梅毒實(shí)驗(yàn)檢查-cl課件

1、梅毒陳玲梅毒 syphilis梅毒是由梅毒螺旋體引起的全身性、慢性性傳播疾病中醫(yī)文獻(xiàn)又稱廣瘡、霉瘡、楊梅瘡等明代陳司成著霉瘡秘錄，我國第一部有關(guān)梅毒的專書，采用生砒等治療梅毒，世界上最早使用砷劑治療此疾梅毒螺旋體有612個(gè)規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞梅毒螺旋體特征螺旋整齊，數(shù)目固定折光性強(qiáng)，較其他螺旋體亮運(yùn)動(dòng)緩慢而有規(guī)律，有三種運(yùn)動(dòng)方式圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)伸縮其螺旋間距離移動(dòng)彎曲扭動(dòng)如蛇行傳染途徑性接觸是主要的傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小到感染后4年，通過性接觸一般無傳染性傳染途徑胎傳在妊娠任何階段，梅毒螺旋體均可通過胎

2、盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期2年），但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒，病期越長，傳染性越小早期梅毒的母親發(fā)生流產(chǎn)、死產(chǎn)、胎兒先天性梅毒或新生兒死亡率高于晚期梅毒的母親一期梅毒硬下疳平均4周 二期梅毒一期梅毒未治療或治療不徹底，螺旋體由淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血液循環(huán)形成螺旋體菌血癥，引起皮膚、粘膜、骨骼、內(nèi)臟、心血管及神經(jīng)損害。410周二期梅毒皮膚粘膜損害：皮疹：玫瑰疹 扁平濕疣 梅毒性禿發(fā) 粘膜損害骨關(guān)節(jié)損害：骨膜炎其他：眼損害、神經(jīng)損害、淋巴結(jié)炎、內(nèi)臟梅毒三期梅毒早期梅毒未治療或治療不充分，除皮膚粘膜、骨出現(xiàn)梅毒損害外，還侵犯內(nèi)臟，特別是心血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等重要器官，危及生命。34年，最長可達(dá)20年。

3、臨床表現(xiàn)（二）先天性梅毒流產(chǎn)、死胎梅毒兒（皮膚病變、鋸齒形牙、角膜炎、先天耳聾）免疫反應(yīng)抗心磷脂抗體：一期梅毒早期呈陰性，到后期呈陽性；二期、三期梅毒時(shí)呈陽性抗螺旋體抗體：比心磷脂抗體出現(xiàn)早，最初為IgM抗體，其后為IgG及IgA類抗體。持續(xù)存在終身抗體無保護(hù)免疫力，不足以防止感染和阻止病情進(jìn)展晚期梅毒不再感染，可能與機(jī)體已產(chǎn)生細(xì)胞免疫有關(guān)梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷暗視野顯微鏡檢查梅毒血清學(xué)試驗(yàn)組織病理學(xué)暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本采集部位：一期或二期梅毒的皮膚或粘膜損害 有痂者去痂，先用無菌棉球或紗布蘸生理鹽水，將皮損拭凈，輕壓皮損至滲液（避免出血）。然后用載玻片印取滲液，立即檢查，未破潰者用手術(shù)刀刮破皮疹，

4、取滲出液。淋巴結(jié)穿刺液 以無菌操作法用注射器吸取0.3-0.5ml生理鹽水，穿刺入淋巴結(jié)，再回吸數(shù)次，最后將吸取液涂玻片上，立即檢查。暗視野顯微鏡檢查制片標(biāo)本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在暗室中于暗視野顯微鏡上油鏡觀察觀察先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)至高倍鏡梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光，螺旋整齊，運(yùn)動(dòng)規(guī)律（旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行運(yùn)動(dòng)）暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋陰性結(jié)果不能排除梅毒，可能是：螺旋體數(shù)量不足已用過抗生素或某些外用藥 損害接近自然消退暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋1、暗視野顯微鏡查陽性，臨床上可確診梅毒。特別對一期梅毒硬下疳，腫大淋巴結(jié)，二期梅毒皮膚粘膜損的診斷有重要價(jià)值，尤其使用于早期梅毒血

