化學(xué)染色市公開課獲獎?wù)n件

1、血液細胞化學(xué)染色 檢測辦法與應(yīng)用 山東省立醫(yī)院 . 張健第1頁第1頁細胞化學(xué)染色概述 在組織化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來一個分支細胞學(xué)與化學(xué)相結(jié)合形成保持細胞形態(tài)基礎(chǔ)上，在細胞原位依據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理研究細胞化學(xué)成份性質(zhì)，蛋白質(zhì)、酶類、脂類、糖類、無機鹽、核酸及金屬判別各種類型血液細胞，提升血液病診斷及判別診斷、療效觀測等第2頁第2頁骨髓細胞檢查慣用染色辦法 瑞氏染色（rights stain） 姬姆薩染色（Giemsa stain)瑞氏姬姆薩復(fù)合染色 （Wright Geimsa mixture staing）第3頁第3頁過氧化物酶染色（POX）堿性磷酸酶（NAP） 鈣-鈷法 與 偶氮偶聯(lián)法 糖原染色(P

2、AS) 又稱（過碘酸-雪夫氏反應(yīng)） 鐵染色(普魯士蘭) 第4頁第4頁氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-DCE）- 醋酸萘酚酯酶染色（- NAE加NaF） 醋酸AS-D萘酚酯酶染色（NASDAE）醋酸AS萘酚酯酶染色 -丁酸萘酚酯酶染色 -NBE - 醋酸萘酚酯酶與氯化醋酸AS-D萘酚酯酶雙染色- 丁酸萘酚酯酶與氯化醋酸AS-D萘酚酯酶雙染色 第5頁第5頁其它染色辦法：SBACP染色阿利新藍染色膠體鐵染色phi小體染色等等第6頁第6頁骨髓細胞檢查中臨床應(yīng)用 一、擬定急性白血病類型： 慣用POX、SB PAS、 NAP、 ACP、 酯酶染色（.） 第7頁第7頁 二、一些血液病判別診斷：鐵染色區(qū)別

3、：缺鐵性貧血OR非缺鐵性貧血；NAP判別：CML OR 類白反應(yīng)、AA OR PNH、PV（真紅）OR 繼紅（SE）；PAS區(qū)別：M6 OR MA、Gauchers disease OR Nieman-picks disease、骨髓轉(zhuǎn)移腺癌細胞 OR 白血病細胞ACP區(qū)別：多毛細胞與淋巴細胞、T淋巴細胞與B淋巴細胞、Gauchers disease OR Nieman-picks disease第8頁第8頁 三、觀測療效、估計預(yù)后：AA NAP積分增高，當(dāng)病情好轉(zhuǎn)OR CR時NAP積分減少甚至正常；CML慢性期NAP明顯減少OR為0分，CR過程NAP上升甚至正常；IDA外鐵消失、內(nèi)鐵百分率減

4、低，當(dāng)治療有效時增長。慢性疾病所致貧血，患者體內(nèi)單核-巨噬細胞系統(tǒng)鐵釋放障礙、紅細胞利用鐵能力減少，鐵儲藏增長，因此外鐵增多、內(nèi)鐵減少。 第9頁第9頁細胞化學(xué)染色普通環(huán)節(jié) 一、固定： 保持細胞結(jié)構(gòu)和成份，依據(jù)不同成份選擇適當(dāng)固定液，可使蛋白質(zhì)、酶類、脂類、糖類、無機鹽、核酸及金屬等成份變成不溶性物質(zhì)，在染色過程中不脫落。 慣用化學(xué)固定法，如：甲醛蒸氣固定，標(biāo)本浸入甲醇、乙醇、丙酮、甲醛等固定液，兩種及以上混合液，如：10%甲醛甲醇液，甲醛丙酮液等 第10頁第10頁 二、顯色：金屬沉淀法、偶氮偶聯(lián)法、聯(lián)苯胺色素法、Schiff反應(yīng)、普魯士藍反應(yīng)、脂溶染色法等等第11頁第11頁 三、復(fù)染： 顯色后

