測試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則征求意見

1、C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）目錄一、前言 錯(cuò)誤!未定義書簽。二、適用范圍 錯(cuò)誤!未定義書簽。 TOC o 1-5 h z 三、注冊申報(bào)資料要求 2（一）綜述資料2（二）產(chǎn)品說明書 錯(cuò)誤!未定義書簽。（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明 8（四）注冊檢驗(yàn)8（五）主要原材料研究資料 錯(cuò)誤!未定義書簽。（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 錯(cuò)誤!未定義書簽。（七）分析性能評估資料 I.Q.（八）參考值（參考范圍）確定資料 錯(cuò)誤!未定義書簽。（九）穩(wěn)定性研究資料 錯(cuò)誤!未定義書簽。（十）臨床試驗(yàn)資料 錯(cuò)誤!未定義書簽。四、名詞解釋 錯(cuò)誤!未定義書簽。五、參考文獻(xiàn) 錯(cuò)誤!未定義

2、書簽。C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）一、前言本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫， 同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的技術(shù)審評提供參考。本指導(dǎo)原則是對C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用， 若不適用， 需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)， 并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件， 但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)， 亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行， 如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法， 也可以采用， 但需要提供詳細(xì)的研究資料

3、和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。二、適用范圍C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒是指利用免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨法、 免疫熒光法等基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對人全血、血清、血漿或其他體液中的 C 反應(yīng)蛋白進(jìn)行體外定量測定的試劑。三、注冊申報(bào)資料要求（一）綜述資料C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein , CRP）由肝細(xì)胞合成，在胎 兒期產(chǎn)生，非母體胎盤傳遞。其產(chǎn)生機(jī)理是：當(dāng)機(jī)體受感染或組織受損傷時(shí)巨噬細(xì)胞和其

4、他白細(xì)胞等被激活，產(chǎn)生白細(xì)胞介素 -6（IL- 6） 、白細(xì)胞介素 -1 （ IL-1 ） 、腫瘤壞死因子TNF-a 等細(xì)胞因子及其他介導(dǎo)物，這些細(xì)胞因子和介導(dǎo)物到達(dá)肝臟，刺激肝細(xì)胞和上皮細(xì)胞合成CRP。在結(jié)本上，CRP含5個(gè)多肽鏈亞單位，非共價(jià)地結(jié)合為盤形 多聚體，分子量為11.5萬-14萬。CRP是一種典型的急性時(shí)相蛋白， 在多種炎癥、組織損傷、惡性腫瘤等疾病中都可升高。常規(guī) CRP 測定包括定性、 半定量和定量分析， 可用于評價(jià)感染，組織損傷和炎癥性疾病。對于常規(guī)的 CRP 測定，參考值通常被認(rèn)為是臨床上顯著的含量高于 10 毫克 / 升。在健康人群血液中 CRP 水平低于 5 毫克 /

5、 升，而在各種條件下，急性炎癥四到八小時(shí)內(nèi)后，CRP值達(dá)到約20至500毫克/升。常規(guī)CRP作為急性炎癥評估指標(biāo)比紅 細(xì)胞沉降率（ESR）和白細(xì)胞計(jì)數(shù)更敏感、更可靠。超敏C反應(yīng)蛋白線性范圍低端低于常規(guī) CRP,這種較低的范圍可擴(kuò)大使用適應(yīng)癥， C 反應(yīng)蛋白是非特異性的， 必須結(jié)合臨床癥狀綜合評估， 不能作為特定的疾病或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的確診依據(jù)。圖 1 超敏 CRP 與常規(guī) CRP 的區(qū)別超敏 C 反應(yīng)蛋白常見的用途可作為心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別的輔助手段。 配合傳統(tǒng)的急性冠脈綜合征臨床診斷使用， 可作為冠狀動(dòng)脈疾病或急性冠脈綜合征復(fù)發(fā)的預(yù)警指示物，也有心臟C 反應(yīng)蛋白（cCRP）之稱。心臟CRP與超敏C