5、清學(xué)陰性時(shí)。梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷暗視野顯微鏡檢查梅毒血清學(xué)試驗(yàn)組織病理學(xué)梅毒血清學(xué)檢查原理 人體感染梅毒螺旋體后可產(chǎn)生多種抗體一方面，在組織破壞過程中可釋放一種具有抗原性的類脂質(zhì)（心磷脂），能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，為非特異性的，稱為反應(yīng)素。另一方面，機(jī)體產(chǎn)生針對梅毒螺旋體的抗體，為特異性的。故梅毒血清學(xué)試驗(yàn)包括在體外用心磷脂為抗原檢測患者血清中抗心磷脂抗體的非特異性血清學(xué)試驗(yàn)（非螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)）和用死的或活的螺旋體或其成分來檢測患者血清中抗螺旋體抗體的特異性血清學(xué)試驗(yàn)（螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)）。 RPR原理梅毒螺旋體感染后，破壞人體組織，釋放抗原性心磷脂，刺激機(jī)體產(chǎn)生反應(yīng)素RPR定性試驗(yàn)在紙

6、卡圓圈中加入50L待檢血清，涂滿整個(gè)圓圈使用滴管和專用針頭（60滴/mL），加1滴抗原懸液旋轉(zhuǎn)100rpm，8min立即判斷結(jié)果RPR結(jié)果判斷陽性：在圓圈中見不規(guī)則大小黑色凝集塊陰性：在圓圈中無黑色凝集塊，僅見均勻的無凝集現(xiàn)象或黑色顆粒集中在圓圈中心RPR定量試驗(yàn)待檢血清用等滲鹽水在紙卡圓圈中作6個(gè)稀釋度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32按定性試驗(yàn)步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度報(bào)告結(jié)果RPR定量試驗(yàn)中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性RPR臨床意義可用于療效觀察、判定復(fù)發(fā)及再感染適

7、用于普查、婚檢、產(chǎn)前檢查及其它健康體檢可能有生物學(xué)假陽性(滴度常1:8）: 急性發(fā)熱性傳染病，妊娠，吸毒，膠原性疾?。⊿LE，類風(fēng)關(guān)）非特異性血清試驗(yàn)的假陰性：1）有25%40%的未治梅毒在晚期隱性期可自然逆轉(zhuǎn)為陰性，約30%的心血管和神經(jīng)梅毒呈陰性。2）前帶現(xiàn)象（the prozonphenomenon）, 即為抗原抗體量比例不適，抑制陽性反應(yīng)。一般易發(fā)生在滴度在1：500以上的標(biāo)本中。 1%的II期梅毒會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。3）操作人員應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)的溫度，試劑盒從冰箱取出后應(yīng)恢復(fù)至室溫，室溫過低（10）可能出現(xiàn)假陰性或結(jié)果不準(zhǔn)確。非特異性血清試驗(yàn)生物學(xué)假陽性（非特異反應(yīng)性BFP=Biologica

8、l false-positive) 0.25%0.86%陽性標(biāo)本為生物學(xué)假陽性，主要出現(xiàn)在自身免疫疾?。ㄋ蠦FP反應(yīng)的14%）的患者、其它病原體感染（病毒性肺炎、惡性腫瘤和麻風(fēng)）、妊娠婦女。 應(yīng)排除技術(shù)性、生理性和生物學(xué)假陽性，并用特異性試驗(yàn)來證實(shí)。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： *敏感性特異性好 *不需要昂貴設(shè)備，簡單易行 *適用于大量人群的血清篩查 *有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)。 *20分鐘可獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 *試劑與方法均已標(biāo)化，各實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果可比較。 *試驗(yàn)可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進(jìn)行。缺點(diǎn)： *敏感性和特異性低于螺旋體抗原試驗(yàn)，BFP反應(yīng)和