5、，為了進行對比染色辦法，易觀測，進行復(fù)染 細胞核復(fù)染（蘇木素、甲基綠、中性紅、沙黃、核固紅） 細胞漿復(fù)染（伊紅、剛果紅、藻紅、光綠、堅固綠） 第12頁第12頁基本染色辦法瑞氏染色瑞氏染色（rights stain）染色原理： 瑞氏染料中含有美藍和伊紅二種染料，前者為堿性，后者為酸性，它們與細胞內(nèi)各種物質(zhì)含有不同親和力，而使其顯現(xiàn)出不同色調(diào)，方便于辯認。第13頁第13頁細胞核中核蛋白中強堿性物質(zhì)與瑞氏染料中酸性染料伊紅有親和力，故染成紅色；核蛋白中尚有少許弱酸性蛋白及其氨基，它又與瑞氏染料中美藍起作用，故細胞核呈紫紅色較幼稚細胞胞漿和細胞核核仁含有酸性物質(zhì)，與瑞氏染料中堿性染料美藍有親和力，故染

6、成藍色當(dāng)酸堿物質(zhì)各半時，則染成紅藍色或灰紅色，即所謂嗜多色性。第14頁第14頁試劑配制瑞氏染料 1.0g甲醇 600ml將瑞氏染料置于清潔研缽內(nèi)，加少許甲醇（也能夠加入10ml甘油，充足研磨使染料研成細粉末易溶解）充足研磨染料，加入甲醇溶解，倒入棕色玻璃瓶中，未溶解染料再加少許甲醇研磨，直到染料溶完，600ml甲醇所有用完為止。第15頁第15頁 磷酸鹽緩沖液（PH6.46.8） 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 0.3g 磷酸氫二鈉（Na2HPO4) 0.2g 蒸餾水 加至 1000ml 配好后校正PH值，備用 第16頁第16頁染色辦法 ：(1) 將已編號涂片平放于染色架上。最好不要在涂膜兩端用蠟筆

7、劃線，以免漏掉應(yīng)染之物，尤其是涂片頭、尾、及兩側(cè)部。 (2) 滴加瑞氏染液。多少依標(biāo)本所占面積大小及涂片厚薄程度而定，普通為48滴，至染液將標(biāo)本完全蓋住為止。固定細胞12分鐘。(3) 按染液：緩沖液為1：1或1：2百分比，滴加緩沖液，用吸耳球往返輕輕吹之，使之混勻。第17頁第17頁(4) 染色時間須視何種標(biāo)本、涂膜厚薄，有核細胞多少、何種細胞及室溫等而定，普通染色1020分鐘。(5) 用自來水沖洗涂片上染液。要輕輕搖動涂片，使染液沉渣浮起沖走，切勿先傾去染液再用水沖，不然，涂片上許多染料將沉淀于涂膜上。沖洗時間不可過長，水沖力亦不可太大，以防脫色或涂膜脫落。沖洗后標(biāo)本豎置在片架上，在空氣中自然

8、干燥，或用潔凈吸水紙吸干。(6) 鏡檢。第18頁第18頁 染色注意事項(1) 染色涂片沖洗后，應(yīng)自然干燥或風(fēng)干。(2) 染液量需充足，勿使染液蒸發(fā)干燥，以防染料沉著于涂片上。(3) 若細胞著色淺淡，可待標(biāo)本干燥后重染；若細胞著色太濃或沉淀物過多時，可待標(biāo)本干燥后，滴加瑞氏染液數(shù)滴（利用其中甲醇褪色），后沖洗、晾干即可。 第19頁第19頁姬姆薩染色（Giemsa stain) 染液主要含伊紅、美藍兩種成份，染色原理與瑞氏染色相同 2.試劑配制 姬氏染料 0.5g 甘 油 33.0ml 甲醇 33.0ml 將染料粉未所有溶于33.0ml甘油中，加熱至55.660oC，連續(xù)90120分鐘，再加入33

9、.0ml甲醇，搖勻后置棕色瓶中，放置數(shù)天，過濾后即可應(yīng)用 第20頁第20頁染色辦法(1) 將標(biāo)本涂膜用甲醇固定分鐘。(2) 再置于稀釋過染液（10ml緩沖液加1ml染液，或30滴緩沖液加染液3滴）中，染色1040分鐘。(3) 取出涂片，用自來水沖冼，自然干燥即可。(4) 鏡檢。 第21頁第21頁瑞氏姬姆薩復(fù)合染色染色原理： 混合染色法長處是，瑞氏染液對胞漿著色好，姬姆薩染液則對核著色好，二法合并，可兼得兩者之長處 細胞 學(xué)檢查中，慣用兩者進行復(fù)合染色，使其互相補充，有助于顯微鏡下細胞區(qū)別 第22頁第22頁慣用染色辦法及臨床應(yīng)用一、過氧化物酶染色（POX） 原理： 粒細胞及部分單核細胞漿內(nèi)POX