6、反應(yīng)蛋白類似，線性范圍低端低 于常規(guī)CRP, hsCRP和cCRP之間的差異不是被測物質(zhì)本身，而是 根據(jù)提供的臨床研究，擴(kuò)展了冠狀動(dòng)脈疾病評估的預(yù)期用途， 臨床研 究應(yīng)能證明cCRP在評估心血管疾病疾病時(shí)的有效性。圖2心臟CRP的臨床意義表1各種CRP的區(qū)別及性能要求常規(guī)CRP超敏CRP心臟CRP用途感染，組織損傷和炎癥性疾病 的評價(jià)。提供炎癥性疾病的診 斷，治療和監(jiān)控的信息?？深A(yù)測正常人群體內(nèi)是可作為心血管疾病風(fēng)險(xiǎn) 識(shí)別的輔助手段。配合 傳統(tǒng)的急性冠脈綜合征 臨床診斷使用，cCRP可作為冠狀動(dòng)脈疾病或 急性冠脈綜合征復(fù)發(fā)的 預(yù)警指示物。含有不可祭完的炎癥Cutoff值Cutoff:約 10m

7、g/ L 。健康人群： 5mg/L到上限 1.0 mg/L 到 010.0mg/L 1.0 mg/L 至 ij10.0mg/L靈敏度明確在線性范圍低端的性能確定定量限（功能靈敏確定定量限（功能靈敏度）度）綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、 研究結(jié)果的總結(jié)評價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容， 其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、 臨床應(yīng)用情況、 性能指標(biāo)等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。應(yīng)符合體外診斷試劑注冊管理辦法（試行） （以下簡稱辦法 ） 和體外診斷試劑注冊申報(bào)資料基本要求 （國食藥監(jiān)械 2007 609 號）的相關(guān)要求。（二

8、）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息， 是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。 產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外， 其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性， 翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。 產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致， 如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)， 則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注， 并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。結(jié)合體外診斷試劑說明書編寫

9、指導(dǎo)原則的要求，下面對C反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明， 以指導(dǎo)注 冊申報(bào)人員更合理地完成說明書編制?！绢A(yù)期用途】C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、全血和 / 或其他體液中的 C 反應(yīng)蛋白濃度，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。注 1 ： CRP 值是非特異性的，不能作為特定的疾病或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的檢測指標(biāo)，不建議把CRP 的具體臨床診斷意義列入預(yù)期用途。注2:C反應(yīng)蛋白包括常規(guī)C反應(yīng)蛋白（CRP）、超敏CRP（hsCRP） 和心臟 CRP（ cCRP ） ，具體根據(jù)臨床試驗(yàn)核定。【主要組成成份】1 ）說明試劑包含主要組分的名稱、數(shù)量、比例或濃

10、度等信息。2 ）試劑中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑 / 耗材的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。3 ）試劑盒中不包含質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材，應(yīng)說明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號等詳細(xì)信息；如包含校準(zhǔn)品和/ 或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學(xué)來源，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的檢測范圍?！緝?chǔ)存條件及有效期】試劑的效期穩(wěn)定性、 開封穩(wěn)定性、 運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹。并對開封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、 濕度及效期等條件予以明確?！緲颖疽蟆?重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：（ 1 ）樣本采集：采集時(shí)間點(diǎn)是否受臨床

11、癥狀、用藥情況等因素的影響， 具體采集部位及類型， 詳述具體的操作方法或列出相關(guān)操作指南文件以指導(dǎo)使用者（最好能夠給出具體圖示） ，盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對實(shí)驗(yàn)造成的影響。（ 2 ）樣本處理及保存：樣本的保存條件及期限（短期、長期） 、運(yùn)輸條件等。 冷藏 / 冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫， 凍融次數(shù)限制?！具m用機(jī)型】所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。【檢驗(yàn)方法】 詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：1 ）實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度等注意事項(xiàng)，檢驗(yàn)試劑及樣本復(fù)溫等要求。2 ）試劑使用方法（手工 / 半自動(dòng) / 全自動(dòng)） 、注意事項(xiàng)。3 ）詳述待測樣品的預(yù)處理

