觀察護肝解毒沖劑的抗肝損傷作用

1、觀察護肝解毒沖劑的抗肝損傷作用【關鍵詞】護肝解毒沖劑,；,大鼠,；,肝損傷摘要：目的觀察護肝解毒沖劑的抗肝損傷作用。方法用D半乳糖胺DGaLN復制急性肝損傷模型；采用四氯化碳l4誘導慢性肝損傷模型。實驗完畢時分別取血測ALT，AST活性和總蛋白TP，白蛋白ALB，白/球比例A/G，透明質酸HA，同時均取肝組織做病理檢查。結果急性肝損傷時，護肝解毒沖劑能降低ALT，AST活性及減輕肝細胞壞死及炎細胞浸潤；慢性肝損傷時，其能降低ALT，AST和HA，升高TP，ALB和A/G，并減輕肝細胞變性，減少纖維組織增生。結論護肝解毒沖劑對大鼠DGaLN所致急性肝損傷和l4所致慢性肝損傷均具有保護作用。關鍵詞

2、：護肝解毒沖劑；大鼠；肝損傷護肝解毒沖劑是由茵陳、梔子、大黃制、白術、云苓、白花蛇舌草、金錢草、蚤休、赤芍、丹參、郁金等組成,具有清熱解毒退黃、涼血活血及健脾作用，是治療慢性活動性乙型肝炎的純中藥制劑，為我國“八五攻關研究第三類新藥，為了觀察護肝解毒沖劑的主要藥效，本實驗研究其對DGaLN所致急性肝損傷和l4所致慢性肝損傷的作用。現報道如下.1材料與方法1.1材料HGJ，10g/包，含原生藥18.3g,由瀘州醫(yī)學院HGJ課題組、瀘州醫(yī)學院藥物研究所共同研制，批號930405。復肝康沖劑FGK：10g/包，批號930513，遼寧省中醫(yī)藥研究所制藥廠消費。實驗時均用蒸餾水配成所需濃度口服液。DGa

3、LN：批號940504。由重慶醫(yī)科大學生物化學教研室提供，使用時用0.9%生理鹽水配成10%溶液。l4，由重慶化學試劑總廠消費，批號920512，臨用時溶于植物油中，配成10%的l4溶液。1.2方法HGJ，HGJ，HGJ,復肝康陽性對照組FGK。HGJ，HGJ，HGJ組分別以44，22，11g生藥kg1d1(相當于臨床用量的13.36，6.68，3.34倍)灌胃1次，復肝康陽性對照組同時以復肝康沖劑3.51g生藥kg1d1(相當于臨床用量的3.34倍)灌胃1次,正常對照組和模型組定時以等容積生理鹽水灌胃1次。連續(xù)給藥7d，實驗期間動物正常飲水，以標準顆粒飼料喂養(yǎng)。在第5天下午，對HGJ治療各組

4、、模型組和陽性對照組給予DGaLN600gkg1腹腔注射1次1，正常對照組用生理鹽水腹腔注射1次，注射前禁食12h，注射后觀察動物的一般情況并繼續(xù)禁食。于48h后每組取10只大鼠處死，取血檢查ALT，AST，并取肝組織作病理切片檢查。慢性肝損傷實驗2是將60大鼠隨機分成4組，即正常對照組、模型組、HGJ大、小劑量HGJ、HGJ組。HGJ，HGJ分別為44，11g生藥kg1d1(相當于臨床用量的13.36，3.34倍)。按常規(guī)飼養(yǎng)。模型組及HGJ，HGJ組于實驗開場時即皮下注射10%l4油劑5lkg1，2次/周，連續(xù)3個月。于皮下注射10%l4第2個月起用HGJ灌胃給藥，同時正常對照組和模型組給

5、予等容量的生理鹽水灌胃，均為1次/d，連續(xù)2個月，其間觀察動物的一般狀況，于末次給藥24h后每組取10只大鼠斷頸取血，測ALT，AST，TP，ALB，A/G和HA。每只大鼠取同一部位的肝臟一塊固定于10%福爾馬林溶液做病理切片。2結果2.1一般狀況注射DGaLN8h后，模型組大鼠出現精神萎靡，被毛蓬松，治療組情況稍好。皮下注射10%l4，模型組大鼠于第7周開場出現精神萎靡、背躬、被毛蓬松，并開場出現死亡，解剖可見腹腔積液，早期死亡者可見肝臟花斑樣改變，晚期死亡者肝色蒼白、質硬，死前肛周潮濕，體形消瘦。治療組病癥有所改善，死亡動物數減少。2.2HGJ對DGaLN急性肝損傷大鼠血清中ALT，AST

