微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1、課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用2022.01.14【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1. 通過自主學(xué)習(xí)和精講點(diǎn)撥掌握培養(yǎng)基的種類和 成分。2.通過合作探究和精講點(diǎn)撥掌握無菌操作技術(shù)及 常見滅菌、消毒方法。3.通過自主學(xué)習(xí)掌握固體培養(yǎng)基制備的方法步驟。從社會中來 向經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細(xì)菌，再經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶。 一般家庭自制酸奶可能會導(dǎo)致腸胃不適，主要原因是有雜菌混入。 那么怎么才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？這需要應(yīng)用無菌技術(shù)和微生物的培養(yǎng)技術(shù) 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2、實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物條件1）提供微生物生長繁殖所需營養(yǎng)和環(huán)境條件培養(yǎng)基2）確保其它微生物無法混入無菌

2、技術(shù)1、 微生物結(jié)構(gòu)簡單、形體微小，眼睛看不到，若想得到 純凈的微生物，就必須對其進(jìn)行培養(yǎng)和分離。高壓蒸汽滅菌一、培養(yǎng)基1、概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。3、類型：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有 無 瓊脂分離、計數(shù)、鑒定等擴(kuò)大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)2、作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。閱讀P14回答長有酵母菌菌落盛有液體培養(yǎng)基（ 提供微生物繁殖所需各種營養(yǎng)， 異養(yǎng)微生物的能源）液體培養(yǎng)基表面生長均勻混濁生長沉淀生長選擇培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入（缺少）某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長。用以菌種的分離。4.培養(yǎng)基的種類鑒

3、別培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品。用以菌種的鑒別。 按用途不同劃分:例：大腸桿菌伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基中加氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落選擇出沒有抗氨芐青霉素能力的細(xì)菌選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基+氨芐青霉素培養(yǎng)基 沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰怎樣選擇出沒有抗氨芐青霉素能力的細(xì)菌?加入青霉素：加入高濃度食鹽：不加氮源：不加含碳有機(jī)物：分離出酵母菌、霉菌等真菌(青霉素能殺死細(xì)菌、放線菌)分離出金黃色葡萄球菌分離出固氮菌 分離出自養(yǎng)型微生物選擇培養(yǎng)基舉例？牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。分析營養(yǎng)構(gòu)成？培養(yǎng)基組分提供的主要營

4、養(yǎng)牛肉膏 5g蛋白胨 10gNacl 5gH2O 定容至1000ml瓊脂 20.0g1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方碳源、氮源、磷酸鹽和維生素氫元素、氧元素?zé)o機(jī)鹽碳源、氮源和維生素凝固劑4、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成:（1）基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽1）碳源：無機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機(jī)碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物2）氮源：無機(jī)氮源：NH4、NO3-、NH3等有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源3）無機(jī)鹽：Ca、K 、Mg為大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁〤、

5、N等元素的營養(yǎng)物質(zhì)。表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000ml水特殊營養(yǎng)物質(zhì)：維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等（牛肉膏、蛋白胨中含有）（2）還需滿足微生物對 pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣的需求例如:培養(yǎng)乳酸菌要添加維生素；培養(yǎng)霉菌要調(diào)酸性；培養(yǎng)細(xì)菌要調(diào)至中性或弱堿性 ；培養(yǎng)厭氧菌要提供無氧條件。二、無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，避免雜菌污染的方法。主要包括消毒和滅菌兩個方面：消毒對操作的空間、操作者的衣著和手滅菌培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿玻棒、試管、燒瓶、吸管和接種環(huán)等

6、還要注意：避免已經(jīng)滅菌的材料用具與周圍物品接觸為了避免周圍環(huán)境微生物污染，操作應(yīng)在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁進(jìn)行。2.無菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程:酒精燈火焰旁操作超凈工作臺二、無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。防止外來雜菌的污染1.無菌的意義：（主要包括消毒和滅菌）1、消毒使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法，殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。（1）概念：（2）消毒的方法：煮沸消毒法： 100煮沸5-6min。巴氏消毒法： 62-65下煮30min 或 80-90下煮30s-1min。 化學(xué)藥劑消毒法：用70%酒精擦拭雙手；氯氣

7、消毒水源。 紫外線消毒法：用紫外燈照射接種室、接種箱、超凈工作臺資料卡常用的消毒和滅菌方法2、滅菌 （1）概念：指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。（2）滅菌的方法： 灼燒滅菌：酒精燈火焰灼燒效果：最徹底 原理：使微生物燃燒 對象：接種工具如接種環(huán)、接種針，以及接種過 程中的試管口或瓶口等易被污染部位芽孢 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。 芽孢壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。 孢子細(xì)菌、原生動物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖作用的無性生殖細(xì)胞。能直接發(fā)育成新個體。 原理：

8、使微生物細(xì)胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和原生質(zhì)干燥等 對象：耐高溫，需保持干燥的物品，適用于 玻璃器皿 (如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器) 金屬器具 (如針頭、 鑷子、剪刀等)的滅菌干熱滅菌：干熱滅菌箱內(nèi)160-170 下加熱1-2h 原理：高溫蒸汽破壞蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)構(gòu)使其變性 優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的 某些微生物的休眠體。基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。 對象：培養(yǎng)基等注：使用后的培養(yǎng)基必須滅菌后 才能丟棄，以免污染環(huán)境。濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa、121 下維持15-30min高壓蒸汽滅菌鍋2、滅菌 （1）概念：（2）滅菌的方法： 灼燒滅菌干熱滅菌濕

9、熱滅菌 160-170 下加熱2-3h。100kPa、121 下維持15-30min.類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100 煮沸56 min巴氏消毒法不耐高溫的液體6265 煮30 min或80-90 煮30s-1 min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30 min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160170

10、 加熱23h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100 kPa,溫度121 ,1530 min3.無菌的方法：消毒與滅菌接種室、接種箱，超凈工作臺【例3】關(guān)于滅菌和消毒的下列說法不正確的是() A滅菌是指殺死環(huán)境中的所有微生物，包括芽孢和孢子 B滅菌和消毒實(shí)質(zhì)上是相同的 C接種環(huán)用灼燒法滅菌 D常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌等課堂練習(xí)【例4】培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種針、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是()化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線消毒高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法A. B C D微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配

11、制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存三、實(shí)驗(yàn)操作大腸桿菌的純化培養(yǎng)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌例如：1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂 20.0g1.計算：培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂、攪拌補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：加棉塞、包牛皮紙、橡皮筋勒緊培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿干熱滅菌制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算稱量溶化調(diào)

12、節(jié)pH滅菌倒平板無菌檢查計算稱量溶化調(diào)節(jié)pH滅菌倒平板無菌檢查12342.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。3.用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上皿蓋。4.等待平板冷卻凝固（約需510min）。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。1.將培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。倒平板注意事項(xiàng)：溫度：50左右操作：在酒精燈火焰附近冷凝后平板倒置防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基7.無菌檢查：37的恒溫箱中培養(yǎng)12h24h ，無雜菌污染才可用來接種. 培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻到什么時候，才能用來倒平板？約50為什么這樣操作？為什么平板需倒置？酵母菌的純培養(yǎng)探究-實(shí)踐分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。1、菌落：2、純培養(yǎng)：采用平板劃線法和稀釋涂布平板法將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后得到的單菌落一般是由單個微生物形成的純培養(yǎng)物。3、原理：微生物群分散或稀釋單個細(xì)胞單個菌落繁殖方法步驟1、制備培養(yǎng)基1）配制培養(yǎng)基稱取去皮馬鈴薯