弓狀核損毀對小鼠ghrelin餐前分泌峰的影響

1、弓狀核損毀對小鼠ghrelin餐前分泌峰的影響弓狀核損毀對小鼠ghrelin餐前分泌峰的影響【關鍵詞】弓狀核;ghrelin;小鼠【摘要】目的觀察損毀新生小白鼠弓狀核后是否會引起血漿ghrelin程度的變化。方法取第12周正常對照小鼠和谷氨酸單鈉(sg)處理的小鼠，內眥取血，酶聯(lián)免疫分析(eia)法測血漿ghrelin程度;小鼠弓狀核冷凍切片，甲酚紫染色觀察尼氏體變化;取小鼠胃體黏膜組織，estenblt檢測prghrelin蛋白表達的變化。結果sg處理組小鼠下丘腦弓狀核尼氏體神經元數量明顯少于正常對照組小鼠(t=5.21,p0.01)。兩組小鼠血漿ghrelin程度在禁食前后均有明顯變化，但

2、兩組小鼠之間比擬差異無顯著性。與禁食前相比，禁食48h后兩組小鼠胃體黏膜組織中prghrelin蛋白表達程度明顯升高，但禁食前后兩組小鼠之間比擬差異無顯著性。結論下丘腦弓狀核對sg處理的小白鼠血漿ghrelin程度的調控并不是必需的?！娟P鍵詞】弓狀核;ghrelin;小鼠keyrdsaruatenuleus;ghrelin;ieghrelin是由胃黏膜x/a內分泌細胞釋放的一種“生長素促分泌素(ghs)，是ghs受體的內源性配體1。最初觀察到ghrelin具有強烈刺激生長素分泌的作用，隨后很快發(fā)現它可刺激攝食和新陳代謝2。包括人類在內的多種動物給予ghrelin后均增加其攝食量。ghrelin

3、為迄今惟一的由胃腸道分泌的饑餓激素，是啟動攝食的饑餓信號。無論是人還是其他動物，血漿ghrelin都有一個餐前分泌峰3，而進食后出現一個餐后抑制。另外，許多文獻報道新生鼠給予谷氨酸單鈉(sg)處理可選擇性地損毀弓狀核npy/agrp神經元4，luquet等5報道弓狀核npy/agrp神經元為成年鼠所必須，而新生鼠弓狀核損毀后攝食正常。本研究旨在觀察損毀新生小鼠弓狀核后是否會引起血漿ghrelin程度的變化。1材料和方法1.1動物分組及處理新生安康昆明種小白鼠32只，雌雄不限，由青島市藥檢局提供。隨機分為正常對照組和sg處理組，每組16只。sg處理組小鼠出生后隔日(第1、3、5、7和9天,共5次

4、)于頸部皮下注射sg(4g/g體質量)，而正常對照組只注射同體積的生理鹽水。于第4周斷乳后，小鼠自由進食、飲水，自然晝夜節(jié)律光照。1.2標本采集12周后，兩組小鼠經乙醚麻醉后，分別于禁食前、禁食48h、進食1h后內眥各取血0.5l，放入已預先參加edta(2g/l)及抑肽酶(5105u/l)處理的ep管中，4下3000r/in離心15in，取上清液，于-80保存。正常對照組和sg處理組小鼠隨機再分為禁食前、禁食48h組，每組各8只，所有小鼠在規(guī)定的時間點采用頸椎脫臼法處死，結扎胃上下兩端，速取約50g胃體部組織，立即行液氮速凍，24h后轉移至-80冰箱，以備ghrelin免疫印跡實驗。然后小鼠

5、經主動脈灌注，斷頭取腦組織并以40g/l多聚甲醛溶液浸泡24h，分別以200、300g/l蔗糖作用24h;液氮速凍，冷凍切片機切片，片厚為20，置于-80儲存?zhèn)溆谩?.3甲酚紫染色切片浸于體積分數1.00氯仿中約30in，體積分數1.00丙酮中約15in，體積分數1.00乙醇30s，體積分數0.95乙醇30s，體積分數0.70乙醇30s，超純水清洗3次;10g/l焦油紫染色10in，超純水清洗3次;體積分數0.70乙醇60s，體積分數0.95乙醇60s，體積分數1.00乙醇60s，體積分數1.00氯仿5s，分化劑約15s;體積分數0.95乙醇30s，體積分數1.00乙醇60s(共2次)，二甲苯

6、5in(共2次)，中性樹膠固封。1.4酶聯(lián)免疫分析(eia)法測定血漿ghrelin濃度1.5esternblt測定小鼠胃黏膜prghrelin蛋白表達1.6統(tǒng)計學處理采用spss16.0及pps1.57軟件進展統(tǒng)計學分析。實驗數據以s表示，組間比擬采用t檢驗和方差分析，以p0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1甲酚紫染色sg處理組小鼠下丘腦弓狀核切片平均吸光度值(0.240.09)明顯低于正常對照組的(0.830.11)，差異有顯著性(t=5.21,p0.01)。2.2各組小鼠血漿ghrelin程度比擬sg處理組小鼠在禁食48h后血漿ghrelin程度也明顯高于禁食前，進食后血漿ghrel

7、in程度又明顯降低(f=5.031，p0.01);正常對照組小鼠在禁食48h后血漿ghrelin程度明顯高于禁食前，進食后血漿ghrelin程度又明顯降低(f=2.650，p0.05)。sg處理組與正常對照組小鼠比擬，無論是在禁食前、禁食48h，還是進食后，血漿ghrelin程度差異均無顯著性。見表1。2.3各組小鼠胃黏膜prghrelin程度比擬sg處理組及正常對照組小鼠禁食48h后胃黏膜組織prghrelin蛋白表達分別為1.410.12、1.320.14，禁食前分別為0.820.09、0.710.09，兩組小鼠在禁食48h后胃黏膜組織prghrelin蛋白表達均明顯高于禁食前(t=4.3

8、9、3.54，p0.01)。而兩組小鼠之間相比擬，在禁食前、后胃黏膜組織prghrelin蛋白表達程度差異均無顯著性。見圖1。表1禁食前后兩組小鼠血漿ghrelin程度3討論相比擬而言，進食對血漿ghrelin餐后抑制研究比擬詳盡，認為其餐后抑制可能是攝入營養(yǎng)物質后所產生飽感效應的機制之一，此餐后抑制和飽感信號k有協(xié)同作用，從而終止進食。三大營養(yǎng)物質，以葡萄糖引起餐后抑制最強，而以脂肪最弱。進一步研究說明，并非營養(yǎng)物質入胃或胃擴張，而是營養(yǎng)物質進入十二指腸或小腸介導此餐后抑制8。本文旨在觀察新生小鼠皮下注射sg導致下丘腦弓狀核大局部神經元受到破壞后，是否使血漿ghrelin程度發(fā)生改變。結果顯示，無論是sg處理的小白鼠，還是正常對照小白鼠，禁食48h后，血漿ghrelin程度照舊比根底程度升高明顯，餐前分泌峰照舊存在;再進食后血漿ghrelin程度又明顯降低。且兩組小白鼠胃黏膜ghrelin前體蛋白prghrelin在禁食前后亦有明顯變化，