流式細(xì)胞儀分析技術(shù)

1、流式細(xì)胞儀分析技術(shù)第1頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種以流式細(xì)胞儀為工具，能快速測量細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)，如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等，并可對其分類、收集的高新技術(shù)。概述第2頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）借鑒了熒光顯微鏡技術(shù), 同時(shí)利用計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、電子技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)等多門高新技術(shù)的發(fā)展, 將熒光顯微鏡的激發(fā)光源改為激光, 使之具有更好的單色性與激發(fā)效率, 因而大大提高了檢測靈敏度,

2、同時(shí)將固定的標(biāo)本臺改為流動的單細(xì)胞懸液, 用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理, 從而大大提高了檢測速度與統(tǒng)計(jì)精確性, 而且從同一個(gè)細(xì)胞中可以同時(shí)測得多項(xiàng)參數(shù), 被譽(yù)為是細(xì)胞分析領(lǐng)域的“CT”。第3頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）以其快速、靈活、大量、靈敏和定量的特色，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐各個(gè)方面，包括細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、免疫學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)及臨床檢驗(yàn)學(xué)等，在各學(xué)科領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。第4頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四第一部分 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理第二部分 數(shù)據(jù)的顯示與分析第三部分 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要

3、求第四部分 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用第五部分 應(yīng)用舉例第5頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 流式細(xì)胞儀是將流體噴射技術(shù)、激光技術(shù)、空氣技術(shù)、射線能譜術(shù)及電子計(jì)算機(jī)等技術(shù)與顯微熒光光度計(jì)密切結(jié)合的一種非常先進(jìn)的檢測儀器。 第一部分 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理第6頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 該儀器具有高度的精密性，測定的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。既可分析單個(gè)細(xì)胞，也能區(qū)分群體細(xì)胞，檢測的速度可達(dá)5000個(gè)細(xì)胞/秒，分選純度可高達(dá)99%以上。 由于該儀器的多參數(shù)性、準(zhǔn)確性、快速性及分選的高純度性等特點(diǎn)，所以在細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、病理學(xué)及臨床

4、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中得到越來越廣泛的應(yīng)用。 第7頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四第8頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四細(xì)胞組成細(xì)胞功能大小細(xì)胞表面/胞漿/核-特異性抗原粒度細(xì)胞活性DNA, RNA含量胞內(nèi)細(xì)胞因子蛋白質(zhì)含量激素結(jié)合位點(diǎn)鈣離子, PH值, 膜電位酶活性流式細(xì)胞儀常檢測的細(xì)胞特性第9頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 經(jīng)熒光色素染色的細(xì)胞或包裹在鞘液里的其他生物微粒，從50100m的噴嘴逐個(gè)高速噴出，通過一個(gè)聚焦的光源，進(jìn)而通過各種光敏元件測量這些細(xì)胞或微粒所發(fā)射的散射光以及熒光，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析和處理可得到多種信息參數(shù)

5、。一、工作原理 第10頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四結(jié)構(gòu)示意圖第11頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四單細(xì)胞液柱已標(biāo)記的單細(xì)胞懸液和鞘液硅化管流動室噴嘴熒光檢測系統(tǒng)和散射光感受系統(tǒng)收集光信號熒光染料被激發(fā)發(fā)光光電倍增管脈沖信號計(jì)算機(jī)系統(tǒng)分析結(jié)果放大垂直相交形成穩(wěn)態(tài)水平激光與之基本過程第12頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 （1） 液流系統(tǒng) （2） 光學(xué)系統(tǒng) （3） 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1.流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)：第13頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四由樣本和鞘液組成待測細(xì)胞 單個(gè)細(xì)胞的懸液 熒光染料標(biāo)

6、記的單抗對其染色 受清潔氣體壓力 從樣品管進(jìn)入流動室形成樣本流鞘液：輔助樣本流被正常檢測的基質(zhì)液。主要作用是包裹樣本流的周圍，保持樣本流中細(xì)胞處于噴嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞噴孔。（1）液流系統(tǒng)第14頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四噴嘴FluorescencesignalsFocused laserbeam鞘液液流系統(tǒng)示意圖第15頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四FCM的液流系統(tǒng)（如何形成單個(gè)細(xì)胞流）樣本管鞘液管第16頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四激光光源：氣冷式氬離子激光器分色反光鏡：反射長/短波長，通過短/

7、長波長光束成形器：兩十字交叉放置的透鏡透鏡組：形成平行光，除去室內(nèi)光濾片：長通、短通、帶通光電倍增管：FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（熒光）（2）光學(xué)系統(tǒng)第17頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四FlowTipLaserSS and FLDetectorFS Detector光學(xué)系統(tǒng)示意圖第18頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四主要由計(jì)算機(jī)及其軟件組成（3）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)第19頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 細(xì)胞在液柱中與激光束相交時(shí)向周圍360立體角方向散射的光線信號，它的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小

