黃金咽喉片中檸檬酸的薄層鑒別及含量測定

1、黃金咽喉片中檸檬酸的薄層鑒別及含量測定何兵，馮文宇，田吉，李春紅，艾洪兵【摘要】目的建立黃金咽喉片中檸檬酸的薄層鑒別及含量測定方法。方法采用薄層色譜法對檸檬酸進(jìn)展定性鑒別，并采用高效液相色譜HPL法測定檸檬酸的含量，色譜柱為：DikaKrasil18柱2504.6，5；流動相為，乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199；檢測波長：210n；柱溫：25；流速：0.6lin-1；進(jìn)樣量：10l。結(jié)果在薄層層析色譜中能檢出檸檬酸，檸檬酸在1.0410.4g范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系r0.9999，平均回收率為98.85，RSD為0.37。結(jié)論該方法簡便、快速、有效、靈敏、準(zhǔn)確，具有良好的重復(fù)性和回收率，

2、可作為該制劑中檸檬酸的定性與定量分析方法?！娟P(guān)鍵詞】黃金咽喉片檸檬酸薄層鑒別Abstrat：bjetiveTestablishtheethdfrtheTLidentifiatinandntentdeterinatinfitriaidinHuangjinYanhuTabletethdsitriaidinHuangjinYanhuTabletasidentifiedbyTL,andthententfitriaidasdetetedbyHPLTheseparatinasarriedutnaDikaKrasil18lun2504.6，5Thebilephaseasaetnitrile-0.1%phsp

3、hriaid0.1%triethylaineslutin199.Thedetetinavelengthassetat210n，thelunteperatureas25，theflrateas0.6lin-1andthesaplesizeas10lResultsitriaiduldbedetetedbyTL，thealibratinurveshedgdlinearityvertherangef1.04-10.4gr0.9999.Theaveragereveryas98.85ithRSD0.37。nlusinThisethdissiple，rapid，effiient，sensitive，aura

4、teandithgdrepeatabilityandrevery，itanbeusedasaquantitativeanalysisethdfrthispreparatinKeyrds：HuangjinYanhuTablet;itriaid;TLidentifiatin黃金咽喉片是由青蒿黃花蒿、金銀花、烏梅、青果、甘草和薄荷6味中藥提取的有效部位及有效成分組成的復(fù)方制劑，具有芳香透邪、清熱解毒、生津潤燥、利咽止痛等成效。臨床上主要用于治療急慢性咽炎、喉炎、扁桃體炎、口腔黏膜潰瘍；亦可輔佐治療細(xì)菌或病毒感染的其他呼吸道疾玻檸檬酸為烏梅中的主要活性成分，為完善其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，本文采用薄層色譜法對烏

5、梅中所含的主要成分檸檬酸進(jìn)展定性鑒別，并采用高效液相色譜法對其進(jìn)展定量測定。1儀器與試藥1.1儀器戴安高效液相色譜儀P680A四元低壓梯度泵，PDA-100二極管陣列檢測器，T-100柱溫箱，hrelen色譜工作站；瑞士Preisa電子天平XR205S-DR；QX25-06超聲波清洗器上海必能信超聲，功率250，頻率25kHz，硅膠G薄層預(yù)制板青島海洋化工廠。1.2對照品檸檬酸111679-202201，中國藥品生物制品檢定所提供。在選定色譜條件別離后,未見其他雜質(zhì)峰，含量以100%計。1.3試藥乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。1.4樣品黃金咽喉片及陰性對照樣品，瀘州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)

6、院藥物研究所提供，規(guī)格每片0.5g，批號051212，051213，051214。2方法與結(jié)果2.1薄層鑒別2.1.1試液的制備對照品溶液：取檸檬酸對照品，加醋酸乙酯制成濃度為2gl-1的溶液，作為檸檬酸對照品溶液。供試品溶液：取本品2片，研細(xì)，參加酸性醋酸乙酯溶液醋酸乙酯-甲酸=95520l，超聲處理15in，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2l使溶解，即得。同法制得3批樣品的供試品溶液。陰性對照液：取按處方比例及制備工藝制得缺烏梅提取物的陰性對照樣品，按供試品溶液制備項下方法制成陰性對照溶液。2.1.2薄層層析照薄層色譜法1試驗(yàn)，汲取上述溶液各6l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異丙醚-甲醇

7、-甲酸-水(30441)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.1的溴酚藍(lán)乙醇溶液，置日光下檢視。供試品色譜中，藍(lán)紫色背景下，在與檸檬酸對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯一樣黃色的斑點(diǎn)，陰性對照無此斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。2.2含量測定2.2.1色譜條件色譜柱為DikaDiansil182504.6，5；流動相為乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199；檢測波長210n；柱溫25；流速0.6lin-1；進(jìn)樣量10l。2.2.2試液的制備對照品溶液：取經(jīng)五氧化二磷減壓枯燥至恒重的檸檬酸對照品適量，精細(xì)稱定，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含檸檬酸0.5g的溶液，即得。供試品溶液：取重量差異項下的本品20片，精細(xì)稱定，研

