超高壓水射流對黃柏提取液中鹽酸小檗堿含量影響的研究

1、超高壓水射流對黃柏提取液中鹽酸小檗堿含量影響的研究【摘要】目的研究超高壓水射流對黃柏提取液中鹽酸小檗堿的影響。方法通過超高壓150350Pa水射流處理黃柏醇提液，采用薄層色譜法定性鑒別和高效液相色譜法測定黃柏提取液中鹽酸小檗堿及含量變化。結(jié)果不同超高壓水射流處理黃柏提取液后，黃柏的薄層圖譜中斑點個數(shù)、大小及Rf值無顯著差異;高效液相色譜中峰個數(shù)及形狀亦無明顯差異，且經(jīng)超高壓150350Pa水射流處理后，黃柏中鹽酸小檗堿的含量較黃柏原液均有不同程度的升高。結(jié)論該研究可為超高壓水射流對中藥有效成分的影響提供根據(jù)，為研究中藥新的加工處理方法進展有益的討論?！娟P(guān)鍵詞】超高壓水射流;高效液相色譜法;薄層

2、色譜法;黃柏;鹽酸小檗堿超高壓水射流技術(shù)是近幾十年開展起來的一項新技術(shù)，它是指普通水經(jīng)過超高壓加壓器，將水加壓至100400Pa，然后通過一個直徑約為0.2左右的細小寶石噴嘴，產(chǎn)生6001000/s的水箭，可用來切割各種材料，也可對各種物體外表進展清洗，甚至用來食品滅菌，以到達食品保鮮的目的1。黃柏(rterPhelldendrihinensis)為蕓香科植物黃皮樹PhelldendrnhinenseShnEid.的枯燥樹皮，習稱“川黃柏，始載于?神農(nóng)本草經(jīng)?，列為上品，具有清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱之成效2，現(xiàn)代藥理學研究說明黃柏具有抗病原微生物、抗?jié)儭⒔祲?、抗心律失常等作?，臨床應(yīng)用非

3、常廣泛。鹽酸小檗堿為黃柏的主要有效成分之一，與抗菌消炎作用親密相關(guān)4，可作為檢測產(chǎn)品質(zhì)量的主要指標之一，但小檗堿對熱很不穩(wěn)定，受熱易破壞5，為討論中藥新的加工處理方法，進步中藥的有效成分含量，本文用HPL法測定黃柏醇提液經(jīng)超高壓水射流處理前后鹽酸小檗堿的含量?，F(xiàn)報道如下。1儀器、試劑與材料L-20AT高效液相色譜儀，包括L-20AT泵、SPD-20A紫外檢測器、AT-330柱溫箱、lass-VP數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、7725i進樣閥(日本島津公司);DPSB-3040型超高壓水射流系統(tǒng)(南京大地水刀股份)。黃柏為市售，經(jīng)本院王盛民教授鑒定為蕓香科植物黃皮樹PhelldendrnhinenseShnEI

4、d.的枯燥樹皮;鹽酸小檗堿對照品(購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-200208);乙腈為HPL級(美國Fisher公司);所用水為超純水;其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1供試品溶液的制備稱取黃柏藥材粗粉約500g，精細稱定，8倍量75%的乙醇回流提取3次，2h/次，合并提取液，過濾，減壓濃縮，回收乙醇至無醇味，溶液定容至1500l。量取黃柏提取液200l，用超純水稀釋至25L，分別在150，200，250，300和350Pa壓力條件下，經(jīng)超高壓水射流處理，將各溶液搖勻、靜置，分別取未經(jīng)處理和各處理液的上清液過0.45微孔濾膜，分別標號為0，1，2，3，4，5號，作為供試品

5、溶液。2.2對照品溶液的制備精細稱取在100枯燥5h的鹽酸小檗堿對照品12.0g，置25l容量瓶中，加流動相溶解，稀釋至刻度，搖勻;精細量取2l，置10l容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每毫升含鹽酸小檗堿0.096g)。2.3丹參的薄層色譜鑒別照薄層色譜法實驗，吸勸2.1和“2.2項制備的供試品溶液和對照品溶液各10l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10611)為展開劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開缸內(nèi)展開，取出晾干，置紫外燈(365n)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯一樣顏色的熒光斑點。斑點較為圓整，別離效果好，各供試品斑點大小及Rf值無顯著差異。

