DB2301∕T 102-2022 大豆胞囊線蟲生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程

1、ICS 65.020.20CCS B 152301黑龍江省哈爾濱市地方標(biāo)準(zhǔn)DB2301/T 1022022大豆胞囊線蟲生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程2022-07-18發(fā)布2022-08-17實(shí)施哈爾濱市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB 2301/T 1022022前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：中國科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所農(nóng)業(yè)技術(shù)中心、哈爾濱市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站。本文件主要起草人：許艷麗、王崇生、陸欣春、嚴(yán)君、

2、潘鳳娟、宋潔、董麗民、胡巖峰、鄒文秀、陳旭、居瀚尋。IDB 2301/T 1022022大豆胞囊線蟲生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了大豆胞囊線蟲（Heterodera glycines Ichinohe）溫室定量接種鑒定方法，包括土壤和蛭石準(zhǔn)備、鑒別寄主準(zhǔn)備、接種物制備、線蟲卵或線蟲接種、調(diào)查、鑒定有效性，及鑒定檔案的建立。本文件適用于哈爾濱市行政區(qū)內(nèi)大豆種質(zhì)資源和品種對大豆胞囊線蟲生理小種的鑒定與評價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）

3、適用于本文件。NY/T 3059大豆抗胞囊線蟲鑒定技術(shù)規(guī)程。34術(shù)語和定義NY/T 3059界定的術(shù)語和定義適用于本文件。接種前準(zhǔn)備土壤和蛭石準(zhǔn)備采集沒有種過豆科植物的土壤，過20目篩，與同樣過篩后的沙子以21的比例混合成沙土，121濕熱滅菌2h后，裝入直徑5cm、高20cm的無底塑料柱中備用。蛭石也經(jīng)121濕熱滅菌2h。鑒別寄主準(zhǔn)備4.2.1鑒別寄主大豆抗胞囊線蟲生理小種鑒別寄主有 PI88788、PI90763、Peking、Pickett和感病品種 Lee。4.2.2鑒別寄主催芽將5個(gè)鑒別寄主的大豆種子分別置于滅菌蛭石中催芽。4.2.3鑒別寄主移栽準(zhǔn)備將5個(gè)塑料柱一起放在同一個(gè)有底塑料桶

4、中，每個(gè)塑料柱中裝600g上述混合的滅菌沙土。4.2.4鑒別寄主移栽當(dāng)鑒別寄主大豆子葉即將展開時(shí)，選根長相同的幼苗移栽于塑料柱中，每個(gè)塑料桶中的5個(gè)塑料柱里分別對應(yīng)5個(gè)鑒別寄主大豆，每個(gè)塑料柱栽植1株，每個(gè)待鑒定大豆胞囊線蟲樣本用4個(gè)桶，即4次重復(fù)，將塑料桶放置在日光溫室內(nèi)，隨機(jī)擺放，溫室2228、16h光照條件。每天正常澆水管理。2DB 2301/T 10220225接種接種物制備將待測樣本的胞囊置于200目和500目套篩上，用組織研磨器將200目篩上的胞囊進(jìn)行破壁研磨，或用橡皮塞在200目篩上研磨，釋放出胞囊內(nèi)的卵，然后用強(qiáng)水流沖洗200目篩上物，同時(shí)收集500目篩上的卵，制備成150粒/

5、mL的卵或線蟲懸液，4 保存?zhèn)溆?。線蟲卵或線蟲接種鑒別寄主大豆苗移栽3d后接種大豆胞囊線蟲卵或線蟲懸浮液。采用根圍接種法，每株苗接種10mL線蟲卵懸浮液（150粒/mL），即接種1500粒卵或線蟲/株。6調(diào)查及鑒定有效性調(diào)查接種線蟲28d35d后，檢查感病寄主品種Lee根部大豆胞囊線蟲發(fā)育情況。當(dāng)大豆胞囊線蟲黃白色雌蟲突出根表皮時(shí)，取出所有鑒別寄主大豆苗，取全根系，輕輕抖掉根上土，調(diào)查大豆根上大豆胞囊線蟲雌蟲的數(shù)量，并計(jì)算雌蟲指數(shù)。試驗(yàn)設(shè)置4次重復(fù)。鑒定有效性判斷當(dāng)1株感病寄主Lee根上附著的雌蟲大于30個(gè)時(shí)，結(jié)果有效，否則無效。7生理小種確定生理小種確定根據(jù)雌蟲指數(shù)(FI)劃分。雌蟲指數(shù)(F

6、I)按公式（1）計(jì)算。FI = 100(1)式中：T每株鑒別寄主根上雌蟲平均數(shù)量；C每株感病品種 Lee上的雌蟲平均數(shù)量。雌蟲指數(shù)FI10時(shí)為感，記作“+”，10時(shí)為抗，記作“-”。根據(jù)Riggs等生理小種劃分標(biāo)準(zhǔn)鑒定生理小種。見NY/T 3059附錄A。8結(jié)果記錄和報(bào)告撰寫根據(jù)鑒定結(jié)果，撰寫鑒定報(bào)告，并附原始數(shù)據(jù)。大豆抗胞囊線蟲生理小種鑒定原始記錄表見表A.1，大豆抗胞囊線蟲生理小種鑒定結(jié)果記載表見表A.2。9鑒定檔案的建立3DB 2301/T 1022022應(yīng)建立鑒定檔案，內(nèi)容包括土壤樣品采集、接種前準(zhǔn)備、接種、調(diào)查、生理小種確定、結(jié)果記錄和報(bào)告撰寫及鑒定檔案的建立。檔案保存3年以上，建檔

7、備查。4DB 2301/T 1022022附錄 A（規(guī)范性）大豆抗胞囊線蟲生理小種鑒定記錄表A.1大豆抗胞囊線蟲生理小種鑒定原始記錄表見表A.1。表A.1大豆抗胞囊線蟲生理小種鑒定原始記錄表待鑒定線蟲樣品在鑒別寄主根系附著雌蟲數(shù)（個(gè)/株）鑒別寄主重復(fù)12345678910IIIPekingIII平均IIIPI88788PI90763PickettLeeIII平均IIIIII平均IIIIII平均IIIIII平均注1：鑒定地點(diǎn)注2：接種生理小種編號(hào)注3：接種日期來源調(diào)查日期鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：5DB 2301/T 1022022A.2大豆抗胞囊線蟲生理小種鑒定結(jié)果記載表見表A.2。表A.2大豆抗胞囊線蟲生理小種