毛細(xì)管電泳高頻電導(dǎo)法測(cè)定夏枯草中齊墩果酸和熊果酸的含量

1、毛細(xì)管電泳高頻電導(dǎo)法測(cè)定夏枯草中齊墩果酸和熊果酸的含量Keyrds:apillaryeletrphresis；highfrequenyndutivitydetetr；Prunellavulgaris；leanliaid；ursliaid夏枯草為中醫(yī)臨床常用中藥，味辛、苦，性寒，具有消火、明目、散結(jié)、消腫的作用，用于目赤腫痛、目珠底痛、頭痛眩暈、高血壓等1。夏枯草中含有多種三萜類成分，以齊墩果酸leanliaid，A和熊果酸ursliaid，UA的含量較高，A和UA屬于構(gòu)造異構(gòu)體，在別離時(shí)具有一定難度。目前有關(guān)的含量測(cè)定方法有薄層色譜法2、高效液相色譜法3,4、氣相色譜法5、毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜法

2、6等檢測(cè)方法。本文采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳apillaryzneeletrphresis,ZE，高頻電導(dǎo)highfrequenyndutivitydetetin檢測(cè)的方法7，對(duì)不同產(chǎn)地夏枯草藥材中A和UA的含量進(jìn)展測(cè)定，為藥材質(zhì)量控制提供了可借鑒的根據(jù)。2實(shí)驗(yàn)局部2.1溶液的制備2.1.1內(nèi)標(biāo)溶液精細(xì)稱取布洛芬對(duì)照品40.6g置50L量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)貯備液質(zhì)量濃度為812g/L。2.1.2對(duì)照品溶液精細(xì)稱取A對(duì)照品16.4g、UA對(duì)照品17.2g置50L量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液質(zhì)量濃度分別為328g/L和344g/L。2.1.3供試品溶液取

3、本品粉末約1g，精細(xì)稱定，置索氏提取器中，加甲醇80L，加熱回流2h，放冷，提取液轉(zhuǎn)移至100L量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。2.3方法學(xué)考察2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別汲取一定量的對(duì)照品貯備液、內(nèi)標(biāo)溶液，加甲醇稀釋成含齊墩果酸質(zhì)量濃度為4.1、8.2、16.4、32.8、49.2、82.0、114.8g/L，熊果酸質(zhì)量濃度為4.3、8.6、17.2、34.4、51.6、86.0、120.4g/L與內(nèi)標(biāo)溶液質(zhì)量濃度均為40.6g/L的系列溶液。依次重力進(jìn)樣10s，每個(gè)濃度測(cè)定3次以上。以對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)Y，對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)展線性回歸

4、，分別得回歸方程YA=0.012-0.0321r=0.9995；YUA=0.0119-0.0309r=0.9996。說(shuō)明A質(zhì)量濃度在4.1114.8g/L、UA質(zhì)量濃度在4.3120.4g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。1.齊墩果酸；2.熊果酸；3.布洛芬；4.水圖1對(duì)照品A和樣品B的毛細(xì)管電泳色譜圖略Fig.1HPEhratgrasfthentrls(A)andsaples(B2.3.2精細(xì)度試驗(yàn)取質(zhì)量濃度分別為82.0、86.0g/L的A與UA對(duì)照品溶液，重力進(jìn)樣10s，連續(xù)測(cè)定5次，記錄峰面積并計(jì)算RSD。結(jié)果A的RSD=2.48%、UA的RSD=3.73%，說(shuō)明儀器精細(xì)度良好。2.3.

