藥監(jiān)系統(tǒng)官方培訓 體外診斷產品計量溯源性的建立

1、體外診斷產品計量溯源性的建立楊宗兵北京市醫(yī)療器械檢驗所體外診斷檢驗室2016年6月17日目錄12溯源的意義計量溯源性的建立3 溯源性確認（校準方式）溯源的意義溯源是IVD最基本的要求沒有溯源的IVD測量系統(tǒng)會存在哪些問題?1.量值準確度無法表達（不確定度）2.測量結果之間不具有可比性3.導致錯誤的診斷和治療4.產品質量控制的缺乏（尤其是可延續(xù)性）通過溯源要解決的問題測量結果的溯源性輔助診斷可靠性結果可比量值傳遞準確度(U)有效性空間時間溯源的意義檢驗醫(yī)學的目標臨床樣本測量結果具有計量可比性計量溯源性的建立溯源標準修訂進展情況 等級組成：基本與原版保持一致 溯源圖：類別的重新劃分（JCTLM20

2、08年會議） 系統(tǒng)（有效的，校準物+試劑）：測量結果的溯源性 物質（ISO 15194）、程序（ ISO 15193 ） 一級（純度）、二級（基質）如何建立溯源性溯源性的建立通過下列程序及其組合實現(xiàn)： 使用可溯源的標準校準測量設備 使用一級測量程序的結果或比對 使用純物質RM 使用適用的基質CRM 使用可接受的，嚴格定義的程序總體思路溯源用流行詞來說，是“大數據”。溯源校準（量值傳遞）的影響因素眾多，單從一個維度很難闡述。要說溯源性的建立其實很簡單，一句話“逐級校準及其驗證來保證量值傳遞的可靠性”，但是真正實施起來需要大量的基礎的通用的知識作為基礎。下面主要圍繞建立溯源性時的關鍵因素從不同維度

3、進行介紹。對于什么樣的產品談溯源溯源就是通過校準來實現(xiàn)提供校準物或指定校準物的產品，沒有校準 物的產品沒有準確度，更談不上具有溯源性。提供的或指定的校準物應是實際參與溯源過程的物質，要有溯源確認。常規(guī)方法之間比對只是比對，不屬于溯源的范疇（即使通過比對進行了量值的修正），注意Higher order！溯源與標準、標準化建立溯源的過程就是標準化實施的過程標準化在建立溯源性過程中起著關鍵性作用標準是建立溯源性的基礎溯源和標準化一樣是長期的工作GB/T 21415-2008溯源性YY/T 0638-2008溯源性-酶學CNAS-CL06:2014要求1234建立溯源性的技術文件CNAS-GL18:2

4、008實施指南GB/T 15000.3-2008統(tǒng)計原則GB/T 219192008參考實驗室567 GB/T 197022005參考測量程序GB/T 197032005參考物質8JJF 1059.12012不確定度9溯源的總體要求測量結果的可靠程度計量學有效1.通過逐級校準賦值不確定度2.估計結果分散性什么是溯源什么是溯源首先通過文件規(guī)定的不間斷的校準鏈：各級校準文件測量結果與參照對象聯(lián)系起來的特性：量值的傳遞，從上到下在文件中要有量值，也就是賦值文件對于一個產品而言，性能驗證是建立在量值準確可靠（也就是具有溯源性）的前提下，當然，“具有溯源性”這詞包含的情況較多（不確定度）每一校準等級對不

5、確定度的貢獻要考慮：不確定度的評定文件，每一校準等級又包括兩個方面的來源（校準物質、校準過程）除了校準貢獻外，同時還應有校準物特性和方法特性方面的貢獻：主要有均勻性、穩(wěn)定性。溯源是可比的基礎，有了溯源就可比？可比就是溯源？溯源性的說明1.參照對象；2.校準等級序列；3.時間順序（技術更新）；4.多輸入量情況；5.不能保證不發(fā)生錯誤；6.隱形校準情況；7.規(guī)范表述：計量溯源性溯源相關術語參考物質校準物質不確定度和互換性有證參考物質質量控制物質測量標準參照對象關系H&SH&SC&U質量控制物質校準物質IQC&EQACAL參考物質測量標準有證參考物質CAL、MEC&U參考物質測量標準參照對象溯源就是