12、方法、步驟及注意事項(xiàng)。4 ）明確樣本檢測加樣量及觀察時(shí)間。5 ）詳述配套儀器設(shè)置過程?！緟⒖贾担▍⒖挤秶?】應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考值（范圍） ，簡單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考值（范圍） ” 。【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】結(jié)合質(zhì)控品對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。 本試劑的檢測結(jié)果僅供臨床參考， 對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/ 體征、 病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。 如存在 檢測灰區(qū) ， 應(yīng)對灰區(qū)結(jié)果的處理方式一并詳述。 明確有可能存在的數(shù)值升高因素及數(shù)值降低因素，明確 ， 說明

13、對何種條件下需要進(jìn)行重復(fù)檢測，以及在重復(fù)檢測時(shí)對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述?！緳z驗(yàn)方法局限性】（ 1 ）干擾物質(zhì)及HOOK 效應(yīng)對檢測結(jié)果的影響；（ 2 ）操作時(shí)必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程，精心操作才能得到正確結(jié)果，對操作程序作任何修改都可能影響結(jié)果；（ 3 ）有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析某些未知成分屏蔽了抗原決定簇使之無法與抗體結(jié)合； C 反應(yīng)蛋白抗原隨著樣本放置時(shí)間的延長和外界溫度上升逐漸降解無法被抗體識(shí)別；不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、樣本中被測物質(zhì)濃度過低等均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述以下性能指標(biāo)：注 1 ： 由于 C 反應(yīng)蛋白目前尚無國家參考品， 故選用國際約定或

14、行業(yè)參考品，以后國家參考品若建立，采用國家參考品。注 2 ：對線性范圍、分析靈敏度等的最低要求見表1 。（ 1 ）準(zhǔn)確度：檢測 線性 范圍內(nèi)幾個(gè)濃度點(diǎn)的 C 反應(yīng)蛋白國際約定或行業(yè)參考品，檢測濃度 3mg/L時(shí)，結(jié)果誤差在20%內(nèi)；檢測濃度3mg/L時(shí)，結(jié)果誤差應(yīng)在15% （建議絕對偏差）內(nèi)。注 1 ：最低不得低于衛(wèi)生部質(zhì)控允許范圍。注2: hsCRP檢測參考品濃度推薦1mg/L左右，CRP推薦10mg/L左右。(2)線性范圍：確立線性范圍至少應(yīng)取 5點(diǎn)(包括下限、中限及 上限)，每次應(yīng)重復(fù)測定三次，計(jì)算出直線方程 y=a+bx ,相關(guān)系數(shù) r 值 A0.990。(3)分析靈敏度：說明試劑的分

15、析靈敏度或不高于某濃度水平， 簡單介紹確定方法，對功能靈敏度如何研究可一并注明。(4)重復(fù)性：同一批次的檢測試劑對檢測范圍內(nèi)某個(gè)濃度的C反應(yīng)蛋白樣本進(jìn)行重復(fù)檢測10次，變異系數(shù)CV (%) 15% o(5)批間差：三個(gè)批次的檢測試劑對檢測范圍內(nèi)某個(gè)濃度的C反應(yīng)蛋白樣本進(jìn)行重復(fù)性檢測，其變異系數(shù)CV (%)值應(yīng)W20%。檢測結(jié)果計(jì)算公式如下：式中：xmax x1, x2, x3中的最大值；Xmin X1，X2，X3中的最小值；XT 總均值。.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：(1)有關(guān)人源組分(如有)的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可 能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-A

16、b、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕 對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。(2)建議實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境要求，如溫度、濕度、電磁環(huán)境等。(3)對采集樣本的要求，建議使用新鮮血液，不建議使用高脂乳 糜樣、黃疸、高類風(fēng)濕因子樣本，勿使用溶血樣本，明確樣本的處理 辦法。（4 ）對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都視為傳染源進(jìn)行處理。（ 5 ）其他有關(guān)C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒的注意事項(xiàng)。（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合體外診斷試劑注冊管理辦法和體外診斷試劑注冊申報(bào)資料基本要求的相關(guān)規(guī)定。另外，對于國產(chǎn)試劑，應(yīng)參考中國生物制品規(guī)程 （ 2000 年版） ，將擬申報(bào)產(chǎn)品

