組織病理切片的制作過程

1、 3組織病理切片的制作過程外科手術(shù)切除標(biāo)本、活檢標(biāo)本、尸檢標(biāo)本或動(dòng)物，并確定取材的部位不然，無法到達(dá)教學(xué)、科研和臨床診斷的目的，具體要求如下：固定，以保證原有的形態(tài)學(xué)構(gòu)造。2.0cm2.0cm0.3cm，以使固定液0.10.2cm0.3 0.5cm，這樣可以同一蠟塊制作出較多的教學(xué)切片。切勿過緊，以免因擠壓而使組織、細(xì)胞變形。的不同，依據(jù)要求標(biāo)準(zhǔn)化取材。往是顯示組織形態(tài)構(gòu)造的關(guān)鍵，如長管狀器官以橫切為好。干凈后再放入固定液中。全變形。為此可將組織展平，以盡可能維持原形。固定置入液態(tài)固定劑中進(jìn)展固定，通常，標(biāo)本與固定液的比例為 1:420，但組織塊不宜過大過厚，否則固定液不能快速滲透。故取組織塊

2、的大小一般為 2.0cm2.0cm0.3cm。(2)注射、灌注固定法：某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部，或需要對管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)組織和全身，從而得到充分的固定。則應(yīng)在血片未枯燥前承受鋨酸或甲醛蒸汽接觸固定。最常用的固定液有 10%甲醛固定液和 95%乙醇固定液。列不同濃度的乙醇。完成。丙酮也是一種脫水力量很強(qiáng)的脫水劑，但因其脫水力量很強(qiáng)，對組織有猛烈收縮作甲酯等。浸蠟、包埋使石蠟浸入組織中，取代組織中含有的透亮劑。稱蠟塊，此過程稱為包埋。切片和貼片0.10.2cm否則易造成組織皺縮不平。彎、漂烘溫控儀(3)安裝蠟塊：將修好的蠟塊安裝在金屬或木制持蠟器上。片時(shí)不產(chǎn)生振動(dòng)，能保持肯

3、定的切片厚度。050m025m，可任意選擇其46m。切片4045度，將略皺的蠟帶自然展平。貼片、烘片：待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中段處傾去1530脫去溶化組織間隙的石蠟。H.E木素是一種堿性染料,可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色，如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等；伊H.EH.E常規(guī)蘇木素染色中的比照染色是用伊紅,近年來在英、美國家的一些試驗(yàn)室則承受焰紅phloxine,GOrangeG、比布里希猩紅(Biebrich scarlet)、波粒等常用的染料。1 . 取材取材的好壞，直接影響切片的質(zhì)量。醫(yī)生在取材時(shí)，首先要有一把銳利的取材刀， 在切割組織時(shí)要避開取材刀來回拖拉，切取的組織塊厚

4、薄要均勻，一般厚度以 0.2 0.3cm維平行走向切取為佳。2置的過程。固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶與腐敗，防止了細(xì)胞內(nèi)的酶對蛋白質(zhì)的以保持原有的構(gòu)造與生活時(shí)相仿。另外，組織固定后，均呈肯定的硬化狀態(tài)，增加組織韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。所以組織一旦離體必需準(zhǔn)時(shí)固定，固定5度、固定的溫度和時(shí)間有關(guān)。最常用的固定液為10福爾馬林。筆者認(rèn)為，10福爾馬林由于受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時(shí)的揮發(fā)和取材時(shí)帶入的水分影響，濃度被降低致組織固定缺乏，而高濃度的福爾馬林，降低了對組織的穿透性，形成四周固定好而中心固12152cm一般需要 612361837以46HEPH3.54.5, 中性福爾

5、馬林對原有很好的保存作用，但酸性福爾馬林對絕大多數(shù)抗原來說也有很好的保存作用，所以在沒有特別處理的狀況下常規(guī)HE 用1215每100 毫升1215 5BouinBouin4上的固定液；少數(shù)單位還可建立組織冷凍庫，以便適應(yīng)各種特別的處理要求。3.固定后水洗1020原的保存4所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一緣由是簡潔造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的緣由還有加溫35、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過多等觀點(diǎn)很片面，在常溫下，假設(shè)不是時(shí)間過長超過4二甲苯并不會(huì)引起組織過份發(fā)脆，相反會(huì)使某些組織構(gòu)造比較質(zhì)韌的組織：比方子宮肌瘤等相當(dāng)好切，但35脫水，一般狀況下