6、校準物x的量值通過校準向測量結果y傳遞的過程溯源就是使用同一源進行校準系統(tǒng)的測量結果，要在最大程度上保證所得到的測量結果之間具有可比性溯源與校準參考物質/參考程序賦值血清校準物量值(U)校準驗證校準選定的互換性溯源不確定度一組操作制造商工作校準物校準性信號示值(U)測量結果(U)校準驗證確常設的認不要求互換性(校準)制造商產品校準物/終端用戶校準物校準驗證校準常規(guī)的測量結果2013年ILAC-P10：作為有效的計量溯源性證明的證書中應包含溯源性和測量不確定度信息溯源測量結果量值1.處于不同校準等級的校準物、正確度控制物質的量值溯源2.只要求到產品校準物等級（ISO17511：2003已經把樣本

7、結果列入溯源鏈，樣本測量終端用戶實施，沒有明確提及溯源性）1.處于不同校準等級的校準物、正確度控制物質、樣本測量結果的溯源（修訂中）2.試劑“標準化”，試劑與校準物的關系3.測量終端用戶進行，但測量結果的溯源主體是制造商技術方面建立溯源性的過程就是賦值的全過程High order：合理選擇、無基質效應具有互換性校準：方法學考察，科學的統(tǒng)計處理：合理、有效的統(tǒng)計方法（賦值和性能評價中數據的取舍）不確定度評估：科學、有效、表征、合理（時間、對與錯）結果報告：表述正確、嚴謹規(guī)范的表述1.較高級別的參考物質試劑盒測量結果或產品校準物賦值溯源至XXX國家標準物質2.較高級別的參考測量程序試劑盒測量結果或

8、產品校準物賦值溯源至SI單位或XXX參考測量程序（參考測量程序的有效性、地位、程序是否不需要參照報告結果）3.沒有較高級別的（聲稱溯源至制造商的工作校準品或內部程序）工作校準物賦值時使用純物質、血清或抗原、抗體4.其他表述ID-MS法（高準確度）、重量法、需要更高級別校準物的參考測量程序（標準化方法）不宜作為聲稱的源，因其不是真正的源，他們是降低測量不確定度保證量值傳遞可靠性的方法溯源性保證 校準（與量值直接關聯(lián)）舉例：量值傳遞應講究有效， 外推應合理（線性，外推可以，非線性，外推風險較大）什么是有效：IU/mL=ng/mL AFP在AFP 1st RP(IS) 104 IU，在溯源時應考慮其

9、實際含量（純度、水分等）、分子量（預期用途、細胞培養(yǎng)和腫瘤來源的是否有區(qū)別）等 信息后可以進行這兩個單位的換算 盡量縮短溯源中的校準等級溯源性保證產品級（溯源鏈中較低級別）校準物的使用無法保證溯源性：對于測量而言，儀器大部分只是提供測量信號輸出（相對、比較），其量值傳遞的關鍵在于試劑本身, 加上產品校準物的量值亦真亦假，因此使用低級別的校準物進行的量值傳遞無法保證量值可靠性；同時應考慮校準物的互換性（不同廠家試劑的反應性可能盡不相同）從量值溯源的角度看：如果試劑盒使用的是標準化的方法（參考方法），那么每個廠家的結果在線性范圍內是可比的。但事實上，每個廠家試劑成分、原料來源、穩(wěn)定性、配制方法、以