17、的主要原材料、 生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后， 并在正文的“產(chǎn)品分類”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。作為定量檢測試劑盒， C 反應(yīng)蛋白產(chǎn)品的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)： 外觀檢查、 物理檢查、 準(zhǔn)確度、 線性范圍、 分析靈敏度、精密度 等。如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國家/ 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。（四）注冊檢驗(yàn)根據(jù)辦法要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、 具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。由于 C 反應(yīng)蛋白目前尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。（五）主要

18、原材料研究資料試劑盒所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗(yàn)資料。如抗體為申請人自制， 則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價(jià)等） ，確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)； 如抗體為申請人外購， 則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源， 外購方名稱， 提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書， 詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。其他主要原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如包被板、反應(yīng)緩沖液等， 申請人應(yīng)詳述每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。 若為外購， 應(yīng)詳述每一原輔料的外購方名稱并提交外購方出具

19、的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書。企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料。（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料. 主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。. 產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹。.抗體包被 / 致敏工藝研究： 申請人應(yīng)考慮如包被液量、 濃度、 時(shí)間、溫度等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。.實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)條件確定： 申請人因考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、pH 值等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請人應(yīng)考慮樣品加樣方式、 加樣量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響， 通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量

20、。 如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法。 確定反應(yīng)所需其他物質(zhì)用量（標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)物、底物等）的研究資料。固相載體、顯色 （發(fā)光 ） 系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。（七）分析性能評估資料企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對于 C 反應(yīng)蛋白定量檢測試劑盒建議至少選擇3 批產(chǎn)品對以下分析性能進(jìn)行研究： 分析靈敏度、 準(zhǔn)確度、 特異性、 線性范圍

21、、精密度（批間、批內(nèi)）等指標(biāo)，具體研究方法建議參考體外診斷試劑分析性能評估系列指導(dǎo)原則（征求意見稿） 。對于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號儀器的性能評估資料。性能評估應(yīng)采用臨床樣本，并盡量采用高危人群（炎癥）樣本，如果線性范圍低端樣本不足， 可以考慮補(bǔ)充低分險(xiǎn)炎癥患者樣本或健康人群。. 準(zhǔn)確度1 ） 與企業(yè)內(nèi)部參考品的比對研究使用已溯源的企業(yè)內(nèi)部定值參考品進(jìn)行驗(yàn)證， 重點(diǎn)觀察檢測結(jié)果的偏差情況。2 ） 回收試驗(yàn)用于評估定量檢測方法準(zhǔn)確測定加入純分析物的能力， 結(jié)果用回收率表示。 通常對樣本進(jìn)行2-3 次回收試驗(yàn)， 取平均值即平均回收率?；厥赵囼?yàn)注意事項(xiàng)：

22、加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的 10% ； 盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平； 標(biāo)準(zhǔn)物濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本； 注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質(zhì)。（ 3 ） 方法學(xué)比對采用參考方法或國內(nèi) / 國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法， 與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測一批病人樣品， 從測定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的偏倚。 如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)， 說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符， 對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋， 擬申報(bào)試劑與參比方法相比不會(huì)產(chǎn)生差異結(jié)果。在實(shí)施方法學(xué)比對前， 應(yīng)分別對擬申報(bào)試劑和參比試劑進(jìn)行初步

23、評估， 只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗(yàn)。方法學(xué)比對時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。注： C 反應(yīng)蛋白目前尚無國家參考品，以后國家參考品若建立，優(yōu)先采用（ 1 ）方法；本產(chǎn)品不建議采用方法（2）衡量準(zhǔn)確度。2. 分析靈敏度：分析靈敏度的確定常使用同批號試劑對零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進(jìn)行至少20次重復(fù)檢測，以空白均值加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差報(bào)告方法 的檢測限（團(tuán)+2SD ）。3.線性范圍：建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測的 樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血 清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的