10、酶水解H2O2釋放新生態(tài)氧氧化無色聯(lián)苯胺為氧化聯(lián)苯胺+亞硝基鐵氰化鈉棕黑色顆粒定位POX酶活性所在 第23頁第23頁 試劑：1. Washburn氏染色液配制法 聯(lián)苯胺 0.3g 95%乙醇 99ml 36%亞硝基鐵氰化鈉 1ml(360mg溶1ml) 棕色瓶內(nèi)可保留10個月左右 2稀雙氧水（需臨用前新鮮配制） 1%過氧化氫液 1滴 蒸餾水 5ml 第24頁第24頁 操作：1.新鮮涂片上加上0.3%聯(lián)苯胺酒精溶液10滴染一分鐘。2.不將聯(lián)苯胺液傾去，即加等量稀雙氧水染四分鐘。3.用水沖洗，用95%乙醇脫色。4.用瑞氏染色液復(fù)染10-20分鐘，水洗干后鏡檢。第25頁第25頁 結(jié)果判斷：陽性-胞漿

11、內(nèi)有蘭黑色顆粒 原則：（-） 無顆粒 （+/-） 顆粒細小而分布松 （+） 顆粒粗，局灶 （+） 顆粒粗大，分布密 （+） 顆粒粗大，成團 （+）顆粒分布整個細胞注意：計數(shù)100只原始細胞 （單、早幼粒不計在內(nèi)）第26頁第26頁 正常細胞反應(yīng)：粒細胞系列： 原粒（普通，少數(shù)出現(xiàn)少許顆粒）， 早幼粒下列（+，越成熟越+） EO（+）；B（）單核：/弱+，細小彌散顆粒其它：淋巴、幼紅、漿、組織細胞、巨核、血小板（）；巨噬細胞可+ 第27頁第27頁臨床意義：急粒（分化好原始粒細胞陽性，顆粒粗大而局灶分布；分化差可陰性）ALL（陰性；如+也許為原粒細胞）M5（陰性/弱陽性）M3（+）M6（原粒或單，陽

12、性或弱陽性；原、幼紅，陰性）惡組（陰性） 第28頁第28頁堿性磷酸酶（NAP）鈣-鈷法 與 偶氮偶聯(lián)法 鈣-鈷法：成熟中性粒細胞胞質(zhì)內(nèi)堿性磷酸酶堿性條件下水解B-甘油磷酸鈉磷酸鈉+硝酸鈣磷酸鈣+硝酸鈷+硫化氨硫化鈷（棕黑色）定位于酶活性處。 第29頁第29頁偶氮偶聯(lián)法：成熟中性粒細胞胞質(zhì)內(nèi)堿性磷酸酶PH9.6下水解-磷酸萘酚鈉-萘酚+重氮鹽偶氮偶聯(lián)形成偶氮色素沉淀定位酶活性所在第30頁第30頁 試劑：1、10%固定液：甲醛10ml甲醇90ml混合置4c冰箱保留 2、緩沖液：0.05M2氨基-2甲基-1，3丙二醇（2.625gH2O500ml） 3、基質(zhì)液：-磷酸萘酚鈉35mg，溶于0.05M緩

13、沖液液35ml，再加入重氮鹽固牢蘭B或RR35mg溶解4、蘇木紫染液5、可用0.1M巴比妥鈉9.85ml、0.1NHCL0.15ml、1%MgSO4.7H2O1ml、PH9.6代替丙二醇第31頁第31頁 辦法：1、新鮮固定30秒（4）水洗2、放入基質(zhì)液中30分鐘37后， 水洗5分鐘3、置蘇木紫2分鐘水洗后涼干 鏡檢 第32頁第32頁結(jié)果：陽性-呈棕黑色或黑色顆粒于漿內(nèi) 原則：（-） 漿內(nèi)無色 （+） 漿內(nèi)少顆粒1/2下列 （+） 漿內(nèi)散在中量顆粒1/23/4 （+）有豐富顆粒3/4以上 （+）豐富密布顆粒 全注意：用新鮮血片為好，觀測100只中性成熟粒細胞 第33頁第33頁 正常值：鈣-鈷法：