10、及樣本試劑體積比等方面各有差異，在同樣的線性范圍下、使用該校準物校準后測量結果之間還是否可比。建立溯源性必需的環(huán)節(jié)不確定度溯源圖參照選擇賦 值工作校準物基質效應及互換性研究溯源ML選擇的/常設的測量程序溯源性確認實現(xiàn)溯源的關鍵實現(xiàn)溯源的途徑參考測量方法標準化（參考系統(tǒng)）參考物質參考實驗室一致化（量值傳遞的可延續(xù)性）我國參考測量體系的建立情況ICP-MS、ID-MS、分光光度法參考測量程序酶學、血脂、代謝物和小分子、無機離子、血細胞參考物質參考測量實驗室可獲得的途徑國際上的RMP國際上的CRM建立溯源性需考慮的因素測量結果/賦值結果量值通過參照對象進行量值傳遞測量程序存在多個輸入量，每個輸入量均

11、應分別溯源關鍵影響因素應進行相關驗證/確認法定計量范圍內的設備的計量，其他內部確認數據處理的科學性考慮校準物互換性科學合理評定不確定度報告的規(guī)范性校準鏈被測量定義的不足（血清、血漿、尿液）技術局限性（物質的量）分析物的異質性（亞型、衍生物）描述困難（酶、抗體、糖蛋白）特異性與選擇性不同（膽紅素）分析物復雜性（總蛋白）樣本特殊處理（修飾）對象：所有輸入量例如，測量模型：對象：關鍵影響量例如，試劑純度、稱量、溫度（測量、試劑、樣本）、pH、時間、波長互換性與可互換物質30年前，酶互換性與基質效應：數學關系一致性可修正(CRM)互換性：考慮其互換性，不是必須具有互換性互換性舉例-工作校準物互換性舉例

12、-產品校準物賦值1.賦值方法的選擇2.統(tǒng)計技術的選擇3.可接受標準的制定4.賦值方式的選擇校準值修正系統(tǒng)偏移不確定度1.識別影響因素：可能影響結果的所有方面2.評估關鍵因素：1/3、1/103.正確表達：末位對齊、有效位數、擴展因子4.預期用途：確認不確定度是否滿足終端用戶要求不確定度不確定度 規(guī)定每個校準等級的目標不確定度 通過減少校準次數來降低不確定度 正確理解、看待不確定度建立溯源性的基本要素描述被測量量的類/特性該量的基質分析物（單位）可測量特性樣本組分質量、濃度、活性除分析物之外的組分（按照預期用途選擇）被測量溯源首先要確定被測量對于化學結構清楚：被測量明確(Glu、Crea)對于被

13、測量復雜/不穩(wěn)定：(TP、TBIL)對于生物大分子：存在不同亞型，每個型別的測量在臨床應用上意義不大(HCG、HGB)，此時被測量代表一組分子（生理屬性），通常選用其片段嵌入方式(單抗、多抗)、分離(酶解)被測量該情況下，盡管聲稱不同程序測量結果會有差異，但仍假設：測量部分代表整個分子當被測量和測量的量不一致時，在說明書中一定要注明！被測量例如，當被測量為代表時，應在說明書及溯源文件中明確其代表部分(CYK-19、CYFRA21-1)選擇參照對象單位定義測量程序測量標準CRM參考測量程序：JCTLM列表RM（CNAS：RMP）（非質量控制物質）純物質SI單位國家/行業(yè)標準發(fā)布其他其它（主成分）

14、選擇參照對象SI單位測量程序國際計量委員會（CIPM）在1994年成立了物質的量咨詢委員會（CCQM），臨時確認以下測量原理可能會作為一級參考測量程序：同位素稀釋/質譜（ID/MS）、庫侖法、重量法、滴定法，用于重量摩爾滲透濃度測定的冰點降低法等。測量程序選擇參考測量程序：“決定性方法”與一級參考測量程序測量標準被測量特性值不確定度預期用途 注意事項CRMRM:RMP（ISO Guide34 and/or ISO 15194）更替測量標準選擇舉例公認水平發(fā)布權威機構證書情況參考物質（標準物質）材料來源性狀和制備情況基質效應和互換性預期用途選擇參照對象溯源的最后一種情況：無更高級別測量標準和程序

