甲型H1N1流感 病例標(biāo)本的采集、保藏、和運(yùn)輸

1、甲型H1N1流感 病例標(biāo)本的采集、保藏、和運(yùn)輸提綱法規(guī)依據(jù)新甲型H1N1流感標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、保藏和防護(hù)感染性物質(zhì)運(yùn)輸?shù)陌b、標(biāo)簽與文件準(zhǔn)備法規(guī)要求應(yīng)注意的問(wèn)題法規(guī)依據(jù)引文“標(biāo)本采集-按照本指南的應(yīng)急監(jiān)測(cè)方案（附件2）要求，采集相關(guān)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。具體標(biāo)本采集類(lèi)型、方法參見(jiàn)全國(guó)流感/人禽流感監(jiān)測(cè)實(shí)施方案的“流感監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范”。生物安全要求-流感病毒培養(yǎng)應(yīng)在具有資質(zhì)的BSL-3實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，標(biāo)本儲(chǔ)存、包裝和運(yùn)送應(yīng)按照病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例（國(guó)務(wù)院424號(hào)令）和可感染人類(lèi)的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部第45號(hào)令）等有關(guān)規(guī)定執(zhí)行?！?甲型H1N

2、1流感預(yù)防控制技術(shù)指南（試行） （以下簡(jiǎn)稱(chēng) “技術(shù)指南”）法規(guī)依據(jù)衛(wèi)生部甲型H1N1流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案(試行)衛(wèi)生部甲型H1N1流感預(yù)防控制技術(shù)指南（試行） 衛(wèi)生部甲型H1N1流感診療方案（2009年試行版第一版） 人間傳染的病原微生物名錄可感染人類(lèi)的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定（2005年衛(wèi)生部45號(hào)令) 國(guó)家CDC全國(guó)流感/人禽流感監(jiān)測(cè)實(shí)施方案 新甲型H1N1流感標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、保藏和防護(hù)采集要求 從事檢測(cè)標(biāo)本采集的技術(shù)人員必須經(jīng)過(guò)生物安全培訓(xùn)和具備相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技能。在標(biāo)本采集過(guò)程中，采樣人員參照規(guī)定的防護(hù)措施進(jìn)行安全防護(hù)。 住院病例的標(biāo)本由所在醫(yī)院醫(yī)護(hù)人員在當(dāng)?shù)?/p>

3、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)專(zhuān)業(yè)人員指導(dǎo)下采集。 標(biāo)本采集具體種類(lèi)和數(shù)量由現(xiàn)場(chǎng)工作組確定。 密切接觸者標(biāo)本由當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)采集。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的需要，結(jié)合病程再次采樣。 采集對(duì)象疑似病例確診病例其他需檢測(cè)的樣本標(biāo)本種類(lèi)引文-推薦采集的呼吸道標(biāo)本： “疾病發(fā)病后應(yīng)盡快采集如下標(biāo)本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。標(biāo)本應(yīng)置于無(wú)菌病毒采樣液，并立即用冰塊或冰排保存或置于4 （冰箱），并馬上送至實(shí)驗(yàn)室。（臨床樣品采集人員及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的感染控制指導(dǎo)請(qǐng)見(jiàn)相關(guān)文件。） 采樣同時(shí)填寫(xiě)疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本采樣單。（附表1） ” -“甲型H1N1流感

4、病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案”標(biāo)本種類(lèi)1 上呼吸道標(biāo)本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。最佳采集時(shí)間為發(fā)病后3天內(nèi)。2 下呼吸道標(biāo)本：包括呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本。3 尸檢標(biāo)本：病人死亡后應(yīng)依法盡早進(jìn)行解剖，在嚴(yán)格按照生物安全防護(hù)的條件下，進(jìn)行尸檢。4 血清標(biāo)本：每一病例必須采集血清標(biāo)本，須采集急性期、恢復(fù)期雙份血清。第一份血清應(yīng)盡早（最好在發(fā)病后7天內(nèi)）采集，第二份血清應(yīng)在發(fā)病后第34周采集。采集量要求5ml，以空腹血為佳，建議使用真空采血管。5 其它標(biāo)本：如果病例有腹瀉癥狀，可在發(fā)病后采集糞便標(biāo)本；有胸水者可采集胸水標(biāo)本。標(biāo)本采集方法 1 咽拭子：用2根聚丙烯

5、纖維頭的塑料桿拭子同時(shí)擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。2 鼻拭子：將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。3 鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。 將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采樣液沖洗收集器1次（亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來(lái)替代收集器）。 標(biāo)本采集方法 4 咽漱液：

