奧美沙坦通過延髓腹外側(cè)區(qū)AT1受體減弱自發(fā)高血壓大鼠血管緊張素

1、奧美沙坦通過延髓腹外側(cè)區(qū)AT1受體減弱自發(fā)高血壓大鼠血管緊張素【關鍵詞】延髓腹外側(cè)頭端;自發(fā)性高血壓大鼠;血管緊張素1型受體;奧美沙坦延髓腹外側(cè)頭端區(qū)(RVL區(qū))是交感輸出和血壓調(diào)節(jié)的重要腦區(qū)，承受延髓以上心血管中樞和外周傳入的多種心血管活動信息，起到維持交感緊張性和穩(wěn)定血壓的作用。RVL區(qū)存在多種神經(jīng)遞質(zhì)及其相應受體，其中血管緊張素(Ang)及其AT1受體在該區(qū)含量豐富1。AT1受體與Ang結(jié)合興奮該區(qū)血管運動神經(jīng)元引起交感活動增加，血壓升高。因此，AT1受體在RVL區(qū)血壓調(diào)節(jié)中起到關鍵作用。近幾年研究發(fā)現(xiàn)高血壓動物模型和高血壓患者的RVL區(qū)AT1受體密度顯著增加，神經(jīng)元自發(fā)活動也增加2。猜

2、想RVL區(qū)高度表達的AT1受體在高血壓的形成和維持中起到重要作用3，4。又有研究報道，自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的RVL區(qū)微量注入AT1受體拮抗劑氯沙坦可以減弱靜注苯腎上腺素引起的升壓反響5，6，說明氯沙坦可能通過阻斷RVL區(qū)AT1受體降低血壓。本課題組曾研究發(fā)現(xiàn)奧美沙坦可以有效減弱RVL區(qū)微量注射谷氨酸引起的升壓反響。因此，設想長期口服奧美沙坦可以通過抑制腦干心血管中樞AT1受體表達，減弱RVL區(qū)注射Ang引發(fā)的升壓反響。1材料與方法1.1藥品和儀器奧美沙坦(日本Sanky公司)，Ang(美國Siga公司)，多道生理記錄儀(日本Nihnkhden公司)，立體定位儀(日本Narishige公司

3、)，微操縱儀、微量注射儀(日本Narishige公司)，微電極放大器示波儀(日本Natinal公司)。1.2動物SHR40只，KY大鼠20只(均雄性，1012齡，北京維通利華動物中心)。SHR隨機分成對照組和奧美沙坦組。奧美沙坦組大鼠飲用水中加有奧美沙坦(30gkg-1d-1)。對照組和KY組大鼠正常飲水。各組大鼠均喂養(yǎng)4，每周測2次鼠尾動脈壓。1.3一般手術(shù)處理隨機取SHR、奧美沙坦、KY組大鼠各10只，烏拉坦(1.5g/kg)腹腔麻醉。行氣管插管和股動脈、股靜脈插管，動脈導管連接記錄平均動脈壓(AP)及心率(HR)。靜脈補充20%氨基甲酸乙酯(1g/kg)維持麻醉。大鼠取俯臥位，頭部固定于

4、腦立體定位儀上，沿中線切開顱頂至背正中皮膚，去除局部顱骨、硬腦膜及小腦，充分暴露延髓反面。通過電熱毯使肛溫維持在37左右。1.4RVL定位和給藥充分暴露延髓后，根據(jù)Paxins和atsn鼠腦解剖圖譜定位RVL(以延髓閂部為參考點，RVL在頭端1.51.8，中線旁開1.62.0，延髓背側(cè)外表下3.03.4處)。將3根外徑2535的注射微電極安裝在注射用的微操縱儀上，尖端放置到RVL區(qū)，經(jīng)微量注射儀分別向三組大鼠單側(cè)RVL微量注射Ang(100pl/50nl)，注藥速度為1.5nl/in，觀察注藥前后大鼠AP、HR的變化。實驗完畢后，2%偶氮藍染劑0.1l注入到顯微注射部位，經(jīng)左心室依次快速灌流生