8、、形狀、胞內(nèi)顆粒折射等有關(guān)，主要分為前向散射光和側(cè)向散射光。二、散射光的測定第20頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四第21頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四前向散射光（forward scatter, FS）：激光束照射細(xì)胞時(shí)，光以相對軸較小角度(0.510)向前方散射的訊號用于檢測細(xì)胞等粒子的表面屬性，信號強(qiáng)弱與細(xì)胞體積大小成正比。第22頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四FALS SensorLaser前向散射光示意圖第23頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四側(cè)向散射光（side scatter,

9、SS）：激光束照射細(xì)胞時(shí)，光以90角散射的訊號，用于檢測細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)屬性。第24頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四FALS Sensor90LS SensorLaser側(cè)向散射光示意圖第25頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 測得的FS與SS信號通過計(jì)算機(jī)處理，可得到FS-SS圖，由此可僅用散射光信號對未染色的活細(xì)胞進(jìn)行分析或分選。 此為血細(xì)胞分類的基本原理，但不能分析表面分子。淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞中性粒細(xì)胞光散射測量最有效用途：從非均一群體中鑒別出某些亞群 第26頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四熒光信號由被檢細(xì)胞上標(biāo)記的特

10、異性熒光染料受激發(fā)后產(chǎn)生，發(fā)射的熒光波長與激發(fā)光波長不同。每種熒光染料會產(chǎn)生特定波長的熒光和顏色，通過波長選擇通透性濾片，可將不同波長的散射光和熒光信號區(qū)分開，送入不同的光電倍增管。選擇不同的單抗及染料就可同時(shí)測定一個(gè)細(xì)胞上的多個(gè)不同特征。線性放大器和對數(shù)放大器三、熒光測量第27頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四熒光染料的特性激發(fā)波長(EXCITING)發(fā)射波長(EMISSION)第28頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四第29頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四熒光補(bǔ)償?shù)?0頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分

11、，星期四 通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分選主要是在對具有某種特征的細(xì)胞需進(jìn)一步培養(yǎng)和研究時(shí)進(jìn)行的。四、細(xì)胞分選原理第31頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四細(xì)胞懸液形成液流柱流動室振動液流斷裂成液滴空白液滴含細(xì)胞的液滴棄去偏轉(zhuǎn)落入收集器壓電晶體產(chǎn)生機(jī)械振動不充電充電（一）分選基本原理第32頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四分選速度：單位時(shí)間內(nèi)分選的細(xì)胞數(shù)量。與懸液中細(xì)胞的含量成正比。分選純度：分選出的目的細(xì)胞占所有收獲細(xì)胞的百分率。分選收獲率：實(shí)際收獲的分選細(xì)胞與設(shè)定通過測量點(diǎn)的分選細(xì)胞之間的比率。與純度成反比。分選得率：從一群體細(xì)胞懸液中分辨出目的細(xì)胞

12、的總量，再經(jīng)分選后得到目的細(xì)胞的實(shí)際得率。與分選速度成反比。（二）分選的技術(shù)要求第33頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四參數(shù)：FS,SS,FL數(shù)據(jù)顯示方式 （單參數(shù)直方圖 、雙參數(shù)散點(diǎn)圖 、二維等高圖 、假三維等高圖 、三參數(shù)散點(diǎn)圖 ）設(shè)門分析技術(shù) 第二部分 數(shù)據(jù)的顯示與分析第34頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四FS：反映顆粒的大小SS：反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少一、 參數(shù)第35頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四單參數(shù)直方圖雙參數(shù)直方圖:點(diǎn)圖 二維等高圖 假三維等高圖三參數(shù)直方圖多參數(shù)分

13、析直分析方圖設(shè)門分析:REGION和GATE設(shè)置二、數(shù)據(jù)顯示方式第36頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 由一維參數(shù)(散射光或熒光)與顆粒計(jì)數(shù)(COUNT)構(gòu)成，反映同樣散射光或熒光強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。（一）單參數(shù)直方圖第37頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四單參數(shù)直方圖細(xì)胞相對數(shù)量信道(channel )第38頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四雙參數(shù)直方圖：縱軸和橫軸分別代表被測量細(xì)胞的兩個(gè)測量參數(shù)，根據(jù)這兩個(gè)參數(shù)就可以確定細(xì)胞在圖上的表達(dá)位置。雙參數(shù)信號通常采用對數(shù)信號，最常用的是點(diǎn)密圖，在圖中，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，