6、程度的影響結果見表1。表1HGJ對大鼠急性肝損傷AT，AST的影響略與對照組比擬,1P0.01;與模型組比擬,2P0.05,3P0.01,n=102.3HGJ對四氯化碳慢性肝損傷肝生化指標和血清肝纖維化指標透明質酸HA的影響結果見表2。表2HGJ對慢性肝損傷對肝生化指標和透明質酸HA的影響略與對照組比擬,1P0.01,*P0.05；與模型組比擬，2P0.01,n=102.4肝臟病理改變按毒理病理要求，對各組大鼠肝臟進展13項指標即肝細胞胞漿疏松化、濁腫、脂肪變、水變性、嗜酸性變、壞死、炎細胞浸潤、枯否氏細胞增生、淤血、出血、肝細胞增生、結締組織增生、早期假小葉形成等全面觀察。急性肝損傷實驗中空

7、白對照組肝組織構造清楚，肝細胞無變性、壞死、出血。模型組全部大鼠均有肝細胞壞死及炎細胞浸潤，且均較其余實驗組重。復肝康組肝細胞胞漿疏松化、脂肪變性、水變性比HGJ各劑量組重，HGJ大劑量組肝細胞胞漿疏松化比中、小劑量組少，且無脂肪變性。慢性肝損傷實驗模型組肝臟肉眼觀呈淺灰色、質地變硬，鏡下見肝細胞變性如胞漿疏松化、脂肪變、水變性等嚴重，74%病例結締組織增生，有早期肝硬變傾向；二劑量組肝細胞變性比模型組明顯減輕，只有11%15%病例有結締組織增生，未見有早期肝硬變改變，大劑量組病變更輕。3討論DGaLN是肝細胞的磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，可造成肝彌漫性壞死和炎癥，與臨床上病毒性肝炎的肝臟病理變化

8、相似。當DGaLN進入體內后與磷酸尿苷UDP結合形成UDPD半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭，從而使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質合成受抑制，限制了細胞器及酶的生成和補充，使肝細胞受損13。本實驗模型組ALT，AST明顯增高，與空白對照組比擬P0.01。由于ALT主要存在于肝細胞漿中，AST存在于肝細胞胞漿和線粒體中，肝細胞細胞膜通透性增加或破損，胞漿內ALT，AST釋放入血，使血清中二者均升高；血清ALT程度的上下可靈敏反映肝細胞變性、壞死的程度，因其大部分存在于胞漿中。說明模型復制是成功的。HGJ中、大劑量治療組的ALT，AST與模型組比擬明顯降低P0.01，且病理檢查的結果顯示，HG

9、J各治療組能減輕病理損傷如肝細胞壞死及炎細胞浸潤，說明HGJ能減輕DGaLN的肝損傷作用。l4為常用的肝纖維化動物模型化學誘生劑，其所致肝纖維化改變與人類肝纖維化的形態(tài)特征相似，比擬合適于肝纖維化特別是有活動性病變的慢性肝病所致肝纖維化的防治作用及其作用機制的研究。l4對肝毒性損傷主要是由于經肝細胞微粒體細胞色素代謝裂解成三氯甲基自由基l3，l3可進一步氧化反響形成具有更強反響活性的基團，從而產生脂質過氧化作用，破壞肝細胞的膜性構造4，5。此損傷不斷反復，繼之有肝細胞壞死、炎癥激活肝臟內Kupffer細胞、內皮細胞等，使其釋放各種細胞因子，細胞因子進一步激活靜息狀態(tài)的星狀細胞HS，使之轉化為肌成纖維樣細胞FBL，FBL過度增殖，同時大量合成各種細胞外基質E，E過度沉積而導致肝纖維化6。由于此模型的死亡率高，故于造模開場時的動物數應多增加些。l4所致慢性肝損傷時ALT，AST，HA均升高，TP，ALB，A/G均降低。肝纖維化時，肝間質成纖維細胞增生，合成HA增加，肝內細胞受損，對血液中HA的攝取及降解障礙，導致HA升高。而肝細胞是合成蛋白質場所，肝細胞受損時合成蛋白質功能降低，血中白蛋白降低，但肝細胞同時激活肝免疫系統(tǒng)，使球蛋白合成增加，故A/G降低。HGJ兩個劑量組能降低A