8、細(xì)，取約0.5g，精細(xì)稱定，置具塞錐形瓶中，精細(xì)參加水50l，稱定重量，超聲處理30in，取出，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。陰性對照溶液：取按處方比例及制備工藝制得不含烏梅提取物的陰性對照樣品，按供試品溶液制備項下方法制成陰性對照溶液。2.2.3系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)分別精細(xì)汲取對照品溶液、供試品溶液、缺烏梅提取物的陰性對照溶液各10l，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見圖2。從圖2中可見，檸檬酸的保存時間約為15.5in，檸檬酸峰與其前后色譜峰的別離度分別為1.78，3.61，拖尾因子為1.04，理論塔板數(shù)以檸檬酸峰計為14198，檸檬酸峰純度因子為997，陰性對照在

9、檸檬酸峰處無干擾，即本試驗(yàn)條件下檸檬酸與其他組分別離完全。2.2.4線性關(guān)系考察分別精細(xì)汲取檸檬酸對照品溶液0.52gl-12，4，6，8，10，15，20l，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積A對進(jìn)樣量g進(jìn)展回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A1.8162+0.0325，r0.9999。結(jié)果說明，檸檬酸在1.0410.4g范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。2.2.5精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)量取對照品溶液制備項下對照品溶液10l，重復(fù)進(jìn)樣5次，檸檬酸峰面積平均值為9.4018，RSD為0.17n5，說明儀器精細(xì)度良好。2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品批號051214的供試品溶液，室溫下放置，分別于0

10、，2，4，6，8，10，12，24，36h測定，檸檬酸的峰面積平均值為3.8675，RSD為0.15n9，說明供試品溶液在36h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品批號051214，照供試品溶液制備項下方法，平行制備5份供試品溶液，分別測定，測得檸檬酸平均含量為21.3580gg-1，RSD為0.13n5，說明本法重復(fù)性良好。2.2.8回收率實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取含量21.3580gg-1的本品批號051214細(xì)粉9份，每份0.5g，分成3組，每組2份，分別精細(xì)添加檸檬酸對照品溶液2.68gl-13，4，5l，照供試品溶液制備項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，并計算回收率。結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)

11、結(jié)果說明，本法具有良好的回收率。表1樣品回收率實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果略2.2.9樣品的測定分別精細(xì)量取對照品溶液和供試品溶液10l，按上述色譜條件測定。結(jié)果見表2。表2黃金咽喉片中檸檬酸含量測定結(jié)果略3討論在鑒別烏梅提取物中的檸檬酸時選用了4個展開系統(tǒng)，乙醚-氯仿-甲酸-甲醇521.50.52、乙酸丁酯-甲酸-水4223、正丁醇-醋酸-水4:1:54、異丙醚-甲醇-甲酸-水(30441)5，結(jié)果前3個展開系統(tǒng)別離效果均不如第4個展開系統(tǒng)。顯色劑曾比擬了1三氯化鐵乙醇溶液、10硫酸乙醇溶液、0.1甲基橙乙醇溶液、0.1溴甲酚綠乙醇溶液及0.1溴酚藍(lán)乙醇溶液。結(jié)果前3種顯色劑斑點(diǎn)均不明顯，而噴以0.1溴甲酚

12、綠乙醇溶液在藍(lán)色背景下顯黃色斑點(diǎn)，0.1溴酚藍(lán)乙醇溶液在藍(lán)紫色背景下顯黃色斑點(diǎn)。兩種顯色劑效果均較好，但藍(lán)紫色背景下的黃色斑點(diǎn)比照度更強(qiáng)，應(yīng)選用0.1溴酚藍(lán)乙醇溶液作顯色劑。由于是采用酸堿指示劑顯色，而展開劑中含有甲酸，故在噴顯色劑前宜用電吹風(fēng)熱風(fēng)檔把甲酸揮盡置枯燥箱中120烘烤，效果并不理想。薄層板下沿由于長時間浸泡在展開劑中，甲酸不易揮盡，可遮住薄層板上沿斑點(diǎn)局部，用氨氣薰一下薄層板下沿黃色局部即可。試驗(yàn)中針對配制供試品溶液的不同提取方法超聲、回流及溶劑萃取，不同提取溶劑甲醇、75甲醇、50甲醇、25甲醇、水和流動相，不同溶劑體積10，25，50，75，100l及不同提取時間15，30，4

13、5，60in分別考察。結(jié)果以50l水超聲提取30in含量最高，雜質(zhì)峰較少。采用二極管陣列檢測器在190380n范圍內(nèi)分別掃描對照品、樣品溶液中檸檬酸峰的紫外吸收，結(jié)果檸檬酸峰為末端吸收，其最大吸收峰在190n，在210n左右處有一拐點(diǎn)，250n處已根本無吸收，為防止與其他雜質(zhì)的干擾，測定波長選擇在210n。在流動相選擇試驗(yàn)中，考察了0.01lL-1磷酸二氫鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.76；0.5磷酸二氫銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH2.87；甲醇-0.1磷酸溶液595；乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199等的不同比例、流速及柱溫。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)流動相以乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199，流速為0.6lin-1，柱溫為25時保存時間適宜，別離效果最理想，故采用此流動相。實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對黃金咽喉片中檸檬酸進(jìn)展定性鑒別，并采用HPL測定其含量，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，精細(xì)度好，具有良好的重復(fù)性和回收率，可用于該制劑中檸檬酸的質(zhì)量控制?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國家藥典委員會.中國藥典，部S.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2022:附錄31.2陳勇,甄漢深,董藝.廣山楂及其葉質(zhì)量分析研究J.時珍國醫(yī)國藥,1999,10(07):511.3王學(xué)杰,昊清.蒼烏合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J.時珍國醫(yī)國藥,2002,13(09):515.4