各種生化指標(biāo)測定方法

1、各項指標(biāo)的測定方法生物學(xué)指標(biāo)的測定6 高，薹粗，節(jié)數(shù)，單株產(chǎn)量和葉面積。株高測定菜薹長度為第一片真葉基部至生長點的距離，取平均值。薹粗測定用游標(biāo)卡尺測量第 5 與第 6 片葉之間的粗度，取平均值。節(jié)數(shù)和節(jié)間長度測定節(jié)數(shù)為第一片真葉基部起至生長點的節(jié)數(shù)，節(jié)間長度=株高/節(jié)數(shù)單株產(chǎn)量測定取第 4 節(jié)位以上植株進行測定，求單株鮮重。蠟粉含量的測定S 方法測定（r S，19871.0，10ml 30 。重復(fù)三次。光和系統(tǒng)指標(biāo)的測定葉面積的測定取第5片及以上共6Li-COR 公司生產(chǎn)Li-3000A 型葉面積儀測量葉面積。用直尺測量芥藍葉片的長度（L，葉柄基部到葉尖的距離）和寬度（W，與主脈垂直的最大寬

2、度），用Li-COR公司的Li- 3000A葉片長乘以寬面積之間的回歸方程，找出最佳回歸系數(shù)。比葉重測定100.8mm打孔器，在葉片最寬處離主脈兩側(cè)的1010510min80恒重。比葉重=總?cè)~干重/總?cè)~面積(g/m2)葉綠素含量測定95乙醇浸泡法（李合生，20000.1g 用 95%的乙醇 15ml，在黑暗條件下浸泡 24h，至葉片表皮變白，取上清夜在波665nm、649nm、470nm 下測定吸光度。計算公式：葉綠素a（mg/L）=13.95A6656.88A649（1）葉綠素b（mg/L）=24.96A6497.32A665類胡蘿卜素（mg/L）=（1000A470-2.05Ca114.8

3、Cb）/245光和特性測定LI-CORLI-6400型便攜式自動光合作用測定儀測定光合CO29:0011:00。根系指標(biāo)的測定根體積測定用排水法測根系體積。根系直徑測定采用 WinRHIZO 根系分析系統(tǒng)對芥藍根系進行掃描。根系活力測定參照李合生（2000）的方法，略有改進。于菜薹采收期，稱取根尖樣品 10mL0.4%TTC371-3h1mol/L（與此同時做一空白實驗，先加硫酸，再加根樣品，37下暗保溫后加硫酸，其溶液濃度、操作步驟同上4 mL 乙酸3mL 乙酸乙酯10 mL 。用分光光度計在波長485nm TTC 還原量。單位根鮮重的四氮唑還原強度=四氮唑還原量/(根重時間)mg/(gh)

4、氮物質(zhì)含量及代謝酶活力的測定硝酸鹽含量的測定參照李合生（2000）0.5g6mL去離30 min后取出，用自來水冷卻，將提取液過濾100mL0.1mL，然后加入5水楊酸硫酸溶液0.4m30min9.5mL 8氫氧化鈉溶液，待冷卻至室溫后，在波長 410nm 處測定其吸光度，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得硝酸鹽的含量。結(jié)果按下式計算：單位鮮重樣品中硝態(tài)氮含量（mg/g）=(CV1)/(WV2) C：回歸方程中硝態(tài)氮濃度，ug/ mL； W：樣品鮮重，g；V1：樣品定容體積，mL；V2：測定用提取液體積，mL。硝酸還原酶活性的測定（20000.5g30min，4mL4C4000rpm 15min0.4mL10

5、mL1.20.1mol/LKNO3 0.4mL2mg/mLNADH25C1mL 1mL 15min 后于4000rpm5min540nm波長下比色測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算出反應(yīng)液中所產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮總量。單位樣品中硝酸還原酶活性=（xV1）/X：回歸后亞硝態(tài)氮的含量，ug； V1；提取酶時加入的緩沖液體積，mL； V2；酶反應(yīng)時加入的粗酶液體積，mL； W：樣品鮮重，g；t：反應(yīng)時間，h。游離氨基酸含量的測定采用（李合生，2000），稱取新鮮樣品，洗凈、剪碎、混勻后，迅速稱取0.5g5mL10100mL，混20 mL 干燥試1.0mL3.0mL0.1mL，搖勻， 置沸水中加熱 15min，取