15、測量標準：測量程序：內部程序工作校準品程序的考察、科學性、嚴謹性(沒有明確的溯源和不確定度，制造商負責證明符合預期用途)物質、分析物確認 回收/修正常規(guī)方法之間的比對，不屬于溯源范疇但建立溯源性后可以通過比對等方式進行確認(試用)選擇校準CRM&RMPM（主成分/重組/片段） 校正系數/關鍵點物質：校準物質的評價和相關聲明方法：所校準方法的建立、確認和驗證（回收）溯源性的確認溯源校準確認計量學溯源校準應具備以下條件：1.測量的量2.程序結果之間的關系3.校準物互換性不滿足時，不能保證常規(guī)樣本結果向參考測量程序的溯源溯源校準確認計量學溯源校準確認：1.工作校準物的互換性評估2.產品校準物可以考慮

16、互換性（實際樣本）3.斜率與截距4.產品校準品定值（使用人源樣本組）溯源校準確認隱含條件：性能評估量值傳遞中必需進行的性能評估有： 精密度 準確度，可接受標準 線性，可接受標準溯源校準確認精密度： 濃度選擇（對總體的代表性） 樣本類型（實際樣本、制備物） 變異源（試劑、操作者、場所、校準等） 每一試驗批所需的重復次數 評估期 統(tǒng)計規(guī)則 結果（均值、SD、CV） 適用時，統(tǒng)計離群值的識別（不要單憑統(tǒng)計剔除離群值）溯源校準確認準確度（方法學評估，非溯源校準）： 可用于評價的標準物質 方法學比對 回收試驗溯源校準確認線性： 基質樣本 試驗分段原則 統(tǒng)計方法 對線性相關系數和線性偏差的正確認識 線性和

17、準確度不要混淆 關于線性質控做線性的說明（除非用其他已知準確度方法賦值）理想的溯源校準確認條件CRM參考測量服務提供者正確度校準基質的PT樣本工廠校準物質控校準常規(guī)樣本結果工廠校準物校準如何進行校準確認更高級別的沒有更高級別沒有更高級別參考測量程序程序(P&H)程序(Calibrator)終端用戶常規(guī)測量程序不同來源的常規(guī)測量程序常規(guī)測量程序（P&N）實際臨床樣本組可接受的性能標準溯源的建立與確認舉例工廠校準物賦值（無基質效應、具有互換性、即使線性不建議只使用一個濃度） CRM（可用的）直接校準系統(tǒng)進行賦值，注意試劑方法的標準化 參考測量程序（一級、二級）建立一定數量的血清樣本組，應考慮基質效

18、應，使用參考測量程序進行賦值。正確度控制 使用較高級別的另一個CRM驗證量值傳遞的正確度溯源的建立與確認舉例賦值結果確認 用上一步確定的賦值結果進行校準，測量血清樣本集 進行同樣的回歸，得到斜率，并計算偏差（非擬合的線性偏差），與質量控制目標值比較溯源的建立與確認方法舉例校準物賦值（無基質效應、具有互換性、即使線性不建議只使用一個濃度） CRM：無 參考測量程序（一級、二級）：無純度物質、抗體、片段，賦值方案（溯源聲稱至內部程序/前批，當分析物對被測量的代表性不足時，在結果的報告上應注意）正確度控制 只能是單獨制備一個物質作為驗證用物質（注意不要使用同一來源同一批次的材料制備）溯源的建立與確認

19、舉例賦值時需考慮考慮校準物本身的特性考慮不同實驗室、不同測量批次、嚴格的實驗條件建議使用實驗室內部質控物質進行實驗室質量控制（生化）產品溯源性-建立GLU測量結果的溯源性GBW&GBW(E)（基質）MP（選擇的）工作校準物（基質）產品校準物MP（常設的）RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（生化）產品溯源性-建立LDH測量結果的溯源性ERM AD-453（純物質）RM（IFCC RMP）GBW&GBW(E)(基質)MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物（基質）產品校準物RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（生化）產品溯源性-建立CK-MB測量結果的溯源性ERM AD-455（純物質）內部程序回收（