14、751分 （3070）偶氮偶聯(lián)法3570分第34頁第34頁臨床意義： 生理性： 新生兒嬰幼兒、兒童成人老年人 應(yīng)激狀態(tài)、妊辰（分娩時高峰）增高 病理性：、感染：細菌性感染增高“球菌桿菌”“急性慢性” ，病毒感染無明顯改變、 類白血病反應(yīng) NAP積分明顯增高、慢粒慢性期（無感染者）NAP積分明顯減少“0分”，CR期恢復(fù)正常，加速期和急變期NAP積分增高。能夠作為CML療效及預(yù)后一個指標(biāo)。第35頁第35頁、 急性白血?。杭绷AP積分減低、急淋NAP積分普通增高（能夠判別急?；蚣绷埽?、急單時NAP積分普通減低，也可正常或增高。、 AA時NAP積分明顯增高，CR時正常、PNH時NAP積分減低（能夠與

15、AA判別）、MDS時NAP積分減低（能夠與AA判別）、 PV（真性紅細胞增多癥）NAP積分增高，繼發(fā)性紅細胞增多癥NAP積分無明顯改變（有助于兩者判別）第36頁第36頁、 其它：CLL、MF、ET（原發(fā)性血小板增多）、原始神經(jīng)細胞瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌和紅血病等疾病NAP積分增高；M6、綠色瘤、鐮狀細胞性貧血等疾病NAP積分減低；惡組NAP積分減低，反應(yīng)性組織細胞增多NAP積分明顯增高。、 應(yīng)用腎上腺糖皮質(zhì)激素、雌激素、ACTH（促腎上腺皮質(zhì)激素）等NAP積分增高。 標(biāo)本新鮮（避免酶活性減低）、操作過程中最好做一份陽性對照（AA或感染）第37頁第37頁糖原染色(PAS) （高碘酸-雪夫氏反應(yīng)） 原理：

16、Schiff反應(yīng)（細胞內(nèi)含有乙二醇基糖類被過碘酸氧化雙醛基+Schiff無色品紅醛化反應(yīng)紫紅色化合物定位糖所在，可顯示糖原、粘多糖、粘蛋白等多糖類），依據(jù)糖含量多少不同，呈粗細不等紅色顆粒、塊狀物或均勻紅色。 第38頁第38頁試劑:1.固定液-甲醇或95%乙醇2.過碘酸溶液: 過碘酸0.5g+1/5M醋酸鈉5ml+蒸餾水45ml3.雪夫氏液:將200ml蒸餾水煮沸,緩緩加入堿性品紅(堿性品紅,批示劑)1.0g,待冷卻至50C(60C)時加入1NHCL20ml,待冷卻至25 0c(20C)時加入2g偏重亞硫酸鈉,馬上加蓋使其溶解,放暗處(冰箱)過夜,取出時呈淡黃或淡紅色,次日加活性碳1g(300

17、mg起吸附作用),搖勻后過濾即可，置冰箱保留4、偏重亞硫酸鈉溶液配制（含S02溶液）：取10%亞硫酸氫鈉5ml，加H20至100 ml（臨用前配）5、蘇木紫液 第39頁第39頁操作：1、涂片用甲醇固定5分鐘，水洗2、放入過碘酸溶液中氧化10分鐘（暗處），水洗待干3、置雪夫氏液內(nèi)染45分鐘（暗處），冬天37C， 用水沖洗4、用蘇木紫復(fù)染1分鐘，水洗待干 鏡檢第40頁第40頁 結(jié)果鑒定：陽性-胞漿內(nèi)呈紅色顆粒、塊狀及彌漫狀紅色物質(zhì) 第41頁第41頁 正常細胞結(jié)果：、粒系：原粒多呈（-），早幼粒下列隨成熟陽性強度逐步加強，成熟階段強陽性。Eo細胞顆粒（-）顆粒間胞漿彌漫性紅色。BS細胞（陽性，顆粒紫

18、紅、大小不一） （-）無色 （）漿呈粉紅色無顆粒 （+）漿呈淡紅細顆粒 （+）漿紅少顆粒 （+）漿暗紅多顆粒 （+）漿紫紅顆粒密第42頁第42頁 2、淋系：淋巴大多數(shù)（-），少數(shù)為（+（-）漿無色 （）漿呈淡紅色無顆粒 （+）漿呈淡紅細顆粒（10個）（+）漿紅彌漫（+）漿內(nèi)有較粗顆?；蛏贁?shù)大塊紅色顆粒（+）有較多粗顆粒，并有大塊紅色物質(zhì) 3、紅系：幼紅細胞及成熟紅細胞均（-）。 4、巨系、血小板均（+） 5、單系、漿、網(wǎng)狀細胞均大多（-）第43頁第43頁臨床意義：1、 紅系：紅血病與紅白血病時幼紅細胞（陽性），強度強，陽性率高、成熟紅細胞也可陽性。其它類型白血病或慢性白血病紅系為（陰性）。ID