14、點(diǎn)圖利用顆粒密度反映同樣散射光或熒光強(qiáng)度的顆粒數(shù)量的多少。（二）雙參數(shù)直方圖第39頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四1.雙參數(shù)直方圖點(diǎn)圖綠色熒光強(qiáng)度紅色熒光強(qiáng)度第40頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四雙參數(shù)直方圖點(diǎn)圖第41頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四2. 二維等高圖由類似地圖上的等高線組成，其本質(zhì)也是雙參數(shù)直方圖。等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細(xì)胞相對或絕對數(shù)，即“等高”。曲線層次越高(越里面的線) 所代表的細(xì)胞數(shù)愈多。等高線越密集則表示細(xì)胞數(shù)變化率越大。第42頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，

15、星期四二維等高圖第43頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四3. 假三維等高圖第44頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四（三）三參數(shù)直方圖第45頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 多參數(shù)分析：當(dāng)細(xì)胞標(biāo)記了多色熒光，被激發(fā)光激發(fā)后，得到的熒光信號和散射光信號可根據(jù)需要進(jìn)行組合分析。（四）流式細(xì)胞儀的多參數(shù)分析第46頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 Gate設(shè)置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細(xì)胞群分布選定其中想要分析的特定細(xì)胞群，并要求該樣本所有其他參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)這群細(xì)胞的分布情況。根據(jù)

16、門的形狀又分為了線性門、矩形門、圓形門、多邊形門、任意形狀門和十字門。 三、設(shè)門分析技術(shù)第47頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四A 淋巴細(xì)胞B 單核細(xì)胞C 中性粒細(xì)胞A、B、C均為任意門第48頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四線性門第49頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四Region設(shè)置: 區(qū)閾（region, R）與門(gate, G ) 是兩個(gè)相關(guān)的概念，區(qū)閾可與門對應(yīng)，但是也可以包含于門。第50頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四D1 CD4+/CD3-D2 CD4+/CD3+D3 CD4- /

17、CD3-D4 CD4- /CD3+如十字門分析時(shí)，起就可以由四個(gè)區(qū)域構(gòu)成，即G=D1+D2+D3+D4。 第51頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四樣本制備標(biāo)記染色液相芯片技術(shù) 質(zhì)量控制 第三部分 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求 第52頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備分離單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的樣品制備 蛋白酶消化 機(jī)械吹打 使貼壁細(xì)胞脫落 洗滌 尼龍網(wǎng)過濾單細(xì)胞懸液一、免疫檢測樣品制備第53頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備機(jī)械法酶處理法化學(xué)試劑處理法表面活性劑處理法單細(xì)胞懸

18、液的保存深低溫保存法（一年）乙醇或甲醇保存法（2周）甲醛或多聚甲醛保存法（2月）第54頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四適用條件:有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù)對488nm的激發(fā)光波長有較強(qiáng)的吸收發(fā)射光波長與激發(fā)光波長間有較大的波長差易與標(biāo)記單抗結(jié)合而不影響抗體的特異性二、常用的熒光染料與標(biāo)記染色第55頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四FITCTexas redPE.PC.APCPEcy5FL1FL2FL3FL4激光細(xì)胞懸液異硫氰酸熒光素得州紅能量傳遞復(fù)合染料藻膽蛋白類（一）幾種常見的熒光染料第56頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，

19、星期四名稱染料激發(fā)波長熒光顏色溶解性對PH敏感性特點(diǎn)異硫氰酸熒光素FITC488綠 525易敏感易溶于水，與抗體結(jié)合不影響特異性得州紅Texas red568紅 615不易不敏感穩(wěn)定，偶聯(lián)后量子產(chǎn)額低藻紅蛋白PE488橙575易不敏感具較多發(fā)光基團(tuán)，消光系數(shù)和量子產(chǎn)額高藻青蛋白PC488別藻青蛋白APC633紅670能量傳遞復(fù)合染料PEcy5488紅670易不敏感減少交叉，成本高常用的幾類熒光染料第57頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 用化學(xué)法將兩種不同激發(fā)波長的染料結(jié)合在一起，在488nm激發(fā)光照射下，通過一個(gè)熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射波長再激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生熒光

20、信號，從而檢測到該特定熒光信號。能量傳遞復(fù)合染料第58頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四PECY5CY5CY5488nm575nm670nm紅色熒光花青苷5藻紅蛋白能量傳遞復(fù)合染料機(jī)制第59頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四熒光染料與細(xì)胞成分的四種結(jié)合方式結(jié)構(gòu)親和式嵌入結(jié)合共價(jià)鍵結(jié)合熒光標(biāo)記抗體特異性結(jié)合免疫熒光標(biāo)記方法直標(biāo):干擾少,但需購買多種單抗間標(biāo):步驟多,干擾多,不需標(biāo)記多種抗體組合標(biāo)記（二）免疫熒光標(biāo)記第60頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四免疫膠乳顆粒的應(yīng)用即液相芯片技術(shù)是把微小的乳膠微球分別染成上百種不同的熒