6、用10ml不含抗菌素的采樣液漱口。漱口時(shí)讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓洗液在咽部轉(zhuǎn)動(dòng)。然后將咽漱液收集于50ml無(wú)菌的螺口塑料管中。無(wú)條件的可用平皿或燒杯收集咽漱液并轉(zhuǎn)入10ml螺口采樣管中。5 深咳痰液：要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于50ml含3ml采樣液的螺口塑料管中。6 呼吸道灌洗液：將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm深處），注入5ml生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器1次（亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來(lái)替代收集）。標(biāo)本采集方法7 胸水:在B超定位下進(jìn)行胸腔穿刺，抽取胸水5ml，置于無(wú)菌的塑料螺口管中。8 肺組

7、織活檢標(biāo)本：在超聲或X線定位下,經(jīng)皮穿刺取肺組織活檢標(biāo)本,置于含3ml采樣液的塑料螺口管中。9 尸檢標(biāo)本：每一采集部位分別使用不同消毒器械，以防交叉污染；每種組織應(yīng)多部位取材，各部位應(yīng)取2050g，淋巴結(jié)取2個(gè)。10 糞便標(biāo)本：采集510g糞便置于含510ml采樣液無(wú)菌螺口管中，嚴(yán)格密封。11 血清標(biāo)本：用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml，室溫靜置30分鐘，15002000rpm離心10分鐘，收集血清于2ml無(wú)菌螺口塑料管中。 標(biāo)本采集所需要的器材引文-“理想的情況下，標(biāo)本應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖維 ），用鋁或塑料做桿。不推薦棉拭子和木桿。不能用海藻酸鈣做的拭子收集標(biāo)本。標(biāo)本采

8、集管應(yīng)包含3毫升病毒運(yùn)輸液（例如，含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，阻止細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)的抗生素，緩沖液） 。” “技術(shù)指南”常用的采樣液配方 pH 7.47.6的Hanks氏液或MEM/DMEM液。在采樣液中需加入抗菌素，可用青霉素（終濃度為100U/ml）、慶大霉素（終濃度為1mg/ml）和抗真菌藥物（終濃度為2g/ml） 標(biāo)本采集所需要的器材1、拭子2、壓舌板3、塑料瓶、采樣杯或器皿4、15ml 的離心管5、移液管6、注射器7、10ml真空取血管 標(biāo)本采集所需要的器材冰壺采樣運(yùn)輸管外包裝容器（有生物安全標(biāo)志）其他：酒精燈、剪刀、紙漏斗、酒精、碘酒、吸耳球、塑料袋、記號(hào)筆、標(biāo)簽、登記表等。標(biāo)本包裝和運(yùn)輸引文

9、-臨床標(biāo)本儲(chǔ)存、運(yùn)輸 “所有呼吸道標(biāo)本應(yīng)保存在4 ，并盡快放置在-70。如果沒(méi)有-70度冰箱，標(biāo)本應(yīng)保存在4 ，但不應(yīng)超過(guò)4天。 臨床標(biāo)本應(yīng)按照A類(lèi)包裝要求運(yùn)送，并用干冰運(yùn)輸。 所有標(biāo)本應(yīng)標(biāo)示清楚。疑似病例標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)包含的信息請(qǐng)參照禽流感標(biāo)本運(yùn)輸?！?“技術(shù)指南”標(biāo)本采集后在生物安全級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)分裝成一式三份（分裝標(biāo)本的生物安全柜不能用于提取核酸）。一份當(dāng)?shù)貦z測(cè)用，一份送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心檢測(cè)，一份保存以備復(fù)核。標(biāo)本包裝和運(yùn)輸禽流感實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案中規(guī)定的包裝方式（1）標(biāo)本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊。（2）將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一

10、份標(biāo)本。（3）直接在塑料管上用油性記號(hào)筆寫(xiě)明樣本的種類(lèi)、采樣時(shí)間、編號(hào)、姓名，同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在禽流感人體標(biāo)本送檢登記表，連同塑料管用另一塑料袋內(nèi)密封。 （4）將裝標(biāo)本的密封袋放入專(zhuān)用運(yùn)輸箱內(nèi)（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料。同一患者2 份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)塑料袋內(nèi)再次做密封。若將進(jìn)行病毒分離，可將密封好的裝有標(biāo)本的容器直接放入液氮運(yùn)輸罐內(nèi)運(yùn)輸。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)。標(biāo)本包裝和運(yùn)輸采集后的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)使用能夠抵抗運(yùn)輸過(guò)程中受到一般震動(dòng)和負(fù)荷的包裝材料。采集后的標(biāo)本必須要有三層包裝，第二層包裝與最后一層包裝之間應(yīng)當(dāng)填入適當(dāng)?shù)木彌_物質(zhì)

