿等為分析純。蒲薏顆粒由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥物研究所提供批號(hào)：20220306，20220310，20220312。2方法

3、與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為L(zhǎng)ihrspher184.6250，5；流動(dòng)相為乙腈-水-磷酸71000.1；檢測(cè)波長(zhǎng)323n1；柱溫40；流速1.0gl-1；進(jìn)樣量10l；咖啡酸的保存時(shí)間(tR)約為25in。2.2對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱取咖啡酸對(duì)照品10.60g，置100l容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制得每毫升含0.1060g的對(duì)照品儲(chǔ)藏液。2.3供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的樣品，研細(xì)，取約2.0g，精細(xì)稱定，精細(xì)加水25l，超聲處理250，2934kHz20in，搖勻，離心，取上清液5l置枯燥的離心試管中，加氯仿5l，密塞，漩渦混合5in，離心，取上清液用濾膜0.45濾過(guò)，即得。2

4、.4陰性溶液的制備按處方比例和消費(fèi)方法制成缺蒲公英的樣品，按“2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。2.5干擾性實(shí)驗(yàn)分別取咖啡酸對(duì)照品溶液、制劑供試品溶液及缺蒲公英藥材的陰性對(duì)照液各10l注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果供試品色譜與對(duì)照品色譜相應(yīng)的保存時(shí)間處有吸收峰，而陰性溶液無(wú)吸收峰，說(shuō)明陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。2.6線性關(guān)系考察精細(xì)汲取上述咖啡酸對(duì)照品儲(chǔ)藏液0.5，1，2，4，8l分別置10l容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得系列對(duì)照品工作液。分別精細(xì)汲取上述系列對(duì)照品工作液各10l，注入液相色譜儀，記錄色譜，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度Xgl-1為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y4400

5、0097X-25772，r=0.9999，在0.00530.848gl-1范圍內(nèi)，進(jìn)樣濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.7精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取咖啡酸對(duì)照品溶液0.01060gl-110l注入色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定咖啡酸，結(jié)果咖啡酸平均峰面積為438974，RSD為1.47%。2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液10l，分別于0，1，2，4，8h進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果供試品溶液中咖啡酸在4h內(nèi)穩(wěn)定不變。2.9重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)樣品供試品，按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果樣品中咖啡酸的平均含量為0.0952gg-1，RSD為2.81%。2.10回收率實(shí)

6、驗(yàn)采用加樣回收法。精細(xì)稱取已測(cè)定含量的同一批樣品平均含量0.0952gg-15份，精細(xì)參加咖啡酸對(duì)照品適量，按制劑供試品溶液制備方法制備5份供試液，分別進(jìn)樣10l。結(jié)果見(jiàn)表1。表1制劑供試品中咖啡酸的回收率實(shí)驗(yàn)略2.11樣品的測(cè)定分別精細(xì)汲取咖啡酸對(duì)照品溶液和供試品溶液適量，經(jīng)0.45微膜過(guò)濾，分別進(jìn)樣10l，測(cè)定，計(jì)算蒲薏顆粒中咖啡酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表2蒲薏顆?？Х人岬暮繙y(cè)定結(jié)果略3討論3.1供試品溶液制備方法的選擇制劑中蒲公英藥材已經(jīng)過(guò)提取，其中咖啡酸以游離形式存在，根據(jù)咖啡酸溶解于水、甲醇、乙醇等性質(zhì)2，3，在樣品提取中，分別考察了水、不同濃度的甲醇為提取溶劑，結(jié)果以水為提取溶劑的

7、效果較好。水提取液經(jīng)氯仿除雜進(jìn)樣和酸化后用醋酸乙酯提取等方法實(shí)驗(yàn)，后者回收率偏低。用氯仿提取后的水溶液測(cè)定時(shí)雜質(zhì)干擾較小，回收率高。以水為提取溶劑，分別超聲處理不同時(shí)間后，用氯仿提取，將水溶液直接進(jìn)樣分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，超聲處理20in可將制劑中咖啡酸提取完全，故制劑采用水超聲處理20in，氯仿除雜的水溶液作為供試品溶液。3.2色譜條件的選擇分別采用了Krasil185，2005、Diansil185，2504.6和Lihrspher185，2504.6色譜柱，分別以甲醇-磷酸鹽緩沖溶液、乙腈-0.1%磷酸為流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-水-磷酸71000.1，Lihrspher18色譜柱，柱溫40，別離效果較好?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，部S.北