21、光色，把針對不同檢測物的乳膠微球混合后再加入待測標(biāo)本，在懸液中與微粒進(jìn)行特異性地結(jié)合，經(jīng)激光照射后不同待測物產(chǎn)生不同顏色，并可進(jìn)行定量分析。因檢測速度極快，所以又有“液相芯片”之稱 。三、免疫膠乳顆粒技術(shù)的應(yīng)用第61頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四微小的乳膠微球分別染成上百種不同的熒光色（固相芯片是用探針在芯片上的坐標(biāo)位置給基因的特異性編碼；而液相芯片則是用顏色來編碼）第62頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四第63頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四通過對標(biāo)記不同熒光素分子的檢測，實(shí)現(xiàn)FCM對可溶性物質(zhì)的定量分析第64頁，

22、共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四適當(dāng)?shù)闹苽浞绞教幚砑t細(xì)胞實(shí)體組織來源標(biāo)本用機(jī)械法溫度2537，pH7.07.2四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制（一）單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)控第65頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四溫度pH染料濃度固定劑（二）免疫熒光染色的質(zhì)控第66頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四光路與流路校正: 確保激光光路與樣品流處于正交狀態(tài)，減少變異（CV）。PMT（光電倍增管）校準(zhǔn): 保證樣品檢測時(shí)儀器處于最佳靈敏度工作狀態(tài)。絕對計(jì)數(shù)校準(zhǔn): 保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。Flow-checkFlow-setFlow-count（三）

23、儀器操作的質(zhì)控第67頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四同型對照：即免疫熒光標(biāo)記中的陰性對照，選用相同源性的未標(biāo)記單抗作為對照調(diào)整和設(shè)置電壓，以保證特異性。全程質(zhì)量控制：與待測標(biāo)本一起標(biāo)記和檢測，結(jié)果達(dá)靶值，提示本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。（四）免疫檢測的質(zhì)控第68頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 流式細(xì)胞術(shù)目前已廣泛地被應(yīng)用于免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和逐步進(jìn)入臨床應(yīng)用各方面，用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞表面的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析，可區(qū)別多種細(xì)胞的特性，為細(xì)胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。 第四部分 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用第69頁，共80頁，2022年，5月20日

24、，11點(diǎn)19分，星期四T淋巴細(xì)胞及其亞群分析Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T)B淋巴細(xì)胞及其亞群分析B1(CD19+CD5+):產(chǎn)生IgM型自身抗體, 參與免疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān)B2(CD19+CD5-):受外來抗原刺激, 產(chǎn)生高親和性特異性抗體NK細(xì)胞分析NK(CD3-CD16+CD56+)一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析第70頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗(yàn)(死細(xì)胞與活細(xì)胞比例)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測定二、淋巴細(xì)胞功能分析三、淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型對淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型用于選擇化療方案、判斷預(yù)

25、后及檢出微小殘留病變第71頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四CD4+Th細(xì)胞、CD4+/CD8+比例MDR(+)表示對化療藥物耐藥四、腫瘤耐藥基因分析五、AIDS病檢測中的應(yīng)用第72頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四HLA-B27可出現(xiàn)在58%97%的強(qiáng)直性脊椎炎(As) 患者六、自身免疫病相關(guān)HLA抗原分析第73頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 FCM作為一個(gè)強(qiáng)大的技術(shù)平臺，已應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也越來越廣泛。目前移植免疫中的FCM應(yīng)用主要包括流式細(xì)胞術(shù)的交叉配型（Flow cytometry cr

26、oss-matching, FCXM）和群體反應(yīng)性抗體（Panel reactive antibody, PRA）檢測。七、移植免疫中的應(yīng)用第74頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四小 結(jié)流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，從分子水平上獲取多種信號實(shí)現(xiàn)對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。FCM分析中前向散射光反映顆粒的大小；側(cè)向散射光反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度；熒光反映顆粒被染上熒光部分?jǐn)?shù)量的多少，根據(jù)其標(biāo)記的抗原分子不同，即反映了不同抗原分子的表達(dá)情況。同型對照為免疫熒光標(biāo)記中的陰性對照，可使熒光標(biāo)記單抗的信號保持其特異性。對各項(xiàng)工作環(huán)節(jié)和儀器性能進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制和規(guī)范化操作，是保證FCM分析中各項(xiàng)檢測數(shù)據(jù)和指標(biāo)可靠性的關(guān)鍵。第75頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 以北京寶賽生生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Annexin-v-FITC凋亡檢測試劑盒為例，介紹一種Annexin-v-FITC和PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞檢測法。第五部分、應(yīng)用舉例第76頁，共80頁，2022年，5月20日，11點(diǎn)19分，星期四 膜聯(lián)蛋白V(Annexin-V) 一種分子量為35-36