6、出后用冷水迅速冷卻并不時搖動，使加熱時形成的紅的6020mL1cm 570nm 波長下測吸光度。氨基態(tài)氮（ug/g）=CV1/(WV2)C:V1：稀釋總體積，mL； V2：比色用體積，mL； W：樣品中，g?？扇苄缘鞍踪|(zhì)含量的測定采用考馬斯亮藍染色法（5mL蒸餾水研磨成勻漿后，10000rpm10min0.2mL5mL考馬斯亮藍G-2502min595nm處測定吸光度，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得蛋白質(zhì)的含量。樣品中蛋白質(zhì)的含量(mg/g)= CV1/(WV21000) C：查標(biāo)曲得到的蛋白含量，ug； V1：總提取液體積，mL； V2：測定時加樣量，mL；W：樣品鮮重，g?？寡趸到y(tǒng)的測定膜透性的測定

7、參照李錦樹等（1986）的方法，用直徑 10mm 的打孔器從芥藍葉片組織上打10 50mL 20mL DDS-307 30min 后，冷卻至室溫，再測定其電導(dǎo)率，以相對電導(dǎo)率表示細胞膜透性。相對電導(dǎo)率=（初電導(dǎo)率/終電導(dǎo)率）100%C參照比色法（李合生，200022草酸研磨至勻漿，100mL 11mL30硫酸鋅，搖勻， 1mL1514mL 于具塞大試管中，依次加入染料 2mL，二甲苯 （SK96-A）萃取約 20 500nm 處測定其吸光度，并通C 的含量。Vc 含量（mg/g）=XV1/(WV2)X：4mLVc的量，mg； V1：提取液總體積，mL； V2：測定用體積，mL； W：樣品鮮重。

8、脯氨酸含量的測定（20000.5g，5mL3% 的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中10min（提取過程要經(jīng)常搖動，冷卻后過濾至干凈的試管中，濾液即為脯2 mL 2mL 2 mL 30min4 mL 甲苯， 用快速混勻器（SK96-A）20 10mL 離心管中，在3000 r/min 5min520nm 處吸光值。脯氨酸含量（ug/g）=5X/（2W） X：標(biāo)曲查得的脯氨酸含量，ug； W：樣品鮮重，g。丙二醛（MDA）含量的測定參照李合生等（2000）0.5g5%5 mL 研3000r/min 10min2 0.67%硫代巴比2 mL 10030 1500rpm 10 450nm530nm 600n

9、m 光度。計算公式：MDA 含量（umolL1）=6.45(A532-A600)-0.56A450過氧化物酶（POD）活性的測定（1988）1g0.2g（PVP） 0.15 mol1磷酸緩沖液（pH 7.0415,000 rpm20min3 mL0.2%愈創(chuàng)木酚0.9 mL 0.1 OD470值的變化，以每分鐘OD470 變化 0.01 表示一個酶活性單位。POD總活性g1mi1/（2WT0.001）A V1：提取酶液總體積，mL； V2：測定用酶液體積，mL； W：樣品鮮重。 T：反應(yīng)時間，min。過氧化氫酶（CAT）活性測定Chance 等（1995）POD 方法。3 毫1mL 0.2%過

10、氧化氫、1.9mL3min240nm 0.01為一個酶活力單位。T總活性gmi)=1/（2WT0.001）A V1：提取酶液總體積，mL； V2：測定用酶液體積，mL； W：樣品鮮重； T：反應(yīng)時間，min。抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性的測定Nakano 1g 芥藍葉片組織， 1.6mL（PBS-（pH7.1mmol1A， 3mmol1巰基乙醇，0.5mmol1PMS，2%PVP，1mMEDT。用液氮研4 200.10ml 酶液（可視情況調(diào)整1.70ml1M2S（0.05mol/，pH7.0.10ml 5 mMAs0.10ml20mMH22，立即在20紫外AsA 并求酶活性（室溫下測定，緩

11、沖液調(diào)零。APX(ug1min=OD/dVtWt)OD：反應(yīng)時間內(nèi)吸光度的變化；t：反應(yīng)時間，min； mL； A：消光系數(shù)，2.8mM-1cm-1；d：比色杯厚度，1cm； Vt：測定液體積，mL； W：樣品鮮重，g。菜薹內(nèi)源激素（GA3,IAA,ABA，ZT）含量的測定采用吳頌如（1998）、錢利生（1996）、陳昆松等（2003）的方法，并略加 1。 采用美國安捷倫科技有限公司Agilent1100 C18 柱（250mm4.6mm,5u,Hypersil）（0.02mol/L,Ph3.5）=15：15：701mL/min,35，（GA3、21025410uL定。菜薹混合樣 1g6 毫升 80%預(yù)冷甲醇冰浴研磨，4浸提 20 小時離心（12000rpm,4,10分鐘）殘渣合并上清液3毫升80%甲醇浸提并離心兩次加吸附色素（12000rpm,4,10 分鐘） C18 小柱甲醇液真空干燥儀蒸干pH3.0NA2HPO4-檸檬酸緩沖液 1ml 溶解,乙酸乙酯等體積萃取 3 次3ml酯相（上層）1ml水相（下層