24、影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7-11個(gè)濃度水平。例如, 將預(yù)期測定范圍加寬至130% ,在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平， 然 后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的 線性范圍。4.精密度：測量精密度的評估應(yīng)至少包括兩個(gè)濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個(gè)濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學(xué)決定水平），通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值（范圍）附近和異常高值樣本。兩 個(gè)濃度都選用高值樣品，可能致 CV偏小，也不能選用接近最低檢出 限的樣品，可能致CV偏大。5.分析特異性（1）交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體等的驗(yàn)證情況；（2）干擾物質(zhì)

25、：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如高脂、 黃疸、類風(fēng)濕因子等干擾因子的研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、 嚴(yán)重的模糊表述）；（3） 藥物影響：常見相關(guān)治療藥物對檢測結(jié)果的影響。6. 鉤狀（ Hook ）效應(yīng)（如有） ：說明不會(huì)產(chǎn)生 Hook 效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。（ 八）參考值（參考范圍）確定資料參考值（范圍）確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。建議參考CLSI/NCCLS C28-A2 。（九）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容， 申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期） 、運(yùn)

26、輸穩(wěn)定性、 開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究， 申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究， 應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。（十）臨床試驗(yàn)資料研究方法選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑， 采用擬申報(bào)產(chǎn)品 （以下稱考核試劑） 與之進(jìn)行對比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。 建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍及精

27、密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。臨床研究單位的選擇（ 1 ）第二類產(chǎn)品申請人應(yīng)當(dāng)選定不少于 2 家（含 2 家）省級衛(wèi)生醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。（ 2 ） 臨床研究單位應(yīng)有能力提供臨床評價(jià)所需的各類樣本， 實(shí)驗(yàn)操作人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等） ，熟悉評價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下， 定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)， 最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。（ 3 ） 不同的臨床單位應(yīng)使用同一批考核試劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)， 以便對數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)客觀的統(tǒng)計(jì)分析。臨床試驗(yàn)方案臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等

28、多方面考慮， 設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。 各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致， 且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施， 不可隨意改動(dòng)。 整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成， 申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/ 排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。 在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法及樣本隨機(jī)分配以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。 對于新試劑的動(dòng)態(tài)監(jiān)測研究， 應(yīng)在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標(biāo)準(zhǔn)。 臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型應(yīng)

29、與產(chǎn)品說明書一致，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。各研究單位選用的參比試劑及所用機(jī)型應(yīng)一致， 以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。臨床病例選擇臨床試驗(yàn)樣本量的確定：申請人或臨床研究者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該改產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。 在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本要求的前提下， 還應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。臨床研究的總樣本數(shù)至少為 200 例。應(yīng)考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)及相關(guān)指導(dǎo)原則的要求。樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。盡可能使 30% 樣本的測定值處于參考區(qū)間以外，但在測量范圍內(nèi)。另外， 建議在臨床試驗(yàn)中選擇部分含干擾物質(zhì)的標(biāo)本進(jìn)行對比

30、研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風(fēng)濕因子陽性樣本，易共存的其他急性炎癥時(shí)相因子同時(shí)升高的患者標(biāo)本， 以從臨床角度驗(yàn)證試劑的特異性。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法， 如相關(guān)分析、 線性回歸、受試者工作特征( ROC )曲線分析等。對于對比實(shí)驗(yàn)的等效性研究， 最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（ r 值）或判定系數(shù)（R2 ） 、回歸擬合方程（斜率和 y 軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正 / 偏態(tài)分布情況， 建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析， 統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 在臨床研究方案中

31、應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、 完整的闡述， 應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、 結(jié)果分析、 結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。 建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。（ 1 ）臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述臨床試驗(yàn)的整體管理情況、 臨床研究單

32、位選擇、 臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；病例納入 / 排除標(biāo)準(zhǔn)、 不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。（ 2 ） 具體的臨床試驗(yàn)情況考核試劑和參比試劑的名稱、 批號、 有效期及所用機(jī)型等信息；對各研究單位的病例數(shù)、 病種分布情況進(jìn)行總合， 建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值） 、抽查結(jié)果評估；具體試驗(yàn)過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。3 ） 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)預(yù)處理、 差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、 對異常值或缺失值的處理、 研究過程中是否涉及對方案的修改。定量值相