5、理鹽水150l和4%多聚甲醛溶液250l，灌注完畢迅速取腦并放置于4%多聚甲醛溶液中。用冰凍切片機將延髓作50的冠狀切片，中性紅染色，在顯微鏡下尋找染點，根據(jù)Paxins和atsn鼠腦解剖圖譜驗證注射部位。Ang和定位染劑均用人工腦脊液配制。1.5測定RVL內(nèi)AT1受體RNA程度標本留置：取SHR、奧美沙坦、KY組大鼠各10只，將其斷頭處死。對照Paxins和atsn圖譜取RVL區(qū)腦組織，液氮速凍?？俁NA提?。喝?00g腦組織，按Trizl(Invitrgen公司，美國)試劑盒說明書操作。用754紫外分光光度計測定RNA含量。1.7統(tǒng)計學處理實驗數(shù)據(jù)以xs表示，應用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，

6、三組間均數(shù)比擬采用方差分析，兩兩比擬采用q檢驗。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1各組血壓狀況奧美沙坦治療46d后，奧美沙坦組大鼠收縮壓逐漸降至110120Hg，隨后血壓始終保持在這個程度。SHR對照組和KY組血壓無明顯變化。見圖1。2.2RVL微量注射Ang后AP和HR的變化單側(cè)RVL微量注射Ang后，AP不同程度升高。2in時達頂峰，給藥后15in時根本恢復至基線程度。奧美沙坦組AP增幅低于SHR對照組(26.30.75)vs(47.21.41)Hg，P0.01，但高于KY組(26.30.75)Hg，P0.05。注射Ang后三組HR均有升高，增幅分別為SHR對照組(29.30.94)、奧美

7、沙坦組(39.51.66)、KY組(38.72.24)次/in，經(jīng)方差分析，組間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.3AT1受體RNA的表達各組AT1受體RNA擴增產(chǎn)物平均光密度為：SHR組2.410.37，奧美沙坦組0.940.41，KY組0.810.22。SHR組與奧美沙坦組相比，差異有非常顯著意義(P0.01)，奧美沙坦組與KY組相比，有顯著性差異(P0.05)，見圖2。2.4AT1受體蛋白的表達各組AT1受體蛋白平均光密度為：SHR組0.930.07，奧美沙坦組0.510.09，KY組0.430.03。SHR組與奧美沙坦組相比，差異有非常顯著意義(P0.01)，奧美沙坦組與KY組相比有

8、顯著性差異(P0.05)，見圖2。3討論近年研究發(fā)現(xiàn)高血壓動物模型RVL區(qū)的血壓調(diào)節(jié)功能和微觀分子明顯受損。RVL區(qū)明顯增強的交感縮血管功能使該區(qū)對細微興奮性刺激就可引起強烈而持久的血壓波動7，8。正如本實驗中在SHR的RVL區(qū)微量注射Ang即可引起比KY大鼠明顯高的血壓波動。因此，控制RVL區(qū)亢進的交感縮血管功就有可能減弱過度的血壓波動。本文觀察到口服奧美沙坦可以明顯減弱Ang在SHR的RVL引發(fā)的升壓反響，說明奧美沙坦不僅可以阻斷外周AT1受體，而且可以作用于心血管調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)元外表的AT1受體，減弱中樞升壓反響。本實驗又發(fā)現(xiàn)給予奧美沙坦4后SHR的RVL區(qū)AT1受體蛋白和RNA和程度均明

9、顯降低。這些研究結(jié)果說明口服奧美沙坦可以通過降低SHR的RVL組織中AT1受體程度，從而減弱該區(qū)微量注射Ang引起的升壓反響。奧美沙坦是特異性咪唑類Ang受體阻斷劑，對AT1受體具有高選擇性和高親和性，臨床降壓作用穩(wěn)定、持久。本實驗顯示它可以作用于RVL區(qū)神經(jīng)元AT1受體，從而減弱該區(qū)注射Ang引起的升壓反響。但是，在正常生理情況下，奧美沙坦不易透過血腦屏障,它是通過何種途徑作用于RVL區(qū)AT1受體，進而影響中樞升壓反響的機制尚不清楚?？赡芡ㄟ^有效降低動脈血壓，再通過某種反響機制減少高血壓動物RVL區(qū)AT1受體表達。一個受體的阻斷劑長期應用往往引起該受體的表達增加，本實驗觀察到長期應用奧美沙坦可以降低SHR的RVL組織中AT1受體程度。這可能與RVL區(qū)AT1受體為組織型AT1受體和其過度表達狀態(tài)有關。這些有待進一步研究來證實。本實驗觀察到SHR的RVL區(qū)AT1受體程度明顯高于正常血壓的KY大鼠，這為RVL區(qū)AT1受體的過度表達在高血壓的形成和維持中起到重要作用的觀點提供了理論根據(jù)9，1