6、2.4HPL色譜條件SyetryR18(4.6250，5)色譜柱(美國aters);流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液-十二烷基(5050)(每100l加十二烷基磺酸鈉0.1g);檢測波長265n;流速1.0lin-1;柱溫30;進樣量10l。在該色譜條件下，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算不低于5000，且樣品中鹽酸小檗堿與其他組分別離效果良好，對照品及樣品的色譜圖見圖1。a-鹽酸小檗堿對照品b-黃柏樣品.鹽酸小檗堿峰轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.圖1對照品及黃柏樣品HPL圖2.5線性關(guān)系考察分別精細吸勸2.2項下制備的鹽酸小檗堿對照品溶液2，4，6，8，10l進樣測定，記錄各峰面積。以鹽酸小檗堿進樣量(g

7、)為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，得回歸方程Y=982667.66X-2575.19，r=0.9999(n=5)。結(jié)果說明鹽酸小檗堿在0.1920.960g范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。2.6精細度實驗精細汲取鹽酸小檗堿對照品溶液10l，重復進樣5次，測定峰面積，得RSD為0.73%。2.7穩(wěn)定性實驗勸2.1項未經(jīng)超高壓水射流處理的供試品溶液，同法分別于2，4，6，8，24h測定，進樣10l/次，結(jié)果RSD為1.82%，說明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.8重復性實驗取同一批樣品粉末，按樣品含量測定法同法測定5次，RSD為3.46%，說明該測定方法重復性比擬好。2.9加樣回收實驗采用加樣回收法，稱取含

8、量的黃柏藥材5份，精細稱定，再分別精細參加鹽酸小檗堿對照品溶液(0.40gl-1)20l，按“2.1項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣10l，記錄色譜圖，結(jié)果鹽酸小檗堿平均回收率為95.1%，RSD為1.15%(n=5)。結(jié)果見表1。表1鹽酸小檗堿回收率實驗2.10樣品的測定精細吸勸2.1項和“2.2項下制備的供試品溶液和對照品溶液各10l分別進樣5次，按上述色譜條件測定鹽酸小檗堿含量。結(jié)果見表2。表2樣品測定結(jié)果3討論黃柏為常用中藥，鹽酸小檗堿為主要有效成分之一，其含量與黃柏的質(zhì)量親密相關(guān)。小檗堿含量的測定方法有薄層掃描法6、紫外分光光度法7和高效液相色譜法8等。本文選用離子對高效

9、液相色譜法測定鹽酸小檗堿的含量，0.1%的十二烷基磺酸鈉為反離子，能對待測成分起到改仁慈好的別離效果。本實驗以鹽酸小檗堿為指標，測定經(jīng)150350Pa不同壓力水射流處理后的黃柏醇提取液。結(jié)果說明：黃柏提取液經(jīng)超高壓水射流處理后，鹽酸小檗堿的含量均有不同程度的增加，以原液中鹽酸小檗堿含量36.7gg-1為100%計算，經(jīng)150，200，250，300Pa和350Pa超高壓力處理后的溶液中，鹽酸小檗堿含量分別增加了2.30%，5.29%，6.39%，8.43%和0.58%。在150300Pa超高壓范圍內(nèi)，隨著壓力上升，鹽酸小檗堿的含量依次升高，其原因可能是超高壓力破壞了與小檗堿結(jié)合的非共價鍵(氫鍵、離子鍵、疏水鍵等)9，小檗堿游離出來，且隨著壓力的增加，破壞程度增大，游離的小檗堿也就增多，因此測得的鹽酸小檗堿含量依次升高;也可能是與鹽酸小檗堿構(gòu)造相近的成分轉(zhuǎn)化而來。在350pa超高壓條件下，超高壓處理前后鹽酸小檗堿的含量無顯著性差異，原因可能是在350pa超高壓處理后，處理液的溫度迅速上升，由于游離態(tài)的小檗堿