不同途徑輸注造血干細胞對小鼠移植效果的比較

1、差異途徑輸注造血干細胞對小鼠移植結(jié)果的比力蔡耘，黃紹良，黃科，陳惠芹，張緒超【摘要】為比力骨髓腔內(nèi)IB或靜脈IV等差異途徑輸注小鼠造血干細胞后在受體內(nèi)的漫衍特點及對移植結(jié)果的影響，將57/6胎鼠及新生鼠外周血(FNPB)單個核細胞N移植經(jīng)亞致死量60射線輻照的BALB/鼠。受鼠隨機分為6組：單側(cè)IB組；雙側(cè)IB組；IV組；雙側(cè)IB+IV組；照耀比擬組；空缺比擬組。用構(gòu)造冰凍切片和流式細胞術(shù)動態(tài)相識FSE標識表記標幟的FNPBN在受體內(nèi)的漫衍變革，不雅察移植后受鼠保存狀態(tài)、植入程度、造血規(guī)復及GVHD環(huán)境。結(jié)果表現(xiàn)：IB注射的供體FNPBN重要積累于注射側(cè)骨髓腔內(nèi)，少量FNPBN可經(jīng)血循環(huán)二次歸

2、巢，肺部滯留很少。單/雙側(cè)IB組輸注的FNPBN總數(shù)無顯著差異，但經(jīng)雙側(cè)IB輸入FNPBN滲漏至外周血或別的構(gòu)造器官的比例更少；IB各組造血重修速率均優(yōu)于IV組，尤以雙側(cè)IB組最快，其外周血象和造血干祖細胞集落產(chǎn)率在移植后第21天已靠近正常程度，單側(cè)IB組、雙側(cè)IB+IV組次之；IB組各時點植入水均勻顯著高于IV組，雙側(cè)IB組注射側(cè)脛骨植入程度與單側(cè)IB組無顯著差異，二次移植中雙側(cè)IB組的植入程度顯著高于IV組；IB移植組90天存活率80%，IV組僅為50%。結(jié)論：雙側(cè)IB有利于更多造血干細胞歸巢，促進植入和造血重修，進步IB途徑移植的結(jié)果?！娟P(guān)鍵詞】骨髓腔內(nèi)輸注移植parisnfEffiai

3、esfAllgenEiHeatpietiSteellTransplantatinsbeteenDifferentRutesfAdinistratininie質(zhì)料和要領(lǐng)實行動物重要試劑FNPB細胞的制備及原始造血干細胞檢測動物分組及FNPB輸注要領(lǐng)FSE標識表記標幟FNPBN體內(nèi)示蹤受鼠一樣平常環(huán)境不雅察逐日不雅察FNPBN移植后受鼠保存環(huán)境至移植后3個月，繪制保存曲線。受鼠造血重修的檢測受鼠移植物抗宿主病查抄不雅察受鼠有無脫毛、腹瀉、出血、皮膚黏膜腐敗等環(huán)境，取移植后出現(xiàn)GVHD表示的受鼠和存活至第28天的受鼠足墊皮膚、肝臟、腸管不雅察構(gòu)造病理學改變。受鼠植入證據(jù)與植入程度檢測二次移植實行統(tǒng)計

4、學處置懲罰結(jié)果57BL/6鼠FNPBN染色及原始造血干細胞檢測結(jié)果差異途徑輸注FNPB體內(nèi)漫衍環(huán)境FSE標識表記標幟FNPBN輸注后5分鐘，單、雙側(cè)IB組注射處骨髓腔有很多綠色熒光細胞+-+，以單側(cè)IB組最多，其他部位未見帶綠色或橙色熒光細胞。IV組外周血熒光細胞+，髓外構(gòu)造+；24小不時，單側(cè)IB組注射部位的陽性細胞+，外周血、肺部可見少量熒光細胞，而股骨、肝、脾、胸腺+。雙側(cè)IB組注射處陽性細胞+，股骨、肝、脾、胸腺+，肺及外周血-。IV組骨髓腔內(nèi)陽性細胞+-+，外周血+，其他構(gòu)造+-+；72小不時，單側(cè)IB組注射側(cè)脛骨、股骨均可見熒光細胞，但仍以注射側(cè)脛骨為多+，別的部位-或+。雙側(cè)IB

5、組脛骨中熒光細胞計數(shù)與24小時環(huán)境相似，別的部位稀有陽性細胞。IV組脛骨、股骨、肝、脾切片見陽性細胞少量，肺部仍為+圖3及表1。移植后5分鐘,流式細胞儀檢測單側(cè)IB組注射側(cè)脛骨細胞中1.5370.136%為FSE標識表記標幟FNPBN，雙側(cè)IB組兩側(cè)脛骨的檢測值別離為0.8430.160%、0.8130.106%。兩個IB移植組經(jīng)骨髓腔內(nèi)注射的FNPBN總數(shù)雷同，雙側(cè)IB組股骨、外周血、脾臟中陽性細胞比例均小于單側(cè)組，但差異無統(tǒng)計學意義。兩個IB移植組注射部位骨髓中的供體細胞比例顯著高于IV組F=183.66，p0.01，而股骨、脾臟、外周血中的漫衍那么明顯低于IV組，提示IB注射的FNPBN