11、，即使內(nèi)容物發(fā)生泄露也應(yīng)當(dāng)不會(huì)損壞這些保護(hù)性的緩沖物質(zhì)或者是外包裝。所有采集的疑似禽流感標(biāo)本在運(yùn)輸或轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中必須標(biāo)明“傳染性物質(zhì)”字樣運(yùn)輸樣品必須委派專(zhuān)車(chē)雙人負(fù)責(zé)運(yùn)送。標(biāo)本保存用于病毒分離和核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，24小時(shí)內(nèi)能檢測(cè)的標(biāo)本可置于4保存，24小時(shí)內(nèi)無(wú)法檢測(cè)的標(biāo)本則應(yīng)置于-70或以下保存。如無(wú)70保存條件，則于20冰箱暫存。血清可在4存放3天、-20以下長(zhǎng)期保存。標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融。 采樣人員的防護(hù)引文-二級(jí)防護(hù)“1適用于進(jìn)入隔離留觀室和專(zhuān)門(mén)病區(qū)的醫(yī)務(wù)人員，接觸從病人身上采集的標(biāo)本、處理其分泌物、排泄物、使用過(guò)的物品和死亡病人尸體的工作人員，轉(zhuǎn)運(yùn)病人的醫(yī)務(wù)人員和司機(jī)。

12、2進(jìn)入隔離留觀室和專(zhuān)門(mén)病區(qū)必須戴醫(yī)用防護(hù)口罩，每4小時(shí)更換1次或感潮濕時(shí)更換；穿工作服、隔離衣、鞋套，戴手套、工作帽。3每次接觸病人后立即進(jìn)行手清洗和消毒。手消毒用0.30.5%碘伏消毒液或快速手消毒劑(洗必泰醇、新潔爾滅醇、75%酒精等)揉搓13分鐘。4、對(duì)病人實(shí)施近距離操作時(shí)，戴防護(hù)眼鏡。5、注意呼吸道及粘膜防護(hù)?！薄凹夹g(shù)指南”防護(hù)用品采樣人員的防護(hù)采樣過(guò)程防護(hù)建議穿普通工作服、戴工作帽、外罩一層防護(hù)服、戴防護(hù)眼鏡和防護(hù)口罩（離開(kāi)污染區(qū)后更換），戴乳膠手套、穿鞋套。感染性物質(zhì)運(yùn)輸?shù)陌b、標(biāo)簽與文件準(zhǔn)備 一類(lèi)在運(yùn)輸中，一旦有暴露發(fā)生，即能夠在所有人類(lèi)和動(dòng)物中引起永久性殘疾、導(dǎo)致威脅生命或致命

13、疾病的傳染性物質(zhì)。當(dāng)感染性物質(zhì)從保護(hù)性的包裝中釋放出來(lái)即為暴露發(fā)生，導(dǎo)致人類(lèi)與動(dòng)物與其的生理接觸。 達(dá)到該標(biāo)準(zhǔn)的能引起人體疾病或引起人與動(dòng)物疾病的感染性物質(zhì)的聯(lián)合國(guó)編號(hào)為UN2814，而只能引起動(dòng)物疾病的該類(lèi)感染性物質(zhì)則為UN2900 。 指定歸屬為UN2814，還是UN2900應(yīng)基于對(duì)其醫(yī)學(xué)背景、人類(lèi)或動(dòng)物來(lái)源的癥狀、地方局部流行的條件、及對(duì)涉及人類(lèi)或動(dòng)物來(lái)源的個(gè)體情況的專(zhuān)業(yè)判斷。 UN 2814 恰當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸名稱(chēng)是“感染性物質(zhì)，感染人類(lèi)”。UN 2900 恰當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸名稱(chēng)是“感染性物質(zhì)，僅感染動(dòng)物”。A類(lèi)感染性物質(zhì)（Infectious substances, Category A）B類(lèi)感染性

14、物質(zhì)（Infectious substances, Category B） 沒(méi)有達(dá)到歸屬為A類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)的感染性物質(zhì)。B類(lèi)感染性物質(zhì)的編號(hào)為UN3373。UN 3373恰當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸名稱(chēng)是 “診斷樣本”(Diagnostic specimens)或“臨床樣本”(Clinical specimens)。從2007年1月起，“診斷標(biāo)本”或“臨床標(biāo)本”這一運(yùn)輸名稱(chēng)將改為“生物性物質(zhì)B類(lèi)” （Biological substance, Category B）。培養(yǎng)物(Cultures) 培養(yǎng)物是指以產(chǎn)生高濃度病原體為目的，擴(kuò)增和繁殖病原體過(guò)程的產(chǎn)物，因此一旦發(fā)生暴露，將增加感染的危險(xiǎn)性。該定義所指的培養(yǎng)物指以病