20、修正）MP（選擇的）工作校準物（基質）產品校準物MP（常設的）RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（生化）產品溯源性-建立TBil測量結果的溯源性SRM 916分光光度法GBW&GBW(E)(基質)MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物（基質）產品校準物(替代物)RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（生化）產品溯源性-建立IMA測量結果的溯源性方法標準化方法定義的內部程序（文獻）內部程序MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物（基質）產品校準物(替代物)RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（生化）產品溯源性-建立CO測量結果的溯源性2檢測原理純物質內部程序MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物（基質）

21、產品校準物(替代物)RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（體液）產品溯源性-建立RBP（尿液）測量結果的溯源性提純的純物質回收（修正）內部程序MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物（基質）產品校準物RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（體液）產品溯源性-建立潛血（尿液）測量結果的溯源性純物質（HGB）內部程序按照細胞中含量校準半定量尿干化學（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（體液）產品溯源性-建立PLT（血液）測量結果的溯源性ICSH RMP,FCMRM（RMP）MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物（基質）產品校準物(模擬物)RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（體液）產品溯源性-建立凝血時間（血液）測

22、量結果的溯源性國際約定的測量程序質控血漿MP（選擇的）工作校準物（基質）MP（常設的）產品校準物(模擬物)RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（免疫）產品溯源性-建立HCG測量結果的溯源性RM（3rd、4th）RM（RMP）WHO 賦值方案MP（選擇的）工作校準物（基質）RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（免疫）產品溯源性-建立AFP測量結果的溯源性RM（RMP）賦值方案5%，正確理解不確定度MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物產品校準物RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（免疫）產品溯源性-建立TSH測量結果的溯源性RM（RMP）不同且相互關聯(lián)MP（選擇的）工作校準物MP（常設的）產品校準物R

23、MP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（免疫）產品溯源性-建立Insulin測量結果的溯源性WHO 197866/304RM（RMP）MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物產品校準物RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（免疫）產品溯源性-建立PCT測量結果的溯源性純物質內部程序回收（修正）MP（選擇的）工作校準物（基質）產品校準物（重組）MP（常設的）RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（免疫）產品溯源性-建立CA19-9測量結果的溯源性參照RIA1116-NS-19-9內部程序：溯源至使用1116-NS-19-9校準的內部測量程序回收（修正）MP（選擇的）MP（常設的）工作校準物（基質）產品校準物RM

24、P（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（核酸）產品溯源性-建立UU測量結果的溯源性分離、提取、鑒定核酸：純度、濃度MWUUMP（選擇的）工作校準物產品校準物MP（常設的）RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（核酸）產品溯源性-建立HPV測量結果的溯源性06/202（Type 16）RM（ RMP）IU（GEq）MP（選擇的）工作校準物（基質）產品校準物MP（常設的）RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果（藥敏試驗）產品溯源性-建立耐甲氧西林菌測量結果的溯源性甲氧西林RM（RMP）MP（選擇的）工作校準物RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果微生物鑒定(定性)產品討論-金葡鑒定ATCC 25923質控定性試驗分離鑒定(四種方法)RMP（終端的）常規(guī)樣本的測量結果測序（序量）產品討論-HLA等位基因檢測IMGT/HLASBT、SSO、SSP(序量)已知分型的DNA用戶常規(guī)測量程序（SBT、SSO、SSP）樣本分型結果核酸類產品的溯源非SI單位，但是為國際公認的單位常見的關于溯源圖舉例-不規(guī)范表述常見的關于溯源圖舉例-不規(guī)范表述常見的關于溯源圖舉例-不規(guī)范表述建立溯源性必需的資料溯源性. 概述（包括校準確認）. 校準品賦值（源的選擇）. 常規(guī)測量的標準化. 參考測量的標準化. 試劑標準化. 基質效應和互換性. 不確定度溯源性相關研究資料正確看待溯源（造成測量結果不可比的因素）Higher