6、馬上滲漏至外周血或別的構(gòu)造的比例少少；24小時，兩個IB移植組注射側(cè)脛骨中熒光細胞比例有所落落，但仍明顯高于股骨和IV組，脾臟、股骨中的比例有所升高，以單側(cè)IB組較為明顯，提示IB注射的FNPB在該時已通過血液循環(huán)到達別的構(gòu)造，但大部門還是定居于注射側(cè)骨髓腔，尤其是雙側(cè)IB組在注射部位的漫衍比例最高；72小不時，單側(cè)IB組注射側(cè)脛骨供體的細胞比例為0.8880.234%，雙側(cè)IB組相應比例別離為0.6220.073%、0.6320.046%，IV組脛骨檢測值僅為0.0930.120%，統(tǒng)計闡發(fā)結(jié)果與24小時的環(huán)境同等(表2)。移植后受鼠保存狀態(tài)Figure4.Survivalpltsfreip

7、ientieafterFNPBNtransplantatin.外周血象的規(guī)復照耀后3個IB組血紅卵白Hb上升較快，第21天根本規(guī)復，而白細胞(B)、血小板(Plt)那么于第30天達正常程度，尤以雙側(cè)IB組規(guī)復最為敏捷，第21天時B、Hb、Plt已別離到達8.841.02109/L、160.26.7g/L和406.666.6109/L，而IV組、照耀比擬組外周血象多于第30天規(guī)復。單、雙側(cè)IB組比擬無明顯差異，但移植早期3系細胞計數(shù)值都高于IV組和照耀比擬組。雙側(cè)IB+IV組血象上升速率亦快于IV組，尤其是B計數(shù)在第10、14天差異顯著p0.05，但總體程度仍低于單、雙側(cè)IB組。受鼠骨髓造血干祖

8、細胞集落變革受鼠骨髓增生環(huán)境第21天時IB注射側(cè)脛骨有核細胞增生非?；顫姡詥蝹?cè)IB組最為顯著。股骨髓腔細胞增生顯著活潑，3個IB移植組之間無明顯差異。IV組脛骨骨髓增生亦活潑，但有少量纖維構(gòu)造伴纖維網(wǎng)格形成。照耀比擬組存活小鼠脛骨切片與IV組根本雷同。移植后受鼠GVHDIV組1只受鼠第13天排黃色水樣便，第15天殞命，病理查抄提示腸道GVHD。別的受鼠未創(chuàng)造GVHD病癥。供體植入程度二次移植受鼠保存率及供體植入程度討論以骨髓腔輸注促進有限的HS歸巢骨髓是有望辦理UBT造血規(guī)復耽誤的計謀之一4。本課題組前期已樂成創(chuàng)立同種異基因小鼠骨髓腔內(nèi)臍血移植模子，創(chuàng)造單側(cè)IB注射可通過促進HS歸巢而顯著改

9、進其造血重修本領(lǐng)，進步受體存活率2?，F(xiàn)進一步對差異移植途徑包羅雙側(cè)IB輸注、IB/IV混淆輸注舉行比力，以選擇最正確的HSs輸注方法。任何途徑輸注的HS必需歸巢、定居于骨髓造血微環(huán)境中符合龕位才氣進一步增殖、分化和重制作血。IB途徑旨在直接增長HS歸巢，淘汰骨髓外構(gòu)造滯留，使更多的HS能定植于骨髓。Yahata等6創(chuàng)造，人臍血D34+細胞經(jīng)IB途徑輸入ND/SID小鼠時植入頻率為1/44，IV組為1/660，兩者相差15倍。Kiura等7創(chuàng)造，人臍血Lin-D34-細胞IB輸注入ND/SID鼠體內(nèi)可植入并重制作血，但靜脈輸注時因其歸巢相干受體表達程度較低、難以歸巢骨髓而無法植入。本研究比力了單

10、側(cè)/雙側(cè)IB、IV途徑HS輸注后體內(nèi)動力學差異，創(chuàng)造IB注射的供體FNPBN重要積累于注射側(cè)骨髓腔內(nèi)，少量N可經(jīng)血循環(huán)到達外周血、肝、脾、別的長/扁骨骨髓腔等部位，肺部滯留很少。而以尾靜脈注射的FNPBN歸巢骨髓的數(shù)目明顯少于2個IB組，肺部有顯著供體細胞滯留，提示IB較IV途徑有利于HS歸巢骨髓，對付移植細胞數(shù)目有限的UBT更具有應用代價；單側(cè)IB組非注射部位長骨與IV組骨髓腔內(nèi)熒光細胞量根本相稱，說明單側(cè)脛骨IB輸注時少量HS可舉行再次的歸巢和蒔植；單/雙側(cè)IB比擬，2個移植組經(jīng)骨髓腔內(nèi)輸注的FNPBN總數(shù)無顯著差異，但72小不時后者每側(cè)脛骨標識表記標幟細胞比例與前者注射側(cè)脛骨無明顯差異，但骨髓外構(gòu)造不雅測值顯著低于單側(cè)IB組，表白經(jīng)雙側(cè)IB輸入HS滲漏至外周血或別的構(gòu)造器官的比例更少，提示雙側(cè)IB輸注乃至多部位I