9、前帶現(xiàn)象 TRUST實(shí)驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)：用整菌和其片斷做抗原致敏的明膠顆粒此致敏顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。敏感性和特異性接近最佳，分別為95%和99.9%。容許做梅毒的精確診斷。注意事項(xiàng) 新溶解的“C”“D”應(yīng)置30分鐘以上才能使用，已溶解的“C”“D”液用前需恢復(fù)至室溫并充分搖勻。專用滴管應(yīng)標(biāo)明不能混用，不能用來稀釋血清。未致敏孔不發(fā)生凝集，否則試驗(yàn)無效。如果標(biāo)本與非致敏和致敏顆粒均產(chǎn)生凝集，需作重吸收試驗(yàn)。反應(yīng)板要清潔干凈，孔內(nèi)無異物。試劑保存于210，不可凍結(jié)，不同批號試劑間不可混用。臨床意義 TPPA試驗(yàn)敏感性高、特

10、異性強(qiáng)，定性試驗(yàn)陽性，可作梅毒診斷依據(jù)，是目前使用較多的梅毒確證試驗(yàn)，一旦感染梅毒，TPPA試驗(yàn)往往終生陽性，因此不能作為治療效果觀察的指標(biāo)。極早期梅毒患者經(jīng)治療TPHA（TPPA）可轉(zhuǎn)陰。必要時(shí)可做定量試驗(yàn) 。 TPPA臨床意義敏感性和特異性高，是梅毒的確證試驗(yàn)。對未經(jīng)治療的梅毒的敏感性：一期76，二期100，潛伏97，晚期94。特異性99一般不會陰轉(zhuǎn)，因此不作為療效觀察指標(biāo)。但部分早期梅毒經(jīng)有效治療可陰轉(zhuǎn)生物學(xué)假陽性（1）：SLE，麻風(fēng)梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原，或重組抗原包被固相，檢測特異性梅毒螺旋體抗體材料和方法其敏感性和特異性有待進(jìn)一步評

11、價(jià)快速試驗(yàn)-免疫滲濾法在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，如47kD、15kD抗原，利用免疫滲濾技術(shù)，將試紙條插入待測血清，觀察血清與特定抗原成份的反應(yīng)可在10分鐘之內(nèi)得到結(jié)果，快速、方便是特異性螺旋體實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步驗(yàn)證方可用于臨床診斷方法1、非特異性血清學(xué)試驗(yàn) 心磷脂為抗原檢測患者血清中抗心磷脂抗體，可定性、定量實(shí)驗(yàn)，包括a 性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(venereal disease research laboratory，VDRL) b 不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(unheated serum reagin test，USR) c 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(rapid plasma reagin c

12、ircle card test，RPR) d 甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素實(shí)驗(yàn)（Toluidine red unheated serum test.TRUST） 2、特異性血清學(xué)試驗(yàn) 用死的或活的螺旋體或其成分作抗原來檢測患者血清中抗螺旋體抗體。包括1 梅毒螺旋體熒光抗體吸收試驗(yàn)(fluorescent treponemal antibody absorption test，F(xiàn)TA-ABS)2 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(treponema pallidum hemagglutination test.TPHA)3 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(treponemapallidum particle as

13、say，TPPA) 意義：1、非特異性血清學(xué)試驗(yàn)陽性可能表示：現(xiàn)癥感染、接受或未接受過治療的近期感染，以及生物學(xué)假陽性；2、 特異性血清學(xué)試驗(yàn)陽性結(jié)果表示：現(xiàn)癥感染、接受或末接受過治療的近期感染，既往曾經(jīng)感染。 3、非特異性血清學(xué)試驗(yàn)敏感性高，特異性低，可出現(xiàn)假陽性；早期梅毒患者經(jīng)充分治療后，滴度逐漸下降，半年到2年大部分非特異性血清學(xué)試驗(yàn)陰轉(zhuǎn)。早期未經(jīng)治療者到晚期，部分病人中反應(yīng)素也可以減少或消失。故非特異性血清學(xué)試驗(yàn)可作為篩選試驗(yàn)及觀察療效，復(fù)發(fā)及再感染。4、特異性血清學(xué)試驗(yàn)因其敏感性高，特異性強(qiáng)，可作為證實(shí)試驗(yàn)及排除假陽性。在多數(shù)情況下，一旦感染了梅毒，特異性血清學(xué)試驗(yàn)抗體陽性可保持?jǐn)?shù)年