19、A、珠蛋白生成障礙性貧血、MDS時幼紅細胞可陽性。MA、AA、溶血性貧血時（陰性）2、白細胞系列：ALL原始淋巴多為（陽性），紅色顆粒、塊狀于核周環(huán)狀排列。急粒，原粒細胞大多為（陰性）、少數(shù)細小顆粒陽性。急單，原單細胞陽性反應(yīng)多為細顆粒彌散分布，胞漿邊沿顆粒較粗大。 3、其它：淋巴瘤及CLL均（陽性）。R-S細胞大多（陰性），少數(shù)若陽性。Gaucher細胞（陽性）， Nieman-pick細胞（空泡中心為陰性）。骨髓轉(zhuǎn)移腺癌細胞為強陽性。 第44頁第44頁鐵染色(普魯士蘭反應(yīng)) 原理：骨髓中以含鐵血黃素形式貯存鐵為細胞外鐵；幼紅細胞內(nèi)鐵顆粒為細胞內(nèi)鐵，為鐵粒幼細胞。普魯士藍反應(yīng)（三價鐵離子+酸

20、性亞鐵氰化鉀蘭色亞鐵氰化鐵沉淀定位于含鐵部位） 第45頁第45頁試劑：1、亞鐵氰化鉀液：臨用前配，稱亞鐵氰化鉀5 g + H20 45ml + 5ml濃HCL2、酸性沙黃液：沙黃0.1g加水至100ml溶解，加醋酸0.1ml 第46頁第46頁辦法：1、甲醇固定10分鐘后，水洗2、置入亞鐵氰化鉀液中，用染缸置37水浴1小時，水洗 3、復(fù)染沙黃液10-20分鐘鏡檢第47頁第47頁 結(jié)果：紅細胞淡紅色，有鐵顆粒呈蘭色及綠色內(nèi)鐵 外鐵呈小珠或小團 第48頁第48頁 鑒定原則： 內(nèi)鐵：油鏡計數(shù)100只幼紅細胞百分率型：漿內(nèi)有1-2只鐵顆粒型：3-5只型：6-9 只型：10個以上環(huán)鐵粒幼細胞：6個以上，圍

21、繞胞核二分之一以上。 第49頁第49頁 外鐵：（-）無鐵顆粒（+）少許顆粒（+）較多顆粒及小珠（+）諸多鐵粒、小珠、小塊（+）諸多鐵粒、諸多小塊成堆 第50頁第50頁 正常結(jié)果：外鐵（+至+）內(nèi)鐵：15%-45% 多數(shù)為I型，少數(shù)II型 第51頁第51頁臨床意義：1、IDA外鐵明顯減少、消失，內(nèi)鐵減低，以I型為主。鐵治療有效，內(nèi)外鐵增長，可判斷療效。2、鐵粒幼細胞貧血：出現(xiàn)較多環(huán)形鐵粒幼細胞，可見鐵粒紅細胞，為診斷本病主要依據(jù)。 3、MDS：外鐵豐富，鐵粒幼細胞比值增高。RARS中環(huán)形鐵粒幼細胞占15%以上。 4、非缺鐵性貧血：溶貧、MA、AA和白血病等內(nèi)外鐵正?；蛟龈摺?5、感染、肝硬化、慢

22、性腎炎、尿毒癥、血色病及多次輸血后，外鐵增高。 第52頁第52頁氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-DCE） 原理： 細胞內(nèi)氯化醋酸AS-D萘酚酯酶水解氯化醋酸AS-D萘酚形成AS-D萘酚+重氮鹽偶氮偶聯(lián)形成偶氮色素沉淀定位酶活性所在 第53頁第53頁 試劑：1、固定液：10%甲醛甲醇液，4保留2、基質(zhì)液：（1）4%付品紅0.025ml，4%亞硝酸鈉0.025ml混合于一尖底管中（2）氯醋酸AS-D萘酚1mg + N二甲基甲酰胺0.5ml混合于另一尖底管中（3）將M/15PPB(PH7.6) 9.5ml加入（1）中 M/15PPB：M/15 KH2PO466ml - 9.08g/L M/15