6、，大標(biāo)本脫水時(shí)間1880295酒精2 道123122 30-60相關(guān)。我們在實(shí)踐中覺察，室溫在1215時(shí)，可作為一個(gè)臨界溫度范圍。當(dāng)室溫高于此溫度范圍時(shí)，組織簡潔脫水，可適當(dāng)縮短脫水時(shí)間；而室溫低于該溫度范圍時(shí)，應(yīng)適當(dāng)延長脫水時(shí)間如能保證在一個(gè)恒定的溫度下最正確。更換試劑，應(yīng)以量為根底，定量更換，不能等到切片不好時(shí)再去更換。否則，至少會(huì)有 23 批組織切片不好。依據(jù)500ml，500浸蠟組織透亮后，在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱為浸蠟。用其他浸透劑如火棉膠、明膠等滲入組織內(nèi)部的過程可稱為浸透或透入。浸蠟溫度過高60，在蠟內(nèi)參加二甲苯蠟或由于透亮?xí)r帶進(jìn)的二甲苯過多，都會(huì)導(dǎo)致組織發(fā)硬，還會(huì)使組織內(nèi)的抗

7、原受到破壞；所以作者主見浸蠟用的石蠟熔點(diǎn)在56三道，第一道：石蠟3090，905658第一而且由于硬脂酸是弱酸性的，對細(xì)胞核有媒染作用，核漿比鮮亮，但簡潔脫片；同時(shí)對疏松組織簡潔散片。有條件的可以每天翻開第一道石蠟的蓋子，讓二甲苯揮發(fā)。浸蠟所用的石蠟如有雜質(zhì)盡可能過濾，以防附在組織上，造成切片刀刀口受損，或切片裂開和劃痕增多。包埋二是方位。要求在包埋時(shí)，應(yīng)承受鑷子輕壓組織塊拱起部份，使之平貼于底部，通常承受組織的最大面包埋。囊壁、管腔組織應(yīng)豎直包埋。小塊多顆組織，應(yīng)盡量放在一起， 并保證在一個(gè)平面上。修去兩邊的余蠟所謂的兩邊，指切片時(shí)與切片刀垂直的兩側(cè)。包埋時(shí)還應(yīng)留意有無縫線，紙絮，如有肯定要

8、去除。胃黏膜活檢標(biāo)本，不能按一般的規(guī)律取最大包埋面，應(yīng)實(shí)行窄面豎起包埋。包埋的蠟更應(yīng)過濾，留有雜質(zhì)的石蠟，簡潔造5658軟蠟包埋的蠟塊，到了夏天，會(huì)粘在一起，不利于資料的保存，而且即使在冬天，用硬蠟包埋的蠟塊也比用軟蠟包埋的蠟塊要好切。磨刀要想切好一張切片，首先要有一把銳利的切片刀。磨刀是從事切片技術(shù)人員的一項(xiàng)最根本技術(shù)，刀磨的好壞，直接關(guān)系到切片的質(zhì)量。磨刀的手法各人不同，但都要求用力均勻，使刀口和磨刀石全面接觸，兩手的用力點(diǎn)應(yīng)在刀口上，而不是在刀背上。切片1015磨掉，檢查切片刀是否銳利，用手試摸刀口的方法并不格外科學(xué)，不僅不能證明切片刀是否真正銳利，而且簡潔損害刀口，最簡潔的方法是每次磨

9、好后拿一個(gè)蠟塊試切一下。會(huì)使切片刀產(chǎn)生很多細(xì)小的缺口?，F(xiàn)在很多單位都買了磨刀機(jī)，磨刀機(jī)用來開刀鋒和磨缺口確實(shí)不錯(cuò)，但由于磨刀的角度和時(shí)間不易準(zhǔn)確把握，故效果并不抱負(fù)。依據(jù)我們的閱歷，真正的鋒刃很難用機(jī)器磨出來。一次性刀片在很大程度上解決了這個(gè)問題。如用一次性刀片，必需準(zhǔn)時(shí)更換刀口。一個(gè)刀口切小標(biāo)本不應(yīng)超過 2025 只蠟塊，切大標(biāo)1015切片切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大約在0100較小的組織應(yīng)再薄一些，粗切致組織全部暴露后，才進(jìn)展細(xì)切。細(xì)切至組織塊外表均勻全都，無白點(diǎn)后，再把切的蠟片放入溫水中。切片時(shí)要求用力均勻、嚴(yán)峻，搖速不易過快或過慢。過快會(huì)導(dǎo)致切片厚薄不均，機(jī)器磨損；過慢會(huì)使切片增

