中和確認實驗HBsAg

1、中和確認實驗對HBsAg弱反應性結(jié)果的確認及應用評價1目的：應用中和確認試驗對乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反應性樣本的結(jié)果進行確認。 2方法：采用電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)(ECLIA)檢測乙型肝炎表面抗原，對從中篩選的26例弱反應性樣本進行中和確認實驗，并對結(jié)果進行分析評價。 3結(jié)果：26例弱反應性標本中，經(jīng)確認陽性的有22例（84.6%）,陰性2例（7.7%）,不確定2例（7.7%）。 4結(jié)論：對于HBsAg弱反應性標本，應用中和確認實驗確認。5許多實驗室采用時間分辨免疫熒光法（TRFIA）和電化學發(fā)光法（ECLIA）代替?zhèn)鹘y(tǒng)的ELISA法，其檢測的靈敏度特異性都有了顯著提高，有效避免了乙

2、型肝炎病毒感染的漏檢，和輸血、器官移植中的安全隱患，以及由此引起的醫(yī)患糾紛。但檢測靈敏度提高的同時，弱反應性陽性標本中是否存在假陽性？為此我們采用HBsAg確認試驗，對弱反應性標本進行中和確認實驗。6實驗原理該實驗是根據(jù)特異性抗體的中和原理進行。由于polyclonal HBsAg特異性抗體附著在乙肝病毒表面抗原的優(yōu)勢免疫表位，從而阻塞了Elecsys HBsAg檢測中所使用的抗體結(jié)合部位。確認試劑中過量的抗HBs抗體中和了該樣本中所有HBsAg，在之后的Elecsys HBsAg檢測中，與初測值相比降低了COI值。（樣本信號/cutoff)7弱反應性的標本的處理經(jīng)E170 HBsAg檢測中的

3、弱反應性的標本，用證實試劑和對照試劑按如下方式平行處理：表 1 COI7標本的處理8表2 7=COI30的標本的處理9表4 precicontrol HBsAg2標本的處理10充分混勻以上經(jīng)處理的反應物，然后置2-8度溫育過夜。證實試劑中過量的抗HBsAg抗體中和標本中的HBsAg。在隨后進行的Elecsys HBsAg實驗中，標本的cut-off指數(shù)(COI)將比原值降低。 11表5 實驗結(jié)果的判定判定條件 結(jié)果 標本與證實試劑反應的COI/標本與對照試劑反應的COI50%確認陰性 標本與對照試劑反應的COI30 4310合計 26222213 討論本次實驗，26例弱反應性樣本中有2例判斷為

4、不確定，占7.7%，分析未被確認的原因認為是COI值太低（均1.1）,因陽性值過低，在預處理過程中，被對照試劑稀釋，而使得標本與對照試劑反應后COI1,無法判定確認結(jié)果。26例弱反應性標本有24例得到了確認，達92.3%，22例為確認陽性，2例為確認陰性。14有報道稱HBV感染者中存在一部分隱匿性乙型肝炎感染的情況，即HBV持續(xù)存在，肝內(nèi)可檢出病毒，但血清中不能檢出HBsAg，病毒HBVDNA低水平或陰性產(chǎn)生HBsAg弱陽性的現(xiàn)象可能是患者免疫功能受損后，機體與HBV或其產(chǎn)物產(chǎn)生新的平衡反應，一般情況下不具有嚴重致命性，但部分滴度低的HBsAg陽性者仍存在HBV復制，因此在機體免疫功能受損時可導致肝臟病情加重，甚至癌變。15本次試驗弱反應性標本出現(xiàn)了不確定和假陽性，因此使