14、，甚至終生陽性，故定性的特異性血清學(xué)試驗(yàn)不作為療效判定。 5、非特異性血清學(xué)試驗(yàn)生物學(xué)假陽性有多種疾病：急性或慢性傳染?。猴L(fēng)疹、麻疹、水痘、瘧疾、上呼吸道感染、病毒性肝炎，活動(dòng)性肺結(jié)核、麻風(fēng)，肺炎球菌性肺炎等；其它疾?。篠LE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、DLE、肝硬化、慢性腎炎、系統(tǒng)性硬化癥、自身免疫性溶血性貧血等；身體狀況改變：麻醉劑成癮、妊娠、年老等。但一般假陽性血清抗體滴度1：4，可用定量的方法排除或用特異性螺旋體抗原試驗(yàn)進(jìn)行確診。 6、梅毒感染的較早期，機(jī)體尚未產(chǎn)生抗體，非特異性血清學(xué)試驗(yàn)和特異性血清學(xué)試驗(yàn)均可陰性，需追蹤觀察。試驗(yàn)結(jié)果意義RPR+，TPPA-RPR+，TPPA+RPR-

15、，TPPA+RPR-，TPPA-RPR假陽性現(xiàn)癥梅毒，治愈的晚期梅毒極早期梅毒，治愈的梅毒排除梅毒感染極早期梅毒梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果解釋舉例梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果解釋舉例試驗(yàn)結(jié)果意義RPR+，TPPA-RPR+，TPPA+RPR-，TPPA+RPR-，TPPA-RPR假陽性現(xiàn)癥梅毒，治愈的晚期梅毒極早期梅毒，治愈的早期梅毒排除梅毒感染極早期梅毒（尚無任何抗梅毒抗體產(chǎn)生梅毒的復(fù)查 梅毒治療后的隨訪：第一年每3個(gè)月復(fù)查一次。第二年每6月年復(fù)查一次。第三年末復(fù)查1次。、 治療2年內(nèi)如果TRUST下降4倍以上，說明治療有效。 如果在1224個(gè)月內(nèi)未下降4倍（即2個(gè)稀釋度）或有提示為梅毒進(jìn)展的癥狀和體癥，

16、則應(yīng)做N梅毒的評價(jià)，并予相應(yīng)治療。 妊娠梅毒： 分娩前應(yīng)每月檢查一次RPR，如3個(gè)月內(nèi)血清不下降二個(gè)稀釋度，應(yīng)予復(fù)治，分娩后按一般梅毒隨訪。 先天梅毒： 經(jīng)過治療的梅毒孕婦所生嬰兒，出生時(shí)如血清反應(yīng)陽性，應(yīng)每月檢查一次，連續(xù)6個(gè)月，如血清反應(yīng)陰轉(zhuǎn)，且未出現(xiàn)先天梅毒的臨床癥狀，則可停止觀察。出生時(shí)陰性，應(yīng)于出生后1月、2月、3月及6月復(fù)查，至6個(gè)月時(shí)血清仍為陰性，且無先梅癥狀，可停止觀察。診斷病史： 感染史，發(fā)病經(jīng)過，婚姻史，分娩史，懷疑先天梅毒時(shí)其父母的性病史，治療史等 體格檢查： 各系統(tǒng)的全面檢查，包括皮膚、粘膜及心血管、神經(jīng)系統(tǒng)等 實(shí)驗(yàn)室檢查： 暗視野顯微鏡檢查陽性，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)初篩和證實(shí)試驗(yàn)梅毒的復(fù)查 梅毒治療后的隨訪：第一年每3個(gè)