隱球菌抗原檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、隱球菌抗原檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1目的規(guī)范隱球菌抗原檢測試驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2.操作授權(quán)人經(jīng)過培訓(xùn)并通過考核的微生物實驗室工作人員。3.用途：作為隱球菌病的輔助診斷試驗，本檢測系統(tǒng)利用簡單快速乳膠凝集反應(yīng)對血清和腦脊液中隱球菌的莢膜多糖抗原進(jìn)行定性檢測。4原理本檢測系統(tǒng)利用了包被在乳膠顆粒中的抗隱球菌抗體與含有隱球菌莢膜多糖抗原的樣本發(fā)生凝集反應(yīng)。血清中，風(fēng)濕因子的存在阻礙了此抗原的檢測，本實驗通過鏈酶蛋白酶對血清樣本的預(yù)處理不僅減少了非特異性干擾。而且還加強(qiáng)了對隱球菌莢膜多糖抗原的檢測。5樣本要求A、腦脊液：1）常規(guī)操作方法收集無菌樣本2）1000g離心15min以確保去除所有白細(xì)胞和微粒體3）小心

2、吸取腦脊液溶液加入無菌容器并密封4）樣本可以立即處理，冷藏，在-20冷藏保存。5）100孵育腦脊液要本5min 6）備用 。 B、血液 1）常規(guī)操作方法收集全血無菌樣本。含抗凝血劑的樣本無效 2）1000g離心15min 3）小心吸取血清溶液加入無菌容器密封 4）樣本可以立即處理，冷藏，在-20冷藏保存。5）在50ul鏈酶蛋白酶中加入300ul血清并用密封 6）56孵育血清/鏈酶蛋白酶溶液30min 7）加入一滴鏈酶蛋白酶抑制液終止反應(yīng)9）備用。C、試劑準(zhǔn)備 按照提示劑量用蒸餾水或去離子水制備鏈酶蛋白酶，鏈酶蛋白酶應(yīng)該以50ul的量進(jìn)行分裝。6操作步驟：6.1在環(huán)狀玻片中分別加入25ul隱球菌

3、抗原陽性對照，陰性對照和經(jīng)過熱處理的腦脊液或鏈酶蛋白酶處理的血清樣本于不同的分離環(huán)中。6.2每個環(huán)中加入25ul隱球菌乳膠6.3利用分離的涂藥棒徹底混合環(huán)中物質(zhì)6.4室溫下手動旋轉(zhuǎn)或者100rpm（+-25）旋轉(zhuǎn)儀上5min7.結(jié)果判斷陰性 ：無可見團(tuán)塊的均勻顆粒懸浮液 陽性：清晰且明顯的顆?；驂K狀8.質(zhì)量控制（有效性）：乳膠對照：周期性的利用隱球菌抗原陽性對照對隱球菌敏感性進(jìn)行檢測。如果隱球菌乳膠試劑敏感性良好，陽性對照明顯。鏈酶蛋白酶對照：至少每月一次對冷凍鏈酶蛋白酶水解活性進(jìn)行檢測，按照血清樣本準(zhǔn)備用300ul鏈酶蛋白酶對照替換血清樣本進(jìn)行操作。同時對經(jīng)過鏈酶蛋白酶處理的和未經(jīng)鏈酶蛋白酶對照通過利用上述實驗操作進(jìn)行檢測。未經(jīng)處理的鏈酶蛋白酶對照為陽性，經(jīng)過處理的應(yīng)為陰性。若后者反應(yīng)為陽性，則水解活性已經(jīng)降低，則需要重新制備鏈酶蛋白酶試液即復(fù)水、分裝、冷凍和檢測。9.注意