23、Na2HPO434ml - 9.47g/L（4）將（2）和（1）混合，顏色為鮮紅色3、1%甲基綠或蘇木紫 第54頁第54頁 辦法：1、新鮮涂片置于10%甲醛甲醇液中4固定30秒水洗待干 2、置基質(zhì)液中，連盛器放入37水浴加溫1小時，然后連盛器一起水洗10分鐘，取出待干 3、用1%甲基綠或蘇木紫復(fù)染5分鐘（5-8分鐘） 4、水洗10分鐘干后鏡檢 第55頁第55頁 結(jié)果：胞漿呈鮮紅色為陽性 第56頁第56頁正常細胞：粒細胞+，活性不隨成熟而增強；EO（/+）；B（+）；M（-/個別+）；淋巴、漿、幼紅、巨核、血小板（） 第57頁第57頁 臨床意義：急粒（絕大多數(shù)原粒細胞+）、 M3（+）、M5（）

24、、 M4（部分+）、 ALL（）；如ASDCE連續(xù)陽性病情惡化；ASDCE染色比POX染色特異性高（粒細胞酯酶染色）。 第58頁第58頁中性非特異性酯酶染色原理：血細胞中酯酶在PH中性條件下水解基質(zhì)液底物中相應(yīng)萘酚基萘酚 +重氮鹽偶氮偶聯(lián)形成偶氮色素沉淀定位酶活性所在 第59頁第59頁依據(jù)基質(zhì)液底物可有 1、- 醋酸萘酚酯酶染色 （- NAE） PH中性 2、醋酸AS-D萘酚酯酶染色 （NASDAE）PH中性 3、醋酸AS萘酚酯酶染色 PH中性 第60頁第60頁- 醋酸萘酚酯酶染色（- NAE加NaF）堅牢蘭B 灰黑棕 PH中性試劑：1、固定液：40%甲醛 2、基質(zhì)液：-醋酸萘酚10mg溶解于

25、50%丙酮水溶液1ml，再加入PH7.4磷酸緩沖液（0.05mol/L）50ml加50mg堅牢蘭B混勻3、NaF75mg4、蘇木紫染液或2%甲綠第61頁第61頁 辦法：1、鮮涂片用甲醛蒸氣固定5-10分鐘，水洗干后2、置入基質(zhì)液中1小時（37水浴中）3、連染色缸一同水沖洗2分鐘，干后4、用蘇木紫復(fù)染1-2分鐘或用2%甲綠復(fù)染 10分鐘5、水洗干后鏡檢（附）：氟化鈉克制試驗-配二缸基質(zhì)液，其中一缸加75mgNaF，二張涂片按上述在二缸內(nèi)各自染色即可 第62頁第62頁 結(jié)果：（-）無素沉著（）淡黃灰色沉著（+）胞漿1/2區(qū)域出現(xiàn)灰黑或棕黑色沉淀（+）胞漿3/4區(qū)域出現(xiàn)灰黑或棕黑色沉淀（+）胞漿所有

26、區(qū)域出現(xiàn)灰黑或棕黑色沉淀（+）胞漿所有被深黑色團塊沉淀充斥，密度很高 NAF克制試驗： 克制率=（克制前-克制后）/克制前*100% 第63頁第63頁 正常細胞反應(yīng)：M及組織細胞（+，NAF克制）粒（/個別+，NAF不克制）巨核血小板（+，NAF也許克制）幼紅與淋巴（/個別+，NAF不克制）漿（） 第64頁第64頁 臨床意義：M5（原、幼、單都+，NAF克制）、急粒（/個別+，NAF不克制）、M3（、+、+/ NAF不克制）、ALL（，T細胞急淋可+/ NAF不克制）、M4（部分+）、M6（異常幼紅可+） 第65頁第65頁-丁酸萘酚酯酶染色 -NBE 原理：細胞中-丁酸萘酚酯酶在PH堿性條件下水解基質(zhì)液中-丁酸萘酚生成-萘酚+重氮鹽偶聯(lián)不溶性偶氮色素，定位于酶活性處 第66頁第66頁 試劑：1、固定液：40%甲醛2、基質(zhì)液：0.1MPPB（PH8.0）10ML（KH2P0425ml-13.6g/L Na2HP04475ml- 14.2g/L） - NBE5ul，丙酮0.25