15、原體增殖為目的所準(zhǔn)備的培養(yǎng)物，而不是用于診斷和臨床目的的培養(yǎng)物。主容器包裝要求 高致病性病原微生物菌（毒）種或者樣本應(yīng)正確盛放在主容器內(nèi)，主容器要求無(wú)菌、不透水、防泄漏。主容器可以采用玻璃、金屬或塑料等材料，必須采用可靠的防漏封口，如熱封、帶緣的塞子或金屬卷邊封口。主容器外面要包裹有足夠的樣本吸收材料，一旦有泄漏可以將所有樣本完全吸收。主容器的表面貼上標(biāo)簽，標(biāo)明標(biāo)本類(lèi)別、編號(hào)、名稱(chēng)、樣本量等信息。輔助容器輔助容器是在主容器之外的結(jié)實(shí)、防水和防泄漏的第二層容器，它的作用是包裝及保護(hù)主容器。多個(gè)主容器裝入一個(gè)輔助容器時(shí)，必須將它們分別包裹，防止彼此接觸，并在多個(gè)主容器外面襯以足夠的吸收材料。相關(guān)文

16、件（例如樣品數(shù)量表格、危險(xiǎn)性申明、信件、樣品鑒定資料、發(fā)送者和接收者信息）應(yīng)該放入一個(gè)防水的袋中，并貼在輔助容器的外面。輔助容器必須用適當(dāng)?shù)囊r墊材料固定在外包裝內(nèi)，在運(yùn)輸過(guò)程中使其免受外界影響，如破損、浸水等。A類(lèi)感染性物質(zhì)的包裝與標(biāo)簽B類(lèi)感染性物質(zhì)的包裝與標(biāo)簽感染性物質(zhì)溢出清除程序發(fā)生感染性或潛在感染性物質(zhì)溢出時(shí)，應(yīng)采用下列溢出清除規(guī)程：1、戴手套，穿防護(hù)服，必要時(shí)需進(jìn)行臉和眼睛防護(hù)。2、用布或紙巾覆蓋并吸收溢出物。3、向紙巾上傾倒適當(dāng)?shù)南緞⒘⒓锤采w周?chē)鷧^(qū)域（通?？梢允褂?%漂白劑溶液）。4、使用消毒劑時(shí)，從溢出區(qū)域的外圍開(kāi)始，朝向中心進(jìn)行處理。5、作用適當(dāng)時(shí)間后（例如30 min），

17、將所處理物質(zhì)清理掉。如果含有碎玻璃或其他要使用簸箕或硬的厚紙板來(lái)收集處理過(guò)的物品，并將它們置于可防刺透的容器中以待處理。6、對(duì)溢出區(qū)域再次清潔并消毒（如有必要，重復(fù)第25步）。7、將污染材料置于防漏、防穿透的廢棄物處理容器中。8、在成功消毒后，通知主管部門(mén)目前溢出區(qū)域的清除污染工作已經(jīng)完成。感染性物質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室間的轉(zhuǎn)運(yùn) 法規(guī)要求病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例第二章 病原微生物的分類(lèi)和管理 第七條 國(guó)家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對(duì)個(gè)體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類(lèi)：第一類(lèi)病原微生物，是指能夠引起人類(lèi)或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類(lèi)病原微

18、生物，是指能夠引起人類(lèi)或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物。病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例 第三類(lèi)病原微生物，是指能夠引起人類(lèi)或者動(dòng)物疾病，但一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。第四類(lèi)病原微生物，是指在通常情況下不會(huì)引起人類(lèi)或者動(dòng)物疾病的微生物。第一類(lèi)、第二類(lèi)病原微生物統(tǒng)稱(chēng)為高致病性病原微生物。 病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例第九條 采集病原微生物樣本應(yīng)當(dāng)具備下列條件：（一）具有與采集病原微生物樣本所需要的生物安全防護(hù)水平相適應(yīng)的設(shè)備；（二）具有掌握相關(guān)專(zhuān)業(yè)知識(shí)和操作技能的工作人員；（三）具有有效的防止病原微生物擴(kuò)散和感染的措施；（四）具有保證病原微生物樣本質(zhì)量的技術(shù)方法和手段。采集高致病性病原微生物樣本的工作人員在采集過(guò)程中應(yīng)當(dāng)防止病原微生物擴(kuò)散和感染，并對(duì)樣本的來(lái)源、采集過(guò)程和方法等作詳細(xì)記錄。病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例第十一條 運(yùn)輸高致病性病原微生物菌（毒）種或者樣本，應(yīng)當(dāng)具備下列條件：（一）運(yùn)輸目的、高致病性病原微生物的用途和接收單位符合國(guó)務(wù)院衛(wèi)生主管部門(mén)或者獸醫(yī)主管部門(mén)的規(guī)定；（二）高致病性病原微生物菌（毒）種或者樣本的容器應(yīng)當(dāng)密封，容器或者包裝材料還應(yīng)當(dāng)符合防水、防破損、防外泄、耐高（低