10、厚。切片厚度一般為片的不完整，常會(huì)將重要病變遺漏，導(dǎo)致誤診、漏診。在切片放蠟塊時(shí)，應(yīng)留意組織包埋的方向，組織的層次，纖維、肌肉等的走向應(yīng)與切片刀平行，較難切的局部應(yīng)放在上面，如皮膚的表皮，腫塊的包膜，胃腸道的漿膜等，這樣可以削減組織的斷裂現(xiàn)象。操作切片機(jī)時(shí)應(yīng)用力均勻，避開用力過重。對脫鈣組織、骨髓，以及的鈣化組織，應(yīng)選用固定的刀口，以削減其他部位消滅缺口的可能性。在使用毛筆展片時(shí)要防止筆絲進(jìn)46認(rèn)為：只要切片機(jī)刻度標(biāo)著幾個(gè)微米，切出來的片子就是幾個(gè)微米。其實(shí)不然，當(dāng)切片刀不銳利，或切片時(shí)速度不勻，或切的較慢時(shí)，切的片子都會(huì)變厚，只有在切片刀格外銳利、切片勻速的狀況下，才能真正保證其厚度。下面是

11、切片時(shí)遇到的問題的緣由及可能處理的方法：(1)組織發(fā)脆：一般是脫水、透亮、浸蠟時(shí)間過長、溫度過高，并與組織本身質(zhì)地也有關(guān)，在切片時(shí)，邊切邊用嘴向蠟片吹氣，可能會(huì)好些。(2)切片卷起，可能是刀不銳利，或刀鋒在另一面，或刀角度過大，切片太厚等等。(3)蠟片彎曲：可能是刀鋒不均，切片刀未磨直，切片刀與蠟塊不平行。(4)過高，并與組織本身質(zhì)地也有關(guān)(5)厚薄不均：可能是刀、刀座及蠟塊未夾緊，組織太硬，或切片機(jī)主軸太向前，或切片機(jī)已磨損。(6)切片消滅裂痕：可能是刀有缺口，石切不下片，切片很厚，或者切片后蠟塊發(fā)白，內(nèi)陷：組織脫水不佳。補(bǔ)救方法：可先將蠟塊溶解，取出組織，放入加熱水浴的丙酮內(nèi)80，3060

12、包埋切片，或許會(huì)好一點(diǎn)。展片與撈片4247之間，這主要和包埋蠟的熔點(diǎn)有關(guān),水溫過高，會(huì)引起組30%酒精水溶液中，讓酒精的張力自動(dòng)把皺摺開放，然后再將切片移到熱水，這樣的片子會(huì)較薄;如酒精濃度過高，簡潔引起切片裂開，消滅裂隙，像脂1/31/3烤片和脫蠟20易著色或著色不勻，所以，脫蠟用的二甲苯要經(jīng)常更換，一般用 3 道二甲苯，每 500ml 液體，處理 500 張切片后更換一次為宜。當(dāng)室溫低于 18馬上放入二甲苯中脫蠟，或?qū)⒍妆椒湃霚叵鋬?nèi)預(yù)熱37左右脫蠟，最高不得超過60。然后經(jīng)高濃度的酒精到低濃度的酒精洗去二甲苯，至水。染色515自來水藍(lán)化，并充分水洗5，以防鹽酸殘留導(dǎo)致切片褪色。我們釋氨水、肥皂水等促藍(lán)，盡管藍(lán)化效果很好，但從實(shí)踐的結(jié)果520。失誤，所以用顯微鏡把握是最保險(xiǎn)的方法。其關(guān)鍵的步驟在于蘇木素染好后的分化及藍(lán)化過程，在藍(lán)化完畢后，應(yīng)在顯微鏡下觀看細(xì)胞核著色是