5、3穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液批號(hào)1在0、2、4、8、24h，分別重力進(jìn)樣10s，記錄峰面積。結(jié)果A的RSD=4.54%、UA的RSD=1.21%，說(shuō)明供試品溶液在24h內(nèi)根本穩(wěn)定。2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)批號(hào)1樣品6份，按“2.1.3項(xiàng)下方法提娶測(cè)定。結(jié)果A的平均含量為1.01gg-1，RSD=4.10%n=6；UA的平均含量為3.73gg-1，RSD=1.61%n=6。說(shuō)明分析方法精細(xì)度良好。2.3.5加樣回收試驗(yàn)精細(xì)稱取同一批號(hào)批號(hào)1的夏枯草藥材6份，參加相應(yīng)量的A和UA對(duì)照品，按“2.1.3項(xiàng)下方法處理并測(cè)定，計(jì)算回收率。A的平均回收率為96.7%、RSD=2.48%；UA的平均回收率

6、為98.2%、RSD=3.10%。結(jié)果說(shuō)明方法準(zhǔn)確、可靠。結(jié)果見(jiàn)表1和表2。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4樣品測(cè)定取不同產(chǎn)地的夏枯草，按“2.1.3項(xiàng)下方法處理后測(cè)定，記錄峰面積，代入回歸方程計(jì)算樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。表1A回收率試驗(yàn)結(jié)果略Tab.1Reveryfleanliaid(n=6)表2UA回收率試驗(yàn)結(jié)果略Tab.2Reveryfursliaid(n=6)表3夏枯草樣品中A和UA的含量測(cè)定結(jié)果略Tab.3ntentsfleanliaidandursliaidinthesaple3討論圖2環(huán)糊精濃度對(duì)別離度的影響略3.3別離電壓和進(jìn)樣時(shí)間的影響別離電壓決定了電場(chǎng)強(qiáng)度的大

7、小，影響電滲流和待測(cè)物質(zhì)的遷移速度，也是影響別離的重要因素之一。在毛細(xì)管內(nèi)徑和長(zhǎng)度固定的條件下，一定范圍內(nèi)，組分的遷移時(shí)間和別離電壓成反比關(guān)系，隨著別離電壓增大，樣品的遷移速度加快，別離度和靈敏度也越大。在722kV別離電壓下進(jìn)樣分析，結(jié)果說(shuō)明，高的別離電場(chǎng)令電滲流速度加快，出峰時(shí)間明顯縮短，有利于加快分析速度。但別離電壓過(guò)高，焦耳熱增大，會(huì)導(dǎo)致噪音大幅度增加，當(dāng)別離電壓到達(dá)18kV時(shí)基線有明顯的毛刺，并且可以聽(tīng)到高壓放電的聲音。選擇別離電壓為12.5kV。進(jìn)樣量同時(shí)受進(jìn)樣時(shí)間和進(jìn)樣高度的影響。在20高度下比擬了進(jìn)樣時(shí)間為2.020.0s的別離效果，結(jié)果說(shuō)明，峰高隨著進(jìn)樣時(shí)間延長(zhǎng)而增加，但當(dāng)進(jìn)

8、樣時(shí)間大于14.0s時(shí)，峰高增加幅度下降，區(qū)帶展寬趨于明顯，峰形受到影響；進(jìn)樣時(shí)間4.0s以下時(shí)，進(jìn)樣量太少，檢測(cè)到的峰高較小，不利于檢測(cè)。優(yōu)化的進(jìn)樣時(shí)間為10.0s。在一樣條件下考察了虹吸進(jìn)樣高度為10.030.0的別離檢測(cè)效果。綜合考慮，選擇的進(jìn)樣高度為20。3.4供試品提取方法的選擇實(shí)驗(yàn)比擬了甲醇、體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇、乙醚、三氯甲烷4種提取溶劑，乙醚、三氯甲烷提取液的雜質(zhì)較少，但提取率不高，甲醇與體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇提取率相當(dāng)，而甲醇提取液色譜圖雜質(zhì)峰少，對(duì)熊果酸與齊墩果酸測(cè)定無(wú)干擾，基線較平穩(wěn)。選擇甲醇作溶劑后，比照超聲、索氏、加熱回流3種提取方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲和加熱回流提取均不如索氏提取的提取率，用索氏提取2h的樣品基線穩(wěn)定，提取完全，A和UA的